一种用于敏感筛查包括芥末、芹菜和开心果在内的致敏食品的多重实时PCR技术

《Food Analytical Methods》：A Multiplex Real-Time PCR for the Sensitive Screening of Allergenic Foods, Including Mustard, Celery, and Pistachio

过敏原实时荧光定量PCR系统开发及验证，采用多拷贝靶序列提升检测灵敏度至1mg/kg，通过实验室间验证确认方法特异性及准确性，适用于芥菜、芹菜、开心果等10种过敏原的快速筛查。

摘要

本研究的目的是开发一种灵敏、可靠且成本效益高的实时聚合酶链反应（qPCR）系统，用于分析致敏性食品成分，包括白芥菜（Sinapis alba）、黑芥菜或褐芥菜（Brassica nigra, B. juncea）、芹菜（Apium graveolens）和开心果（Pistacia vera）。这项研究的主要目标是提高过敏患者对食品中未声明的致敏成分或污染物的防护能力。通过使用多拷贝目标序列，该方法在检测各种目标成分时表现出优异的灵敏度，检测限约为每千克食品中1毫克致敏成分（相当于每千克食品中不到0.5毫克的相应蛋白质）。通过分析模型食品基质，在实验室内部和实验室之间均证实了该方法的优异灵敏度。实验样品中添加了浓度在1至20毫克/千克范围内的致敏成分。特异性测试结果显示，该方法与其他植物之间没有交叉反应。结果评估表明，即使在添加的致敏成分含量非常低的情况下，也能对大多数模型食品样本进行定量分析。该方法适用于白芥菜、黑芥菜、褐芥菜、芹菜和开心果中致敏成分的定量筛查，尤其是能够检测到极微量的致敏成分。目前已有了一套完整的致敏成分分析方法，其中包括另外两种多重实时PCR技术[16]。这套方法不仅成本低廉、检测速度快，而且能够覆盖多种致敏成分，总共可检测10种不同的致敏物质。此外，样品测量结果的平均值表明，如果已知致敏成分的来源，还可以利用这些数据来估算其浓度，例如用于方法的校准。小规模实验室间测试的结果表明，该方法也适合进一步开展合作研究。