荧光偏振酶测定法：一种基于槲皮素与α-淀粉酶相互作用来定量槲皮素的新方法

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Fluorescence polarization enzyme assay: a novel approach for the quantification of quercetin based on its interaction with α-amylase

荧光偏振酶反应法（FPEA）开发及槲皮素检测应用，采用α-淀粉酶替代单克隆抗体，实现5分钟快速检测，灵敏度达1.7 mg/mL，特异性优于液相色谱法，适用于洋葱皮和膳食补充剂的高含量槲皮素质量控制。

　　

摘要

传统的荧光偏振免疫测定（FPIA）需要使用昂贵的单克隆抗体。本研究开发了一种成本效益更高的荧光偏振酶测定方法（FPEA），用于检测槲皮素，该方法使用α-淀粉酶作为识别剂，其成本远低于传统方法。基于与荧光玉米赤霉烯酮示踪剂的竞争性结合，该测定方法的检测限为1.7 mg/mL，工作范围为2.3–6.4 mg/mL，并且分析可在5分钟内完成，相比传统的HPLC方法（约20分钟）大幅节省了时间。该方法具有高特异性，仅对芦丁有极小的交叉反应性（0.1%），而对二氢槲皮素、没食子酸和阿卡波糖没有交叉反应。FPEA分析得到的槲皮素与α-淀粉酶的结合亲和常数为3.9 × 10³ L/mol。将该方法应用于洋葱皮提取物和膳食补充剂中，得到的结果与二极管阵列检测（LC-DAD）液相色谱法的结果一致。所提出的FPEA为高槲皮素含量样品的质量控制提供了一种快速、简单且经济的替代方案。

图形摘要

此图片的替代文本可能是通过人工智能生成的。

传统的荧光偏振免疫测定（FPIA）需要使用昂贵的单克隆抗体。本研究开发了一种成本效益更高的荧光偏振酶测定方法（FPEA），用于检测槲皮素，该方法使用α-淀粉酶作为识别剂，其成本远低于传统方法。基于与荧光玉米赤霉烯酮示踪剂的竞争性结合，该测定方法的检测限为1.7 mg/mL，工作范围为2.3–6.4 mg/mL，并且分析可在5分钟内完成，相比传统的HPLC方法（约20分钟）大幅节省了时间。该方法具有高特异性，仅对芦丁有极小的交叉反应性（0.1%），而对二氢槲皮素、没食子酸和阿卡波糖没有交叉反应。FPEA分析得到的槲皮素与α-淀粉酶的结合亲和常数为3.9 × 10³ L/mol。将该方法应用于洋葱皮提取物和膳食补充剂中，得到的结果与二极管阵列检测（LC-DAD）液相色谱法的结果一致。所提出的FPEA为高槲皮素含量样品的质量控制提供了一种快速、简单且经济的替代方案。

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