Mpox Clade Ib检测西班牙实验室准备情况：一项全国性外部质量评估

《Journal of Medical Virology》：Readiness Level of Spanish Labs to Detect Mpox Clade Ib: A Nationwide EQA

　　

为评估西班牙临床微生物学实验室通过全国性外部质量评估（EQA）检测新兴猴痘病毒（MPXV）Clade Ib的准备情况和诊断能力，研究人员分发了一个包含16个样本（血清和DNA洗脱液）的盲法面板，内含MPXV Clade Ib、Clade II、牛痘病毒及阴性对照。在提交结果的36家实验室中，纳入了25家有分支级别鉴别能力的实验室。通过与参考结果比对，判定为完全一致、部分一致或不一致；估算了物种水平和分支特异性指标，并使用简单和加权Kappa值（Wilson 95% CI；bootstrap法计算Kappa CI）总结了实验室间的一致性。结果显示，MPXV物种水平的检测始终表现强劲（平均灵敏度85%，特异度95%）。一致性程度较高（简单Kappa值0.70；加权Kappa值0.81）。对于Clade Ib，平均灵敏度为50%（范围：0%–100%），特异度高但变异较大（100%）。对于Clade II，平均灵敏度平均为70%（25%–100%），特异度为98%（66.7%–100%）。各中心采用的方法学存在差异：68%使用独立提取加商业PCR，20%混合使用商业提取与原位PCR，12%使用集成提取-PCR平台。结论指出，西班牙实验室保持了良好的MPXV物种水平检测能力，但在分支鉴别方面——特别是对新兴Clade Ib的鉴别——参与中心之间仍存在异质性和次优表现。扩大质量控制（QC）面板以纳入新分支并更新/验证检测方法，应可增强国家应对未来传播事件的准备情况。

论文解读：西班牙实验室对Mpox Clade Ib的检测准备情况——一项全国性外部质量评估

研究背景与目的

2022年由猴痘病毒（MPXV）Clade IIb引起的全球疫情凸显了这种人畜共患病正痘病毒（Orthopoxvirus）在非流行地区快速传播的能力。随着2024年8月世界卫生组织（WHO）宣布新的国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC），一种区别于Clade IIb的新型分支Clade Ib在刚果民主共和国及周边国家出现，并已伴随旅行者输入至欧洲多国。尽管目前西班牙主要面临的仍是Clade II的风险，但鉴于Clade Ib已显示出持续的人际传播能力，准确及时地进行分子诊断对于病例管理、流行病学监测和疫情控制至关重要。然而，针对这种新兴分支，欧洲临床实验室的分子检测性能尚未经过系统评估。为此，由西班牙传染病与临床微生物学会（SEIMC）、生物医学研究中心（CIBERINFEC及CIBERESP）与国家参考实验室（CNM）合作，开展了一项全国性的外部质量评估（EQA），旨在评估西班牙临床微生物学实验室检测MPXV Clade Ib的诊断能力，识别潜在的局限性，并为加强国家准备情况提供依据。该研究成果已发表于《Journal of Medical Virology》。

关键技术方法概述

本研究采用了包含16个样本（8份血清背景加8份核酸提取物）的盲法评估面板，样本经国家参考实验室制备，涵盖MPXV Clade II、Clade Ib、牛痘病毒及阴性对照。研究预设了两个分析集：物种水平检测集（所有报告结果的实验室）和分支鉴别集（能分配分支的实验室）。准确性评估采用三级一致性标准（完全、部分、不一致），计算了灵敏度、特异度、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV），并使用Wilson法计算95%置信区间（CI）。实验室间一致性通过简单Kappa值和加权Kappa值（采用1000次重抽样的Bootstrap法计算CI）进行量化。

研究结果

1. 参与者与方法学多样性

全国共有260家实验室受邀，最终25家具备分支鉴别能力的实验室纳入最终分析。这些实验室采用了多样化的分子策略：64.0%使用独立核酸提取结合商业PCR（如Roche、Vircell等试剂盒）；20.0%采用商业提取结合原位（in-house）PCR；16.0%使用全自动集成提取-PCR系统（如STANDARD M10 MPX/OPX）。这种多样性反映了西班牙诊断工作流程的互补性，也为评估国家准备情况提供了坚实基础。

2. 实验室间一致性与总体性能

总体而言，实验室间的协议一致性较高。简单Kappa值为0.70（实质性一致），加权Kappa值达0.81（接近完美一致）。这表明尽管在分支鉴别上存在变异性，但各实验室在盲法样本中检测MPXV DNA的总体可靠性很强。

3. Clade Ib检测性能

针对新兴的Clade Ib样本，检测结果虽具启发性但表现出显著的异质性。25家实验室的平均灵敏度为50.0%（范围0%–100%），而特异度维持在100%。阳性预测值（PPV）均值为72.0%，阴性预测值（NPV）均值为85.2%。数据表明，虽然大多数实验室能可靠识别该分支，但仍有部分实验室存在漏检风险，Clade Ib的检测仍是挑战。

4. Clade II检测性能

对于导致2022年疫情的Clade II，实验室表现持续优异。平均灵敏度达到70.0%（多数中心≥75%），特异度极高（均值98.0%），PPV均值达95.9%，NPV均值为90.7%。这证实了西班牙实验室在应对既往流行分支时建立的成熟诊断能力。

5. 不考虑分支分配的MPXV检测

当仅关注MPXV的物种水平检测（不区分分支）时，实验室表现最为强劲。平均灵敏度为85.0%，特异度为95.0%，PPV高达96.0%。这意味着即便无法精确分型，西班牙临床微生物学实验室也完全有能力迅速识别出MPXV感染，确保早期预警。

6. 牛痘与阴性对照

所有参与中心在牛痘病毒和阴性对照样本的分类上均表现出极高的特异度，避免了假阳性结果，证明了现有平台在日常诊断中对非MPXV正痘病毒的排除能力稳健可靠。

讨论与结论

本研究通过全国性EQA首次系统评估了西班牙实验室对MPXV新兴分支Clade Ib的诊断准备情况。研究发现，虽然针对既往流行的Clade II检测性能优异，但对Clade Ib的检测灵敏度波动较大（0%–100%），突显了当前诊断框架在分支鉴别层面仍需优化。造成这种异质性的原因可能包括检测设计差异、靶基因覆盖范围不同以及对新分支的验证不足。尽管实时PCR/核酸扩增技术（NAAT）仍是常规诊断的基石，但研究强调了必须将新兴分支的序列信息纳入检测设计，并通过持续的外部质量评估来更新试剂和验证流程。值得注意的是，本研究中Clade Ib面板的样本量有限且仅基于单一分离株，这是研究的主要局限之一。综上所述，西班牙临床微生物学实验室在MPXV物种水平检测上保持了坚实的能力，但在应对Clade Ib等新发分支时仍需提升标准化水平。扩大质量控制计划以涵盖新分支，将是维持国家诊断网络准备状态、确保未来疫情及时响应的关键举措。