在不同生殖阶段施用补充氮肥对大豆产量和种子成分的影响

《Journal of Agriculture and Food Research》：Impact of supplemental nitrogen application at different reproductive stages on soybean yield and seed composition

　　马尼什·潘迪特（Manish Pandit）| 安詹·蒂米尔西纳（Anjan Timilsina）| 西奥内斯特·恩扎拉米亚马纳（Theoneste Nzaramyimana）| 苏拉杰·乌帕达亚（Suraj Upadhaya）| 阿努杰·奇卢瓦尔（Anuj Chiluwal）
美国肯塔基州立大学农业、健康与自然资源学院

**摘要**
美国大豆种子蛋白质含量的下降引发了对原始大豆和大豆粕质量的担忧。这一担忧增加了人们对提高种子蛋白质含量的替代方法的兴趣。先前的研究表明，在种子灌浆阶段氮素限制是导致种子蛋白质含量减少的主要原因之一，并且报道了在高产或有利环境下补充氮素的好处。然而，这些研究评估的是分次或重复施用氮素，而不是单次施用。在这项研究中，通过为期两年的田间实验，评估了在不同生殖生长阶段单次补充氮素是否能够改善大豆的生长、产量和种子组成。实验使用了第四成熟组的大豆品种，采用随机完全区组设计（Randomized Complete Block Design），进行了六次重复实验，设置了六种处理方案：不施用氮素（对照组）以及在R1、R3、R5、R5+1周或R5+2周各施用80公斤氮素/公顷。在整个生长季节定期测量植株生长和生理特性，并记录了最终籽粒产量、百粒重以及种子蛋白质和油脂含量。结果表明，氮素施用并未显著影响植株生长、生理特性、籽粒产量、籽粒重量和种子组成。总体而言，在干旱影响且产量较低的条件下，单次施用80公斤氮素/公顷并未对大豆产量或种子组成产生一致的好处。这些发现仅限于实验所测试的条件，不能排除在高产管理或分次施用氮素情况下可能产生的效果。

**1. 引言**
大豆（Glycine max L. Merr.）因其高蛋白质和油脂含量而成为世界上最宝贵的作物之一。从种子中提取油脂后得到的大豆粕（Soybean Meal, SBM）是蛋白质的主要来源，常被视为家禽和牲畜饲料的黄金标准[1]。大豆粕对大豆生产的经济价值贡献巨大（约占60%），并占全球蛋白质粕消费量的很大比例（约69%[2,3]）。在美国，家禽和养猪业大量消费大豆粕[3,4]。由于大豆粕的质量很大程度上取决于种子蛋白质含量，美国国家油籽加工协会（NOPA）规定了最低蛋白质含量标准为44%，水分含量为12%[5]。要达到这一标准，大豆种子必须含有至少34-35%的蛋白质，而美国的平均油脂含量为18-19%[2]。然而，当前的大豆生产趋势显示，虽然全国产量长期增长，但蛋白质含量却呈下降趋势，这引发了人们对能否满足饲料质量标准的担忧[6]。
这种下降部分归因于大豆研究和育种工作更加强调产量提升，而忽视了种子质量[7]。此外，转基因高产大豆品种的广泛采用也被认为是导致美国产量与蛋白质之间权衡的一个因素[8]。在美国不同地区，大豆蛋白质含量也存在差异，北部地区的蛋白质含量较低，甚至低于优质大豆的最低要求[6,9]。蛋白质含量的下降还伴随着必需氨基酸的减少，从而降低了大豆粕的质量。这对生产者和饲料加工商来说是一个紧迫的问题，需要采取措施维持或提高蛋白质含量。
有一种解释认为，这些现代高产品种中蛋白质含量较低的原因是在关键种子生长和发育阶段氮素供应不足[10, [11], [12]]。虽然大豆可以通过生物固氮（BNF）固定大气中的氮素，但在生殖发育期间作物对氮素的需求达到高峰，而此时生物固氮作用开始减弱，可能无法满足作物的需求，从而导致种子大小和蛋白质含量下降[13, [14], [15]]。在高产环境下，土壤中的矿质氮大多被消耗殆尽，生物固氮作用无法满足种子灌浆期间的氮素需求，从而导致种子中蛋白质积累不足。多项研究表明，施用氮素可以提高产量或种子蛋白质含量，但效果因环境、氮素施用量和管理策略的不同而有所差异[10, [11], [12], [16], [17], [18], [19], [20]]。这些发现增加了在作物对氮素需求最大的时期补充氮素的兴趣。
由于早期施用氮肥会抑制根瘤形成并减少生物固氮的贡献，人们开始关注在生殖阶段施用氮素，以期在不干扰生物固氮作用的情况下改善种子组成[14,18,21]。然而，对晚季氮肥施用的反应并不一致，似乎强烈依赖于产量潜力、环境条件、氮素施用量和施用策略。先前的研究评估了分次或重复施用氮素的情况，以及灌溉系统或高产环境下的效果，因此难以确定在干旱条件下单次施用氮素是否能产生类似的效果。因此，本研究的目的是在肯塔基州进行为期两年的田间实验，评估在不同生殖阶段单次补充氮素是否会影响大豆的生长、生理特性、产量和种子组成。

**2. 材料与方法**
2.1. 实验地点
实验在美国肯塔基州弗兰克福特的肯塔基州立大学哈罗德·R·本森研究与示范农场（Harold R. Benson Research and Demonstration Farm）进行（坐标：38.16°N, 84.90°W，海拔250米）。2024年的总降水量为307.64毫米，2025年为450.68毫米；平均每日温度分别为13.6°C至29.2°C（肯塔基州气象站数据）。实验地点的土壤为排水良好的麦卡菲粉壤土（McAfee silty loam），坡度为6-12%。种植前对土壤进行了分析，并添加了推荐的肥料以维持最佳pH值。一些重要的土壤参数见表1。除指定的实验处理外，其他任何阶段均未施用氮肥。由于该田地连续种植大豆，未额外施用根瘤菌接种剂。实验在干旱条件下进行，未提供额外灌溉。害虫和杂草管理遵循当地标准方法，使用苗前除草剂并在需要时使用苗后除草剂。实验地点代表了该地区的典型干旱大豆生产环境。

**表1. 2024年和2025年实验地点的土壤特性**
| 土壤特性 | 2024年 | 2025年 |
|-----------------|------------|------------|
| pH值 | 5.26 | 6.21 |
| 总氮（%） | 0.20 | 0.14 |
| P（kg/ha） | 328.45 | 238.83 |
| K（kg/ha） | 185.46 | 143.56 |
| Ca（kg/ha） | 524 | 229.43 |
| Mg（kg/ha） | 450.15 | 314.79 |
| Zn（kg/ha） | 2.09 | 1.09 |
| 有机质（%） | 3.22 | 2.14 |
| 阳离子交换容量（meq/100g） | 16.29 | 13.77 |

2.2. 实验设计与处理
实验采用随机完全区组设计（RCBD），设置六个区组作为六个重复实验。每个实验区组包含五种不同的氮素施用处理和一个不施氮的对照组，各区组内随机分配处理。实验选择的大豆品种为‘PB4424’（Partners Brand Seed Co., LLC），这是一种适应该地区的第四成熟组全季品种，具有无限生长习性和高产量潜力。每年5月中旬按常规播种密度（每平方米35粒种子）进行播种。每个小区包含五行，行距为0.38米，小区面积约为11平方米。采用传统耕作方式，使用播种机播种。通过收割中间三行（长度10英尺，即3.048米）来估算籽粒产量，每小区覆盖面积约为3.483平方米。
六种处理方案包括五种不同的氮素施用方式和一个不施氮的对照组。每种处理方式在特定的生殖生长阶段进行一次氮素施用：R1阶段（开始开花）、R3阶段（开始结荚；任意四个节位上的荚长达到5毫米）、R5阶段（开始结籽；任意四个节位上的籽长至少3毫米）、R5+1周和R5+2周，代表逐渐延后的种子灌浆阶段。对照组在整个生长季节均未施用氮肥。使用的氮肥量为80公斤/公顷。氮肥以颗粒尿素（46-0-0）的形式，在指定时间均匀撒在小区行间。手工施用以确保处理时间的准确性和小区内的均匀分布，尽管这种方法主要用于实验控制而非商业应用。所有其他农艺管理措施在各处理组间保持一致。

2.3. 数据收集
在作物生长期间定期记录植株生长和生理参数。从处理开始之日起，每隔两周记录一次叶面积指数（LAI）、叶片叶绿素含量、气孔导度和荧光量子产量等生理参数。LAI使用Leaf Canopy Analyzer LAI-2200（Li-COR）测量，叶绿素含量使用SPAD 502 Plus（Konica Minolta）测量，荧光量子产量和气孔导度使用Li-600系统（Li-COR）测量。植株高度为植株基部到主茎顶端的距离。在R1和R6阶段采集生物量样本。每个小区收获三株植株并在65°C下干燥以估算干生物量。在R7/R8阶段记录最终植株高度和节位数。2024年和2025年，最终收获均于10月初使用联合收割机完成。收获的种子称重，并将籽粒产量调整至13%的水分含量[22]。同时记录百粒重。使用水分计（Perten AM 5200-A）测量种子水分含量。种子蛋白质和油脂含量通过近红外光谱法（NIRs/PerkinElmer DA 7250）分析。近红外光谱法是分析大豆种子组成的常用方法，已有研究证明其有效性，R2值范围为0.81至0.96[23,24]。因此，我们未对样本进行实验室分析以验证NIR分析结果，本研究未使用特定的仪器校准和验证统计方法。

2.4. 统计分析
收集数据后进行统计分析以确定处理效果。使用R版本4.4.1和lme4包进行线性混合模型分析[25]，以考虑两年间RCBD设计的重复性。对于最终收获性状（如产量和种子组成），模型包括处理（即不同的氮素施用时间）、研究年份及其交互作用作为固定效应。每年内的重复实验（区组）作为随机效应以解释田间变异。使用lmerTest包中的Satterwaithe方法进行III型方差分析来确定固定效应的显著性[26]。
对于在整个生长期间多次测量的生理参数，采用重复测量混合模型，将播种后天数作为固定因素，包括处理和年份的二元和三元交互作用。为考虑来自同一实验单元的重复测量的时间相关性，在模型中纳入小区ID作为随机效应。使用emmeans包估计处理均值。当ANOVA显示显著效应（p < 0.05）时，使用Tukey的诚实显著差异（HSD）进行均值分离。图形总结使用Sigmaplot（v 16.0）生成。

**3. 结果**
3.1. 植株生长和生理参数
两个生长季节中，大豆的生长和生理特性均受到年份和观测日期（播种后天数，DAP）的显著影响（表2）。处理×年份的交互作用对测量的生长和生理特性无显著影响；因此，除非另有说明，否则结果采用合并年份分析呈现。叶面积指数（LAI）受年份和DAP的显著影响（表2）。LAI随作物发育而增加，在生殖阶段达到峰值，随后在叶片干燥脱落时下降。氮素施用对LAI无显著影响（表2），且在不同采样日期间未观察到处理相关的差异（表2）。植株高度也受年份和DAP的显著影响（表2）。植株高度随DAP稳步增加。 neither treatment nor the treatment × DAP interaction significantly affected plant height (Table 2). 植物高度在氮肥处理组与对照组之间没有显著差异。叶绿素含量（SPAD值）随年份和年份与DAP的交互作用而显著变化，但各处理组之间没有统计学差异（表2）。气孔导度（gsw）和荧光量子产率受到年份、DAP以及年份×DAP交互作用的显著影响，但并未受到氮肥施用处理的显著影响（表2）。节数和生物量积累与氮肥施用处理无关（表2）。

表2. 分析方差（ANOVA）显示了处理对生长参数的影响。

| 特征 | 处理 | 高度 | LAI | 气孔导度 | 荧光量子产率 | 叶绿素含量 | 节数 | 生物量增加 |
|------------|------------|-----------|---------|----------|----------|----------|---------|
| Treatment | 0.990 | 0.950 | 0.765 | 60.959 | 0.842 | 20.115 | 50.788 |
| Year | <0.001 | 0.008 | <0.001 | <0.001 | <0.001 | 0.177 |
| -DAP | <0.001 | <0.001 | <0.001 | <0.001 | 0.228 | -- |
| Treatment:Year | 0.999 | 0.974 | 0.9428 | 0.9997 | 0.548 | 0.708 |
| -Treatment:DAP | 0.932 | 0.9816 | 0.8293 | 0.9158 | 0.415 | -- |
| Year:DAP | <0.001 | <0.001 | <0.001 | <0.001 | -- |
| Treatment:Year:DAP | 0.994 | 0.9958 | 0.9923 | 0.9997 | 0.259 | -- |

3. 大豆产量和种子组成
2024年和2025年的大豆籽粒产量在各年份之间没有显著差异，也没有受到氮肥施用的显著影响（表3，图1B）。

表3. 分析方差（ANOVA）显示了处理对产量和组成参数的影响。

| 特征 | 处理 | 产量 | 100粒种子重量 | 蛋白质% | 油脂% | 蛋白质产量 | 油脂产量 |
|------------|------------|-----------|---------|---------|---------|---------|
| Treatment | 0.198 | 0.1372 | 0.0452 | 0.1582 | 0.1954 | 0.2129 |
| Year | 0.220 | <0.001 | 0.0899 | <0.001 | 0.2549 |
| Treatment:Year | 0.6135 | 0.2284 | 0.7408 | 0.7358 | 0.6005 | 0.6248 |

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图1. 2024年和2025年实验中不同生长阶段氮肥施用对100粒种子重量（A）和产量（B）的影响。
100粒种子重量受到年份的显著影响，2024年的值高于2025年，但未受到氮肥施用的显著影响（表3）。100粒种子重量在所有处理组中相对稳定（图1A），表明氮肥施用对种子大小或物理特性没有影响。种子蛋白质浓度受年份影响（p < 0.1），而氮肥施用在多年平均值上有可测量的影响（表3）。处理×年份的交互作用不显著，因此可以综合年份进行解释。成对比较显示，在R5阶段施用氮肥可以获得最高的种子蛋白质浓度，这仅显著高于在R1阶段施用氮肥的情况（表3）。在两年中，R5阶段的施用显示出更高的平均蛋白质浓度（图2B）。油脂浓度受到年份的显著影响（p < 0.001），但未观察到氮肥施用的效果（图2A）。蛋白质和油脂产量在各处理组或年份之间没有显著差异（表3）。

4. 讨论
4.1. 植物生长和对补充氮肥施用的生理反应
在两个生长季节中，植物生长和生理参数主要受年份和作物发育进程的影响。对于测量的生长和生理参数，未观察到年份×处理的交互作用。在不同生殖生长阶段施用单剂量的氮肥对这些特征没有一致的影响。这些结果共同表明，生长、光合作用和气体交换动态主要受季节条件的影响，而非氮肥施用。2024年和2025年的降水模式（图3，图4）显示，在关键的生殖阶段，尤其是从结荚到种子充实和成熟期间，降雨量持续偏低。这种长期干旱模式可能限制了植物对补充氮的反应，并可能掩盖了处理对不同生长和生理特征的影响。

图3. 2024年的总日降水量与关键生长阶段的对应关系。
图4. 2025年的总日降水量与关键生长阶段的对应关系。

强烈的年份效应与大豆通过生物固氮（BNF）和内部氮转移来缓冲矿物氮波动的能力一致。在许多环境中，肥料氮可能部分替代生物固定的氮，而不是作为植物获取氮的额外来源[18,21]。众所周知，水分胁迫会限制大豆的的营养生长和光合作用[27]。这可能解释了我们在实验中观察到的年度间冠层相关特征的差异。这些反应与两个生长季节生殖阶段明显的降水对比和长期干旱情况相符。低降雨量可能减少了表面施用尿素的溶解，并增加了挥发损失，从而限制了作物对氮的吸收[28,29]。这种有限的反应与研究结果一致，即季节内或季节末施用氮肥对衰老和冠层发育的影响很小或不一致[30],[31],[32]。尽管延迟土壤或叶片施用氮肥可能会改变吸收效率并与固氮动态相互作用，但在田间条件下，生理反应通常非常微小且高度依赖于具体环境[14,33,34]。例如，Kubar等人[35]报告称，在四个阶段分次施用较高剂量的氮肥（75-300公斤/公顷）可以获得更高的生理反应，表现为更高的气孔导度、叶绿素含量和其他参数。这些条件与我们的研究中使用的单次施用策略有很大不同。同样，Zhang等人[36]在充分灌溉条件下施用150公斤/公顷的氮肥时观察到更高的LAI和气孔导度，这也代表了一个比当前实验的雨养条件更有利的环境。同样，播种期和R3、R5期分次施用氮肥相对于在R3期或作为基肥施用氮肥显著增加了LAI[37]。在我们的研究中，不同时间施用氮肥并未影响生物量积累，这与Schmitt等人的发现一致[38]。然而，Wingeyer等人[39]指出，在灌溉条件下施用后期氮肥可以增加生物量，强调了水分可用性在调节后期氮反应中的重要性。在本研究中，氮肥施用也并未影响节数。这与在灌溉系统中施用分次补充氮肥后节数增加的报道不同[40]。总体而言，这些结果表明，补充氮肥对大豆生长和生理特征的影响在其他限制因素（尤其是水分限制）较少的情况下最为明显。在干旱条件下，氮的吸收和同化减少可能会进一步限制作物对肥料氮的反应[41]。

4.2. 对补充氮肥施用的产量反应
籽粒产量和其他产量组分未受到氮肥施用的显著影响，且处理效应在不同年份之间也不一致，这表明还有其他因素影响了这一趋势。本实验中所有处理的平均产量为每公顷2.64吨，低于典型的高产大豆品种的产量。这一相对较低的产量可能反映了生殖发育期间的水分胁迫。已知水分胁迫会降低大豆的产量、种子大小和种子数量[42]。在本实验的条件下，氮肥施用既没有增加也没有减少籽粒产量。这种无反应与先前的研究结果一致，即大豆对氮肥的产量反应通常较小、不一致，并且强烈依赖于环境和产量潜力[43,44]。这也表明，在雨养和低产条件下，单次生殖期氮肥施用可能不足以增加产量。多站点研究表明，当出现正向产量反应时，更可能发生在高产环境中。在低产环境中，生物固氮可能足以满足作物的氮需求，从而降低了对肥料氮的反应概率[18,21,43]。评估中期和生殖期氮肥施用的先前研究报道了不同的产量反应。这种变异性与生物固氮在许多田间条件下通常能满足作物氮需求的观点一致[38,45,46]。一些研究报道了后期氮肥施用的产量增加，但这些反应通常涉及与本实验不同的环境条件[12]。在同一研究中，种子重量未受到氮肥施用的显著影响，这与我们的结果一致[12]。当观察到产量效益时，通常发生在灌溉或有利的条件下，此时水分限制可能使氮成为次要的限制因素[47,48]。大豆的水分胁迫条件可能会缩短成熟期，加速衰老并减少种子充实时间[49]。此外，最近的研究表明，早期种子发育阶段对胁迫引起的同化限制非常敏感[50]。这解释了为什么在我们的实验条件下，补充氮肥并未提高生产力。Wingeyer等人[39]同样观察到在灌溉条件下，氮肥施用后籽粒产量、种子重量和种子氮含量较高，而在雨养条件下则没有观察到这种效果。本研究中的长期低降雨期可能通过限制氮的吸收和生物固氮在高峰需求期限制了产量反应。这表明，补充氮肥的好处不仅取决于施用时间，还取决于环境胁迫的严重程度[18,44]。我们的结果与Gan等人的研究结果不同[51]，他们在完全灌溉（1040毫米水分供应）的条件下进行了类似的实验，并报告在V2或R1期施用氮肥后产量较高，但在R3或R5期施用氮肥时则没有效果。同样，Moreno等人[52]报告在播种期和R4期分次施用氮肥后产量增加。Cordova等人[53]也在较高氮肥施用量（135公斤/公顷）下报告了产量增加，尽管种子重量没有变化。相比之下，我们的结果与Vonk等人的发现一致[44]，他们在9个地点中有8个地点施用氮肥后没有观察到产量反应。Gutiérrez-Boem等人[31]也观察到在R3或R5期施用氮肥后没有产量反应。综上所述，这些发现支持了这样的观点：在低产（<4.5吨/公顷）的大豆环境中，补充氮肥的好处可能不明显，尤其是在存在其他限制因素（尤其是水分限制）的情况下[18]。

4.3. 对补充氮肥施用的种子组成反应
种子蛋白质浓度对氮肥施用的反应有限，其中R5期施用产生的数值最高。相比之下，种子油脂浓度随年份变化，但不受氮肥处理的影响。这种模式在生理上是合理的，因为作物在R5期后的氮需求增加。这部分需求通过生物固氮得到满足，而生物固氮通常在R3期达到峰值，随后在种子充实期间下降。因此，接近种子充实期的氮肥施用可能更有利于支持更高的蛋白质合成，而早期施用可能会抑制结瘤和自然固氮[38,47]。肥料氮还会减少生物固氮对总植物氮积累的贡献[14]。这可能部分解释了我们在研究中早期氮肥施用缺乏反应的原因。后期施用的有限反应也可能反映了环境限制，特别是在生殖发育期间的降雨量减少[43]。在水分不足的条件下，处理间的种子组成差异变得微小且不一致。先前的元分析表明，水分胁迫会降低大豆种子中的蛋白质和油脂总量[20]。此外，在许多环境中，蛋白质百分比的任何小幅增加通常会被油脂浓度的下降所抵消[20]。这些发现表明，像水分胁迫这样的环境因素对大豆种子组成的影响大于氮肥管理的影响[20]。我们在研究中观察到的这种有限反应与几项先前的研究结果一致。例如，在R3或R5期添加氮肥未能增加种子蛋白质，即使它成功提高了土壤中的氮可用性[31]。Schmitt等人[38]也报告称，尽管土壤硝酸盐含量增加，氮肥对种子组成没有影响。在干旱/雨养条件下，Wingeyer等人[39]也报告氮肥施用后种子蛋白质没有增加，与未施肥的植物相比。这些发现与广泛的证据一致，即种子蛋白质和油脂对氮肥的反应通常是不一致的、较小的或不存在的[46],[54],[55],[56]。因此，在干旱条件下，处理反应不明显并不令人意外，因为水分限制限制了植物吸收和利用养分的能力[57]。R5期施用氮肥后观察到的较高蛋白质浓度与Chiluwal等人的发现方向一致[12]。然而，正如Assefa等人[58]所指出的，整体生长环境对组成有重大影响。在某些特定环境中，分次施用晚季氮肥（N）可以提高种子的蛋白质浓度，尽管这种做法并未提高产量，反而进一步抑制了植物中的生物固氮（BNF）作用[59]。总体而言，本研究中观察到的蛋白质浓度略有上升的趋势与现有文献一致，但这一趋势主要受到环境条件和氮源动态的影响[13,59]。在解读研究结果时，需要考虑到该研究存在一些局限性。实验在单一地点进行，采用雨养条件，使用单一大豆品种和单一氮肥施用量，并在不同生殖阶段进行一次性施用，没有采用分次施用氮肥的处理方式。因此，结果应在所测试的管理条件下进行解释，不能直接推广到灌溉系统、其他品种、不同的氮肥施用量或分次施用策略。此外，该研究缺乏对生物固氮抑制作用、根瘤形成情况、氮吸收效率以及整个生长季节土壤氮动态的测量数据，这限制了对补充氮是否无法被植物利用，还是仅仅替代了生物固定的氮的机制性解释。

**结论**
在两个生长季节中，每公顷施用80公斤氮肥并未显著影响谷物产量、百粒重或大多数测量的生长和生理特性，与不施用氮肥的对照组相比没有差异。谷物产量范围为2.21吨/公顷至3.07吨/公顷，但这些差异在统计上与氮肥施用处理无关。虽然在R3阶段施用氮肥时产量数值达到最高，但与其他处理组没有显著差异。氮肥施用对蛋白质浓度有轻微影响，最高值出现在R5阶段，仅与R1阶段的氮肥施用处理有显著差异。种子油浓度主要受年份影响，不受氮肥施用影响。

总体而言，在严重干旱和低产量条件下（≤2.64吨/公顷），在生殖阶段一次性施用80公斤氮肥并未改善大豆产量或种子成分。这些发现并不排除在高产量、灌溉或水分充足的条件下的潜在益处，也未涉及分次施用策略。需要进一步在多种环境、品种和氮肥管理方法下进行研究，以准确判断晚季氮肥是否能在非胁迫条件下改善大豆的生长、产量或成分。

**作者贡献声明**
Manish Pandit：撰写 – 审稿与编辑、撰写 – 原稿、可视化、方法学、调查、数据分析、数据管理。
Anjan Timilsina：撰写 – 审稿与编辑。
Theoneste Nzaramyimana：撰写 – 审稿与编辑、监督。
Suraj Upadhaya：撰写 – 审稿与编辑、监督。
Anuj Chiluwal：撰写 – 审稿与编辑、验证、监督、项目管理、资金筹集、概念构思。

**资助**
本研究由美国农业部-NIFA 1890能力建设拨款（授予编号2023-38821-39960）和美国农业部-NIFA Evans-Allen拨款（访问编号7004460）资助，资助对象为肯塔基州立大学。