《MEDIATORS OF INFLAMMATION》：Electroacupuncture Ameliorates Cyclophosphamide-Induced Ovarian Impairment in Rats With Diminished Ovarian Reserve and is Associated With Th17/Treg-Related Immune Modulation
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为探索改善卵巢储备功能减退(DOR)的安全有效策略，研究人员开展了一项针对电针(EA)疗法的基础研究。结果表明，在环磷酰胺(CTX)诱导的DOR大鼠模型中，电针干预能够改善动情周期、卵巢形态与卵泡发育，同时减轻颗粒细胞凋亡相关变化，并与系统性及局部Th17/Treg免疫平衡的恢复密切相关。该研究为电针作为一种非药物疗法改善DOR提供了新的实验依据。
在生殖医学领域，卵巢储备功能减退(Diminished Ovarian Reserve, DOR)正成为一个日益严峻的挑战，尤其是在高龄女性中。这不仅导致自然受孕困难，也是辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology, ART)失败的重要原因之一。目前，针对DOR的治疗手段，如激素疗法、抗氧化剂补充等，其长期疗效有限且可能伴随副作用。因此，寻找更安全、有效的干预策略，已成为临床和基础研究共同关注的热点。中医传统疗法电针(Electroacupuncture, EA)作为一种多靶点的非药物干预手段，在调节内分泌和免疫系统方面展现出潜力，但其在DOR中的具体作用效果及机制，特别是与免疫稳态和卵泡微环境的关系，尚不明确。
为了回答上述问题，一篇题为“Electroacupuncture Ameliorates Cyclophosphamide-Induced Ovarian Impairment in Rats With Diminished Ovarian Reserve and is Associated With Th17/Treg-Related Immune Modulation”的研究论文发表在《MEDIATORS OF INFLAMMATION》期刊上。该研究探索了电针在环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)诱导的DOR大鼠模型中的保护作用及其潜在机制，重点关注了颗粒细胞凋亡相关变化以及辅助性T细胞17(T helper 17, Th17)与调节性T细胞(regulatory T, Treg)相关的免疫调节。
研究人员采用了环磷酰胺诱导的DOR大鼠模型，设立正常组、模型组、电针干预组和假电针组。电针选取了任脉的关元(CV4)和气海(CV6)穴位进行干预。研究通过动情周期监测、卵巢和脾脏称重、血清激素[如抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)]和细胞因子检测、卵巢组织苏木精-伊红(H&E)染色进行卵泡计数和形态学分析。关键实验技术还包括：蛋白质印迹法(Western blotting, WB)检测卵巢和脾脏组织中多种蛋白表达；TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡；免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)和免疫荧光(Immunofluorescence, IF)对特定蛋白进行定位和半定量；流式细胞术(Flow Cytometry)分析脾脏中Treg和Th17细胞比例；以及RNA测序(RNA sequencing)对卵巢组织进行转录组学分析，以探索电针调控的信号通路。
3.1. EA改善了DOR大鼠的动情周期性、体重和器官指数
通过阴道涂片分析发现，DOR大鼠动情周期紊乱，动情间期延长。电针干预后，动情周期性得到部分恢复。同时，DOR大鼠的卵巢重量和脾脏重量均显著降低，而电针治疗缓解了这种下降趋势，使体重恢复至接近正常水平。假电针组则未见明显改善。
3.2. EA改善了DOR大鼠的卵巢卵泡发育和形态
组织学分析显示，DOR组大鼠的原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡和黄体数量均显著减少，闭锁卵泡数量增加。电针干预显著增加了发育中卵泡的数量，减少了闭锁卵泡。代表性H&E染色切片也证实，电针减轻了DOR导致的卵泡数量减少和形态破坏。
3.3. EA调节了DOR大鼠的血清激素水平和卵泡相关因子
血清检测发现，DOR组AMH和E2水平降低，LH、FSH及LH/FSH比值升高。电针干预后，AMH和E2有上升趋势（但未达统计学显著性），并部分缓解了促性腺激素的异常升高。蛋白质印迹和免疫组化结果显示，DOR组卵泡相关蛋白BMP15、GDF9以及卵泡刺激素受体(FSHR)的表达下调，而电针恢复了这些关键因子的表达。
3.4. EA减轻了颗粒细胞凋亡并恢复了增殖能力
TUNEL检测显示DOR卵巢颗粒细胞凋亡增加，电针显著降低了凋亡细胞数量。免疫组化显示DOR组细胞增殖标记物Ki67表达减少，电针使其恢复。蛋白质印迹分析表明，DOR组抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，促凋亡蛋白Bax表达上调，电针逆转了这一变化。然而，凋亡执行蛋白cleaved Caspase-3在DOR组升高，电针并未使其发生显著改变，提示电针的抗凋亡作用可能作用于上游通路。
3.5. EA恢复了脾脏中的Th17/Treg免疫平衡
流式细胞术分析显示，DOR大鼠脾脏中Treg细胞减少，Th17细胞增加，电针干预逆转了这一失衡。蛋白质印迹结果一致表明，DOR组脾脏中Th17相关蛋白（IL-6、TNF-α、IL-17A、RORγt、IL-1β）表达升高，Treg相关蛋白（IL-10、TGF-β1、FOXP3）表达降低，而电针使这些蛋白表达恢复正常。
3.6. EA调节了卵巢组织中的Th17/Treg相关蛋白
免疫荧光和蛋白质印迹分析证实，在卵巢局部也存在类似的免疫失衡。DOR组卵巢中Th17细胞关键转录因子RORγt表达增加，Treg细胞关键转录因子FOXP3表达减少，电针干预逆转了这些变化。
3.7. EA恢复了血清中Th17/Treg相关细胞因子的平衡
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子发现，DOR组促炎细胞因子IL-6和IL-17水平升高，而抗炎细胞因子IL-10和TGF-β水平降低。电针治疗使这些细胞因子水平趋于正常。
3.8. EA调节了免疫相关基因表达和信号通路
对卵巢组织的RNA测序分析显示，电针引起了大量的差异表达基因。基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析表明，这些差异基因显著富集于免疫相关过程，如抗原处理和呈递、T细胞受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Th17细胞分化等通路。
结论与讨论
本研究表明，电针能够改善环磷酰胺诱导的DOR大鼠模型的卵巢功能损伤，其保护作用与改善卵泡发育、减轻颗粒细胞凋亡相关变化以及调节Th17/Treg免疫平衡密切相关。电针不仅部分恢复了卵巢的形态和功能指标，如动情周期、卵泡数量及部分血清激素水平，更重要的是，从脾脏、血清到卵巢局部多个层面，将失衡的Th17/Treg免疫轴导向平衡。转录组学分析进一步从分子层面支持了电针的免疫调节作用，揭示了其对T细胞介导的免疫信号通路的广泛影响。
这项研究的意义在于，它从免疫微环境的角度，为电针治疗DOR提供了新的实验依据和潜在的作用机制解释。研究结果提示，电针可能通过一种多靶点、系统性的方式，同时作用于卵巢局部（减轻颗粒细胞损伤）和全身免疫系统（恢复免疫稳态），从而实现对卵巢功能的保护。尽管研究存在一些局限性，例如内分泌指标（AMH、E2）的恢复未达统计学显著水平，凋亡下游指标cleaved Caspase-3未改变，且免疫调节与卵巢保护之间的因果关系有待进一步验证，但这项研究无疑为将电针作为一种有前景的非药物辅助疗法用于DOR的临床管理提供了有力的前期基础。未来研究需要在更精细的细胞模型、更直接的机制验证实验以及设计严谨的临床试验中继续深入探索。
