非洲核桃油与二十二碳六烯酸对7,12-二甲基苯[a]蒽诱导的雌性Wistar大鼠乳腺癌患者血液学指标及氧化应激标志物的比较效应

《Food Science & Nutrition》：Comparative Effect of African Walnut Oil and Docosahexaenoic Acid on Hematological and Oxidative Stress Markers of Female Wistar Rats With 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene-Induced Breast Cancer

　　**摘要**

本研究分析了非洲核桃油（AWO）对7,12-二甲基苯[a]蒽（DMBA）诱导的乳腺癌雌性大鼠的肿瘤大小、血液学指标和氧化应激标志物的影响，并将其与二十二碳六烯酸（DHA）进行了比较。18只患有肿瘤的大鼠被随机分为三组，每组6只：阴性对照组、阳性对照组和实验组。另外6只未患肿瘤的大鼠作为正常组。这四组分别每天通过灌胃给予蒸馏水（250 mg/kg）、DHA（125 mg/kg）或非洲核桃油（1000 mg/kg），持续28天。测量了肿瘤的大小，并在第29天对大鼠进行安乐死。收集血液样本，其中一部分用于制备血清。选取相关器官制备器官匀浆液，检测血液学指标。还对血清和器官匀浆液中的蛋白质及氧化应激标志物进行了分析。结果显示，阴性对照组的肿瘤大小显著大于DHA组（8.21 cm3）和AWO组（5.37 cm3，p < 0.001）。血液学研究数据显示，DHA和AWO油使白细胞数量增加了30.22%–88.83%，DHA使血小板数量增加了33.33%，AWO使血液中的平均红细胞血红蛋白增加了32.94%。与正常组相比，DMBA处理组的大鼠红细胞数量（2.08–3.82 × 1012/L）和血红蛋白水平（5.10–7.30 g/dL）显著降低（p < 0.001）。阴性对照组器官匀浆液中的蛋白质含量也显著低于其他组（0.16–2.92 g/dL vs ~1.44–4.88 g/dL，p < 0.01）。氧化应激标志物的分析显示，阴性对照组中的谷胱甘肽过氧化物酶、一氧化氮和过氧化氢酶活性较低，而超氧化物歧化酶活性和丙二醛水平较高。研究表明，非洲核桃油可以延缓肿瘤生长，保护血液学指标，并减轻乳腺癌大鼠的氧化损伤。

**1 引言**

癌症是一种以细胞无控制分裂和增殖为特征的疾病，可能会扩散到其他组织（Akhouri等人，2020年）。它是全球主要的死亡原因之一，2020年导致近1000万人死亡，其中肺癌、前列腺癌、结直肠癌、胃癌和肝癌是男性中最常见的癌症类型，而乳腺癌、结直肠癌、肺癌、宫颈癌和甲状腺癌则是女性中最常见的癌症类型（世界卫生组织，2022年）。乳腺癌是全球女性中最常诊断出的癌症，也是导致她们死亡的主要原因（Bray等人，2018年）。2022年，全球有230万女性被诊断出患有乳腺癌，67万人因此死亡（世界卫生组织，2022年）。根据Bray等人（2024年）的报告，全球新发癌症病例接近2000万例，死亡人数为970万例，其中肺癌和乳腺癌最为常见。Sung等人（2021年）预测到2050年癌症病例数将增加到3500万例。如果不采取行动，预计到2040年全球癌症发病率将上升49%，死亡率将上升62%（Cao等人，2021年）。在非洲，乳腺癌是女性死亡的主要原因，占所有癌症病例的28%，以及所有癌症相关死亡的20%（Ferlay等人，2019年）。2022年，喀麦隆记录了约198,553例新发乳腺癌病例和91,252例死亡病例（Bray等人，2024年）。乳腺癌的发病因素包括年龄、遗传因素、生殖问题、长期暴露于雌激素、不进行母乳喂养以及其他与生活方式相关的因素等。某些环境因素也会影响乳腺癌的发展，例如吸烟、烤肉或熏肉，以及其他致命的空气污染物，如多环芳烃（PAHs）等（Obeagu和Obeagu，2024年）。在PAHs中，7,12-二甲基苯[a]蒽（DMBA）是最常用的诱导大鼠癌症的物质（Tatar等人，2019年）。暴露于这种PAH会增加活性氧的产生，超过身体的抗氧化防御能力，导致生物大分子（脂质、蛋白质和DNA）受损，细胞功能障碍，细胞发育异常和炎症（Lai和Singh，2006年）。癌症与一些体内平衡和血液学变化有关，已知它会引起免疫反应，从而改变白细胞、红细胞、血红蛋白、中性粒细胞、淋巴细胞、血小板等血液学参数（Abbas等人，2024年；Berta等人，2024年）。氧化应激也被认为在癌症中起重要作用，通过引发和促进肿瘤生长来造成DNA分子损伤和突变。当活性氧浓度高时，癌细胞还会利用氧化应激来促进其生长和存活（Iqbal等人，2024年）。例如，乳腺癌与抗氧化酶活性改变和细胞氧化还原状态异常有关。此外，它还与细胞分化失调、过度细胞增殖和细胞凋亡不完全有关（Sahin等人，2011年）。高浓度的活性氧、DNA改变、抗氧化保护减少和脂质过氧化也与乳腺癌有关（Tas等人，2005年）。为了管理这种情况，已经使用了多种治疗方法，包括化疗、放疗和手术。然而，这些方法并非所有人都能获得，而且价格昂贵，并伴有各种副作用（Vanderpuye等人，2017年）。因此，人们越来越关注寻找自然方法来管理这种状况。在这方面，天然植物提取物、欧米伽-3脂肪酸（尤其是二十二碳六烯酸）以及其他来自植物或动物的功能性食品成分已被证明能有效管理和预防大鼠中的DMBA诱导的乳腺癌（Mvondo等人，2021年；Sahin等人，2011年；Manna等人，2011年；Akhouri等人，2020年）。Mvondo等人（2021年）报告称，Dacryodes edulis叶的水提取物可以抑制DMBA诱导的乳腺癌雌性大鼠的肿瘤生长。Akhouri等人（2020年）展示了Aegle marmelos果实提取物在DMBA诱导的乳腺癌大鼠中的治疗效果。Sahin等人（2011年）证明，番茄红素和染料木黄酮的组合对DMBA诱导的乳腺癌具有最大保护作用。多项研究也显示了特定欧米伽-3脂肪酸的抗癌症效果。欧米伽-3脂肪酸是多不饱和脂肪酸，对哺乳动物至关重要，已被证明对多种癌症类型具有积极作用（Khankari等人，2015年）。其中，来自鱼油和其他海洋来源的二十二碳六烯酸在癌症科学中最为著名，已被证明在体内和体外对乳腺癌、白血病、肝癌、前列腺癌、肺癌、子宫内膜癌和胃癌具有强大的抗肿瘤作用（Earl等人，2019年）。早期流行病学证据强烈表明，富含二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的鱼油与多种癌症的发病率较低有关（Emad等人，2022年）。Alqalshy等人（2022年）显示，二十二碳六烯酸对DMBA诱导的仓鼠口腔囊癌具有化学预防作用。Noguchi等人（1997年）证明了低剂量的二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸在大鼠DMBA诱导的乳腺癌中的化学预防潜力。尽管有许多关于二十二碳六烯酸抗癌特性的研究，但相对较少有研究探讨了来自植物的欧米伽-3脂肪酸（α-亚麻酸）或富含α-亚麻酸的植物油在DMBA诱导的大鼠模型中对癌症的治疗或预防效果。Zingue等人（2024年）报告称，Ricinodendron heudelotii种子油在类似更年期的条件下能有效预防乳腺癌。因此，探索更多可作为膳食补充剂的植物来源的欧米伽-3脂肪酸对于管理和预防乳腺癌及其相关生理变化非常重要。非洲核桃（Tetracarpidium conophorum）是一种非常规油籽，在喀麦隆每年8月至9月期间容易获得，通常煮熟或烤制后作为零食食用（Djikeng等人，2017年）。其种子含有55%–70%的可食用油。从非洲核桃种子中提取的油含有5.70%的饱和脂肪酸和84.80%的多不饱和脂肪酸，其中亚油酸（14.41%）和α-亚麻酸（70.39%）最为丰富（Ghomdim等人，2024年）。食用这种油与多种健康益处相关，包括改善肥胖、心血管疾病和2型糖尿病（Munteanu等人，2025年；Ghomdim等人，2024年；Douky等人，2025年）。Uhunmwangho等人（2022年）证明了含非洲核桃油的饮食对雄性大鼠前列腺癌的有效性。另一方面，Uhunmwangho等人（2022年）还证明，含有T. conophorum油的饮食显著延缓了3-甲基胆蒽诱导的雌性Wistar大鼠乳腺癌的进展。这种油的抗癌活性主要归因于其中高含量的α-亚麻酸（Yan等人，2024年）。研究非洲核桃油（来自喀麦隆产的坚果）通过灌胃给予DMBA诱导的乳腺癌雌性Wistar大鼠的效果非常重要，特别是对其肿瘤生长、血液学指标和氧化应激标志物的影响，因为这些指标在癌症中会发生变化。本研究旨在评估T. conophorum油与DHA相比，对7,12-二甲基苯[a]蒽（DMBA）诱导的乳腺癌雌性Wistar大鼠的肿瘤生长、血液学指标和氧化应激标志物的影响。

**2 材料与方法**

**2.1 材料**

7,12-二甲基苯[a]蒽和二十二碳六烯酸（粉末形式）购自Sigma-Aldrich（德国Starnberg）。所有其他溶剂和化学品均为分析级。非洲核桃（图1）于2024年9月从喀麦隆Melong Littoral地区的Essekou的一位农民处购买。

**2.2 方法**

**2.2.1 非洲核桃油的提取**

非洲核桃油的提取使用甲醇-氯仿-水（2:2:1）混合物进行（Bligh和Dyer，1959年）。首先用清水清洗核桃，去除碎屑、沙子和其他不需要的颗粒。然后剥去外壳并将核桃切成小块，再进行提取。称取约100克非洲核桃放入搅拌机中，加入200毫升甲醇，搅拌2分钟后加入100毫升氯仿。再搅拌2分钟后，再加入100毫升氯仿和100毫升蒸馏水。充分混合2分钟后，用细布过滤溶液并丢弃固体残渣。之后再用1号Whatman纸再次过滤。将得到的滤液倒入漏斗中，收集含有油和氯仿的混合物，然后在50°C真空条件下使用旋转蒸发器蒸发溶剂。提取出的油转移到深色玻璃容器中，并储存在-18°C的冷冻室中以备后续使用。

**2.2.2 动物实验**

**2.2.2.1 伦理许可**

所有动物的饲养和使用均符合国际动物使用标准指南。动物处理和护理的伦理许可来自布埃亚大学机构动物护理和使用委员会，许可编号为UB-IACUC No. 02/2025。

**2.2.2.2 动物饲料的制备**

标准饲料由玉米粉（36.7%）、小麦粉（36.6%）、骨粉（14.5%）、碎鱼（4.8%）、棕榈仁粉（7.3%）和碘化盐（0.3%）及维生素（0.01%）组成（Zingue等人，2024年）。

**2.2.2.3 动物分组和喂养**

本研究使用了56只6–9周大的雌性白化Wistar大鼠（体重55–60克）。实验前，大鼠在室温下的12小时光照-黑暗周期下适应7天，笼内提供锯末，并自由进食和水。其中50只大鼠通过腹腔注射10 mg/kg地西泮和50 mg/kg氯胺酮麻醉，然后通过皮下乳腺途径注射每公斤体重50 mg的DMBA（Zingue等人，2024年）诱导癌症。另外6只大鼠作为正常组。为防止感染，所有DMBA诱导的大鼠连续10天通过灌胃给予89 mg/kg阿莫西林，而正常组则给予蒸馏水。每隔2天对大鼠进行触诊，以检查肿瘤是否在发展。大约在第19周时，乳腺肿瘤开始出现并可以触碰到。有可触及肿瘤的大鼠（18只）被随机分为三组，每组6只，再加上一个正常组（6只），总共24只大鼠。每天使用碘伏和青霉素软膏清洁并处理大鼠的任何伤口。阳性对照组被给予二十二碳六烯酸（125 mg/kg）（El-Mesery等人，2009年），而实验组则通过灌胃每天给予T. conophorum油（1000 mg/kg），持续28天（表1）（Djikeng等人，2025年）。阴性对照组和正常组被给予水。每隔2天使用卡尺测量肿瘤大小，以检查肿瘤的缩小情况，并使用以下公式计算其体积（长度、宽度和高度）。在第28天，让大鼠禁食一夜，然后在第29天将其处死。

表1. 动物组分布和特征。

| 组别 | 特征 |
|------|---------------------------|
| 1（正常）| 接受蒸馏水的正常大鼠（250 mg/kg体重） |
| 2（阴性对照）| 接受蒸馏水的患癌大鼠（250 mg/kg体重） |
| 3（阳性对照）| 接受二十二碳六烯酸（125 mg/kg体重）的患癌大鼠 |
| 4（实验组）| 每天通过灌胃接受1000 mg/kg Tetracarpidium conophorum油的患癌大鼠 |

2.2.2.4 动物处死和样本收集
在让大鼠禁食一夜后，于第29天通过切开腹部动脉将其处死。在处死前，通过腹腔注射酮胺60 mg/kg和地西泮10 mg/kg进行麻醉。使用5 mL注射器通过心脏穿刺采集血液。一部分血液放入含有EDTA的试管中，用于分析血液学参数；另一部分血液放入不含EDTA的试管中，用于制备血清。血清通过3500 rpm离心15分钟获得。收集感兴趣的器官（心脏、肾脏、胰腺、大脑、乳腺肿瘤和肝脏），称重并用于制备器官匀浆。每隔2天测量肿瘤大小，以检查肿瘤的减少情况，并使用以下公式计算其体积（长度、宽度和高度）。

2.2.2.5 血液学标志物的测定
使用自动血液分析仪（SFRI H18 LIGHT auto Hematology Analyzer）分析血液样本。测定了以下标志物：白细胞、淋巴细胞、粒细胞、红细胞、血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白和血小板（Djikeng等人，2025年）。

2.2.2.6 血清和器官匀浆蛋白含量的测定
使用SGM试剂盒描述的液体试剂方法测定总蛋白。在试管中加入1000 μL试剂1，然后加入10 μL蒸馏水或样本或标准品。之后，混合样品并在37°C下孵育10分钟。记录样本（Ax）和标准品（As）在540 nm处的吸光度。总蛋白的计算方法如下：

2.2.2.7 氧化应激标志物的测定
分析收集的器官匀浆和血清中的氧化应激参数。超氧化物歧化酶（SOD）的测定方法遵循Oberley等人（1998年）的方法。丙二醛浓度按照Wilbur等人（1990年）的方法测定。一氧化氮水平按照Montgomery等人（1961年）的方法测定。过氧化氢酶活性按照Sinha（1972年）的协议进行评估。还原型谷胱甘肽过氧化物酶的测定方法遵循Ellman（1959年）的方法。

2.2.2.8 统计分析
数据采用单因素方差分析（ANOVA）进行处理。使用Statgraphics Centurion版本XVI软件中的Student–Newman–Keuls检验来评估数据的统计显著性。p < 0.05的概率值被认为是统计显著的。

3 结果
3.1 动物实验
3.1.1 器官重量
表2显示了处死后的动物器官重量。肝脏、胰腺、右肾、左肾和大脑的器官重量之间没有显著差异（p > 0.05）。与阴性对照组和正常组相比，摄入非洲核桃油和DHA的大鼠的心脏重量最低（p < 0.05）。

表2. 器官重量（克）
| 组别 | 肝脏 | 胰腺 | 左肾 | 右肾 | 大脑 | 心脏 |
|------|-------------|-------------|-------------|-------------|-------------|
| 正常组 | 7.92 ± 0.53a | 1.60 ± 0.43a | 0.69 ± 0.01a | 0.76 ± 0.00a | 1.70 ± 0.02a |
| 阴性对照（单独DMBA） | 7.50 ± 1.27a | 0.45 ± 0.22a | 0.77 ± 0.13a | 0.92 ± 0.24a | 1.46 ± 0.28a |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 7.23 ± 0.47a | 0.70 ± 0.15a | 0.70 ± 0.09a | 0.71 ± 0.14a | 1.51 ± 0.11a |
| DMBA + 非洲核桃油 | 6.21 ± 0.17a | 0.87 ± 0.11a | 0.57 ± 0.07a | 0.57 ± 0.04a | 1.13 ± 0.12a |

注：n = 6。数值以平均值±标准差表示。同一列中不同上标（a–c）的数值在p < 0.05时具有显著差异。正常组：未患癌症且接受蒸馏水的大鼠；DMBA + 二十二碳六烯酸组：接受二十二碳六烯酸治疗的乳腺癌大鼠；阴性对照组：未接受治疗的乳腺癌大鼠；DMBA + 非洲核桃油组：接受非洲核桃油治疗的乳腺癌大鼠。

3.1.2 平均肿瘤大小和形态
实验期间，阴性对照组的肿瘤大小显著高于其他组（p < 0.001）。其次是摄入T. conophorum油的组。摄入二十二碳六烯酸的组肿瘤大小最低。正常组未记录到肿瘤（图2）。

图2. 平均肿瘤大小（正常组：未患癌症且接受蒸馏水的大鼠；DMBA + 二十二碳六烯酸组：接受二十二碳六烯酸治疗的乳腺癌大鼠；阴性对照组：未接受治疗的乳腺癌大鼠；DMBA + 非洲核桃油组：接受非洲核桃油治疗的乳腺癌大鼠）。n = 6。数值以平均值±标准差表示。不同上标（a–d）的数值在p < 0.01时具有显著差异。阴性对照组的肿瘤最大（8.5 cm），其次是摄入非洲核桃油的组（5.7 cm）和摄入DHA的组（4 cm）。正常组未记录到肿瘤（图3）。

3.1.3 非洲核桃油和DHA对血液学参数的影响
表3显示了非洲核桃油和二十二碳六烯酸对DMBA诱导的雌性Wistar大鼠乳腺癌血液学参数的影响。摄入DMBA的大鼠的白细胞百分比显著高于正常组（p < 0.05）。摄入非洲核桃油和DHA的组白细胞百分比最高（p < 0.05）。阴性对照组和摄入非洲核桃油的组的淋巴细胞百分比低于正常组和摄入DHA的组。然而，值得注意的是，阴性对照组的淋巴细胞百分比最低（p < 0.05）。在MID%方面，阴性对照组高于正常组和摄入T. conophorum油和二十二碳六烯酸的组。在GRAN%方面，阴性对照组和摄入非洲核桃油的组显著高于其他组（p < 0.001）。正常组的红细胞、HGB和HCT%高于摄入DMBA的组。在MCV%方面，阴性对照组低于其他组（p < 0.05），而这一参数在其他组中无显著差异（p > 0.05）。摄入非洲核桃油的组MCH和MCHC%显著高于其他组（p < 0.01）。在血小板方面，阴性对照组的值最低（p < 0.01），而正常组和摄入DHA及非洲核桃油的组则不是如此。

表3. 非洲核桃油和二十二碳六烯酸对DMBA诱导的乳腺癌Wistar大鼠血液学参数的影响。
| 组别 | 白细胞（10^9/L） | 淋巴细胞（%） | 粒细胞（%） | 红细胞（10^12/L） | 血红蛋白（g/dL） |
|------|------------|-----------|-----------|--------------|--------------|
| 正常组 | 9.40 ± 1.11a | 76.96 ± 2.11a | 7.56 ± 0.90a | 7.39 ± 0.30a |
| 阴性对照（单独DMBA） | 12.25 ± 0.35b | 45.83 ± 1.55b | 33.40 ± 1.27b | 3.58 ± 0.16b |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 17.75 ± 1.01c | 74.40 ± 4.30a | 8.20 ± 0.12a | 3.82 ± 0.50b |
| DMBA + 非洲核桃油 | 14.50 ± 0.02d | 52.00 ± 1.33c | 33.60 ± 3.33b | 2.08 ± 0.45b |
| HCT（%） | 36.93 ± 4.25a | 56.88 ± 0.95ab | 18.43 ± 0.76a | 32.25 ± 0.44a |
| 阴性对照（单独DMBA） | 19.85 ± 0.07b | 53.74 ± 1.05b | 15.50 ± 0.10a | 29.00 ± 0.60a |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 23.25 ± 1.67c | 56.25 ± 3.46ab | 17.55 ± 0.49a | 33.10 ± 1.55a |
| DMBA + 非洲核桃油 | 12.20 ± 2.41d | 59.10 ± 0.13a | 24.50 ± 0.01b | 41.80 ± 1.22a | 179.00 ± 22.55d |

注：n = 6。数值以平均值±标准差表示。同一列中不同上标（a–d）的数值在p < 0.05时具有显著差异。正常组：未患癌症且接受蒸馏水的大鼠；DMBA + 二十二碳六烯酸组：接受二十二碳六烯酸治疗的乳腺癌大鼠；阴性对照组：未接受治疗的乳腺癌大鼠；DMBA + 非洲核桃油组：接受非洲核桃油治疗的乳腺癌大鼠。

3.1.4 非洲核桃油和DHA对总蛋白的影响
表4显示了肿瘤、器官匀浆和血清中总蛋白的变化。阴性对照组的肿瘤、大脑、胰腺、右肾、肝脏和心脏的蛋白质水平显著低于其他组（p < 0.05）。而在左肾方面，阴性对照组和摄入非洲核桃油的组的蛋白质水平显著低于摄入DHA的组和正常组。所有组的血清中总蛋白没有显著差异（p > 0.05）。

表4. 血清、肿瘤和器官匀浆的总蛋白（g/dL）
| 组别 | 肿瘤 | 大脑 | 胰腺 | 右肾 | 左肾 | 肝脏 | 血清 |
|------|------------|-----------|-----------|-------------|-------------|-------------|
| 正常组 | ND | 2.07 ± 1.25a | 2.05 ± 0.07a | 3.46 ± 0.60a | 3.46 ± 0.23a | 4.03 ± 0.00a |
| 阴性对照（单独DMBA） | 0.40 ± 0.00b | 0.22 ± 0.00b | 0.16 ± 0.02b | 0.92 ± 0.00b | 2.92 ± 0.00b |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 3.81 ± 0.00c | 4.77 ± 0.00c | 2.90 ± 0.60a | 3.27 ± 0.75a | 5.32 ± 0.00c |
| DMBA + 非洲核桃油 | 2.44 ± 0.00d | 1.96 ± 0.00a | 2.55 ± 0.00a | 2.33 ± 0.00c | 2.40 ± 0.00b |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 3.81 ± 0.00c | 4.77 ± 0.00c | 2.90 ± 0.60a | 3.27 ± 0.75a | 5.32 ± 0.00c |
| DMBA + 非洲核桃油 | 2.44 ± 0.00d | 1.96 ± 0.00a | 2.55 ± 0.00a | 2.33 ± 0.00c | 2.40 ± 0.00b |
| DMBA + 非洲核桃油 | 6.11 ± 0.00d | 0.71 ± 0.00d | 0.60 ± 0.00d | 0.58 ± 0.00d | 1.13 ± 0.00d |

注：n = 6。数值以平均值±标准差表示。同一列中不同上标（a–d）的数值在p < 0.05时具有显著差异。正常组：未患癌症且接受蒸馏水的大鼠；DMBA + 二十二碳六烯酸组：接受二十二碳六烯酸治疗的乳腺癌大鼠；阴性对照组：未接受治疗的乳腺癌大鼠；DMBA + 非洲核桃油组：接受非洲核桃油治疗的乳腺癌大鼠。

3.1.5 非洲核桃油和DHA对氧化应激标志物的影响
3.1.5.1 超氧化物歧化酶
表5显示了大鼠器官、肿瘤匀浆和血清中的SOD活性。阴性对照组的SOD活性在所有器官和血清中显著高于其他组（p < 0.05）。

表5. 血清、肿瘤和器官匀浆中SOD活性的变化（U/mg蛋白质）
| 组别 | 肝脏 | 胰腺 | 右肾 | 左肾 | 肝脏 | 心脏 | 血清 |
|------|------------|-----------|-----------|-------------|-------------|-------------|
| 正常组 | ND | 0.54 ± 0.05a | 0.29 ± 0.00a | 0.23 ± 0.03a | 0.17 ± 0.00a | 0.35 ± 0.00a |
| 阴性对照（单独DMBA） | 24.71 ± 0.67b | 10.40 ± 3.06b | 10.65 ± 0.96b | 2.02 ± 0.07b | 23.83 ± 1.13b |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 0.47 ± 0.00c | 0.30 ± 0.02c | 0.45 ± 0.00c | 0.47 ± 0.00c | 0.31 ± 0.00c |
| DMBA + 非洲核桃油 | 0.68 ± 0.00d | 0在心脏层面，正常对照组和阴性对照组显示出显著更高的GSH活性（p < 0.05），与其它组相比。所有组之间的血清GSH活性没有显著差异（p > 0.05）。表6显示了大鼠血清、肿瘤和器官匀浆中的谷胱甘肽（GSH）过氧化物酶水平（μmol）。

| 组别 | 肿瘤 | 大脑 | 胰腺 | 右肾 | 左肾 | 肝脏 | 心脏 | 血清 |
|-----------|-----------|-----------|-----------|-----------|-----------|-----------|-----------|
| 正常对照组 | ND | 11.69 ± 0.00a | 12.96 ± 0.00a | 21.09 ± 0.50a | 22.50 ± 1.17a | 17.97 ± 1.27a | 22.65 ± 1.55a |
| 负性对照组（单独DMBA） | 5.01 ± 1.95b | 5.85 ± 0.70b | 6.80 ± 3.14b | 14.11 ± 1.83b | 14.93 ± 3.55b | 8.00 ± 0.02b | 21.55 ± 0.27a |
| DMBA + 二十二碳六烯酸 | 3.15 ± 0.00b | 8.02 ± 0.75c | 24.77 ± 0.00c | 18.03 ± 0.50c | 20.03 ± 0.00ab | 21.50 ± 0.00c | 11.58 ± 0.00b | 22.22 ± 0.73a |
| DMBA + 非洲核桃油 | 14.30 ± 0.00c | 15.62 ± 0.00d | 14.18 ± 0.00a | 8.03 ± 0.00d | 15.72 ± 0.00b | 16.48 ± 0.00a | 18.90 ± 0.00c | 20.84 ± 2.94a |

注：n = 6。数值以平均值±标准差表示。同一列中不同上标（a–d）的数值在p < 0.05时具有显著差异。
正常组：未患癌症且接受蒸馏水的大鼠；
DMBA + 二十二碳六烯酸：接受二十二碳六烯酸治疗的乳腺癌大鼠；
阴性对照组：未接受治疗的乳腺癌大鼠；
DMBA + 非洲核桃油：接受非洲核桃油治疗的乳腺癌大鼠。

3.1.5.3 一氧化氮
大鼠肿瘤、器官匀浆和血清中的一氧化氮（NO）水平见表7。阴性对照组在肿瘤和大脑中的NO水平显著低于其他组（p < 0.05）。在左肾、右肾和心脏层面，接受DHA的组和正常组显示出显著更高的NO水平（p < 0.05）。接受非洲核桃油的组在这些器官中的NO水平最低。在肝脏中，接受非洲核桃油的组和阴性对照组显示出最低的NO水平（p < 0.05），与正常组和DHA组相比。阴性对照组的NO水平显著高于其他组（p < 0.05）。血清中的最低NO浓度出现在接受非洲核桃油的组中。

3.1.5.4 过氧化氢酶活性
肿瘤、器官匀浆和血清中的过氧化氢酶活性见表8。接受T. conophorum处理的组在肿瘤中的过氧化氢酶水平最高，与正常组和接受DHA的组相比。接受DHA的组在大脑、右肾和肝脏中的过氧化氢酶活性显著更高（p < 0.05）。而在胰腺、左肾和心脏层面，正常组的过氧化氢酶活性最高，其次是接受DHA的组。血清中的过氧化氢酶活性方面，阴性对照组显著高于其他组（p < 0.05）。

3.1.5.5 过氧化马隆醛（MDA）水平
大鼠血清、肿瘤和器官匀浆中的MDA水平见表9。阴性对照组在所有组中的MDA水平最高（p < 0.05）。这一发现与先前的研究结果一致，这些研究表明DMBA诱导的致癌作用会导致蛋白质分解代谢增加和蛋白质合成减少，这通常是由于氧化应激和组织损伤引起的（Shivani等人，2025年）。同时，接受DHA和非洲核桃油处理的组在所有检测的器官和血清中保持了显著更高的蛋白质水平，这与Omega-3脂肪酸在保护细胞膜、增强蛋白质合成和降低炎症方面的已知作用相符（Calviello等人，2007年）。DHA可能通过影响参与细胞修复和抗氧化反应的转录因子来发挥这些作用，从而减少组织损伤和蛋白质损失（Díaz等人，2021年）。这与Pratama等人（2024年）关于DMBA诱导的大鼠乳腺癌发生对蛋白质组学影响的研究结果相似，其中实验组的总蛋白质浓度比阴性对照组增加了27%。

4.5 油类对氧化应激因素的影响

氧化应激在疾病发展中起着重要作用。本研究测量了血清和器官匀浆液中的MDA、SOD、NO、GSH和CAT的水平，以确定富含Omega-3的非洲核桃油和二十二碳六烯酸如何帮助管理暴露于环境致癌物DMBA的Wistar大鼠的乳腺癌。SOD可以通过酶促作用消除ROS（Park等人，2019年）。过氧化氢酶可以减少过氧化氢并保护组织免受活性羟基自由基的损害（Rasheed，2024年）。DMBA通过产生ROS来促进肿瘤发生（Wang和Zhang，2017年）。本研究表明，与正常组相比，DMBA在肿瘤、器官和血清中的MDA水平升高，导致癌症大鼠的氧化应激增加。根据Rasic等人（2018年）的研究，癌症患者的血清MDA水平远高于正常患者。这一结果与Rasheed（2024年）的发现一致，他发现DMBA由于ROS生成增加而提高了MDA水平并降低了抗氧化酶的水平。这会导致生物分子的损伤，并具有细胞毒性和致突变性，可能引发癌症。阴性对照组中SOD和CAT的水平有所增加。需要注意的是，SOD和CAT是抗氧化酶，可以保护细胞免受致癌代谢产生的自由基的伤害（Kalyani等人，2017年）。因此，高水平的SOD和CAT表明氧化应激较高，从而需要大量产生抗氧化酶。这些结果与Ferreira和Prado（2025年）的研究结果一致，他们也观察到治疗组中的SOD和CAT水平较低。DMBA诱导组中的GSH水平较低，低GSH水平表明氧化应激较高。这可能是由于DMBA的毒性或癌症进展的影响。GSH是抵御活性氧的第一道防线，但其水平降低了。亚硝酸盐是活性氧的前体，也是乳腺癌的一个重要风险因素（Mijatovi?等人，2020年）。NO在多种生理过程中起作用，包括血管舒张和代谢调节（Andrabi等人，2023年）。在本研究中，DMBA诱导组的NO水平高于正常组。然而，接受非洲核桃油和DHA处理的组的NO水平最低。这表明非洲核桃油和DHA可能通过其抗氧化特性发挥抗癌作用。这些结果与Zingue等人（2024年）的研究结果一致，他们发现接受“Njangsang”油处理的组在治疗后NO水平最低。

5 结论

本研究的目的是评估非洲核桃油和DHA对患有DMBA诱导乳腺癌的雌性大鼠的肿瘤大小、血液学指标和氧化应激标志物的影响。数据显示，二十二碳六烯酸和非洲核桃油可能延缓肿瘤生长。它们可以增加血液中的白细胞、血小板和平均红细胞血红蛋白计数。DMBA显著降低了红细胞数量、血红蛋白水平和蛋白质浓度。二十二碳六烯酸和非洲核桃油通过提高谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性和一氧化氮水平，以及增加超氧化物歧化酶活性和丙二醛水平，保护器官免受癌症引起的氧化应激损伤。如果作为食物补充剂或添加到饮食中，二十二碳六烯酸和非洲核桃油可能用于延缓肿瘤进展、保护血液学指标并限制癌症患者的氧化应激损伤。

作者贡献

Fabrice Tonfack Djikeng：概念构思；研究；初稿撰写；审稿和编辑；数据可视化；验证；方法论；软件使用；数据分析；监督；资源管理；数据整理。

Carister Nchangnwi：概念构思；研究；初稿撰写；审稿和编辑；数据可视化；验证；方法论；软件使用；数据分析；资源管理；数据整理。

Jean Paul Chedjou：概念构思；研究；初稿撰写；审稿和编辑；数据可视化；验证；方法论；软件使用；数据分析；监督；数据整理。

Hilaire Macaire Womeni：概念构思；研究；初稿撰写；审稿和编辑；数据可视化；验证；方法论；软件使用；数据分析；监督；数据整理。

致谢

作者无需报告任何事项。

资金来源

作者无需报告任何资金来源。

伦理声明

所有动物的饲养和使用均符合国际动物使用标准指南。动物处理和护理的伦理许可已从布埃亚大学机构动物护理和使用委员会获得，许可编号为UB-IACUC No. 02/2025。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

数据可用性声明

支持本研究结果的数据可向通讯作者索取，如有合理请求。