《Journal of Bioscience and Bioengineering》：Preferential correction of target genes by 5′-tailed duplexes with an antisense editor strand
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基因编辑工具TD（由编辑链E和辅助链A构成）在人类U2OS细胞中对8个转录靶基因（包括WRN基因）的编辑效率研究。实验表明反义E链TD较 sense E链TD具有更高的基因校正效率，且转录影响微弱。
加藤泰基（Taiki Kato）|川井英彦（Hidehiko Kawai）|上津保亮太郎（Ryotaro Kamitsubo）|天崎光（Hikaru Amazaki）|平田文美（Fumie Hiraga）|神谷宏之（Hiroyuki Kamiya）
日本广岛大学生物医学与健康科学研究生院，地址：日本广岛市南区霞见1-2-3，邮编734-8553
在DNA水平上修复突变基因有望治愈遗传性疾病和癌症。研究人员开发了一种带有约80个碱基的编辑链（E链）和35个碱基的辅助链（A链）的双链结构（TD），以实现无需人工核酸酶的基因编辑。E链包含正常的（或所需的）基因序列，而A链可以与E链的3′端区域杂交。本研究探讨了TD在基因编辑中的极性依赖性。针对包括WRN基因（Werner综合征相关基因）在内的8个目标转录基因，设计了正义链和反义链的TD，并将这些TD与目标质粒DNA共同转染到人类U2OS细胞中。结果表明，含有反义链的TD比含有正义链的TD在基因编辑方面更有效。不过，转录对基因编辑效率的影响很小。这些结果表明，含有反义链的TD比含有正义链的TD更具编辑优势。
部分内容摘录
质粒及质粒构建
用于实验的基因编辑质粒包含mPlum基因和绿色荧光缺陷的Y65H突变copGFP基因，两者通过T2A肽编码序列连接（图1B）；或者包含mPlum基因和野生型copGFP基因，两者通过一个包含无义密码子的111个碱基序列连接（该序列位于T2A肽编码序列的上游，见图1C和表1）。所有目标质粒均基于pcDNA4/TO/myc-His哺乳动物表达载体构建（Thermo Fisher公司提供）。无需退火的完全活性TD制备
TD的E链和A链设计为在E链的3′端区域形成双链结构（图1A）。首先，我们研究了多种TD制备条件。实验使用的目标基因是copGFP基因，该基因在65位点发生单碱基替换，导致基因失活：原始基因中的TAC（酪氨酸密码子）被替换为CAC（组氨酸密码子，见图1B）。我们之前的研究表明，含有反义链的TD在基因编辑中效果更佳。讨论
在本研究中，我们扩展了利用由两条合成ODN组成的TD进行基因编辑的研究。结果显示，在所检测的8个基因中，有7个基因用反义TD编辑的效果优于正义TD（见图4），这同样适用于copGFP和mEGFP基因（参考文献26,27）。反义TD相对于正义TD更易发挥编辑作用的现象类似于转录依赖性编辑机制。然而，NRAS基因的编辑效率在两种TD之间没有显著差异。CRediT作者贡献声明
加藤泰基（Taiki Kato）：撰写、审稿与编辑、数据分析。川井英彦（Hidehiko Kawai）：撰写、审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、研究指导、数据管理、概念构思。上津保亮太郎（Ryotaro Kamitsubo）：研究工作。天崎光（Hikaru Amazaki）：研究工作。平田文美（Fumie Hiraga）：研究工作。神谷宏之（Hiroyuki Kamiya）：撰写、审稿与编辑、初稿撰写、研究指导、资金筹措、概念构思。致谢
本研究部分得到了日本学术振兴会（JSPS）的资助（项目编号：JP17K19491）。部分研究工作是在广岛大学辐射生物学与医学研究所（RIRBM）的联合使用/研究中心计划下完成的。
