通过病毒诱导的基因沉默技术，靶向破坏与液泡分选蛋白及凋亡抑制基因相关基因，能够改变柑橘木虱（Diaphorina citri）的存活率和繁殖能力

《Pest Management Science》：Targeted disruption of vacuolar-sorting protein and inhibitor of apoptosis genes via virus-induced gene silencing alters survival and reproduction of Diaphorina citri

茶小绿叶蝉（D. citri）传播的柑橘黄龙病（HLB）缺乏根治方法，本研究通过病毒诱导基因沉默（VIGS）技术靶向沉默DcSnf7和DcIap5基因，证实单独沉默这两个基因可提高若虫死亡率，而联合沉默效果更显著。实验显示，携带 truncated DcSnf7或DcIap5基因的CTV病毒载体接种柑橘植株后，茶小绿叶蝉各虫期死亡率、繁殖力及寿命均显著降低，其中双基因沉默处理效果最佳。

　　

摘要

背景

全球柑橘产量受到一种名为“柑橘黄龙病”（HLB）的毁灭性疾病的严重影响。导致HLB的病原体通过亚洲柑橘木虱（Diaphorina citri）在树木之间传播，这种木虱是主要的传播媒介。目前，尚无治愈HLB的方法，管理措施主要依赖于杀虫剂的使用。然而，人们越来越需要寻找替代的、环境可持续的控制方法，例如RNA干扰（RNAi）。

结果

我们研究了通过靶向两个基因vacuolar-sorting protein/sucrose non-fermenting protein 7（DcSnf7）和inhibitor of apoptosis 5（DcIap5）来沉默这些基因对D.citri死亡率的影响。最初，我们通过给D.citri喂食合成的双链RNA（dsRNA）来评估基因沉默的效果。为了进一步在体内评估基因抑制效果，我们采用了病毒诱导的基因沉默（VIGS）方法，通过柑橘植物将RNAi传递给木虱。单独抑制DcSnf7和DcIap5会导致若虫死亡率升高；然而，使用双重dsRNA处理同时抑制这两个基因并没有产生叠加效果。我们改造了传染性Citrus tristeza virus（CTV-T36）克隆，使其能够分别或同时携带截短的DcSnf7和DcIap5基因。在连续两代中，接种了CTV-tSnf7、CTV-tIap5或组合构建体CTV-tSnf7–tIap5的植物上饲养的D.citri在所有生命阶段的死亡率均有所增加，繁殖能力和生育力也显著降低，与在未感染或接种了CTV-wt的对照植物上饲养的昆虫相比尤为明显。此外，这些经过VIGS处理的植物还缩短了D.citri的寿命。值得注意的是，在所有实验中，组合构建体CTV-tSnf7–tIap5对D.citri的存活率、繁殖能力、生育力和寿命的降低效果最为显著，超过了单个基因构建体的效果。

结论

我们的结果表明，利用VIGS介导的RNAi沉默D.citri的关键基因是一种有前景的控制策略，可能在HLB的管理中发挥作用。? 2026 化学工业学会。

利益冲突

作者声明与本文无关的利益冲突。

数据可用性声明

支持本研究所有发现的相关数据均包含在手稿中。研究过程中生成的其他数据集可应合理要求向通讯作者索取。