Sinomenine 通过调节 METTL3/MEST 介导的 RhoA/ROCK2 信号通路，抑制胃癌的生长和免疫逃逸能力

《Pathology - Research and Practice》：Sinomenine attenuates the growth and immune evasion of gastric cancer by regulating the METTL3/MEST-mediated RhoA/ROCK2 signaling pathway

　　

张崇新|杨鹏飞|张帆|向志刚|罗家顺|姜晓静|刘阳

中国湖南省吉首市湘西自治州人民医院（吉首大学第一附属医院）普通外科一科，邮编416000

摘要

背景

辛诺明（SIN）对不同类型的肿瘤细胞具有抑制作用，包括胃癌（GC）。然而，SIN在胃癌中的抗癌分子机制尚未完全阐明。

方法

通过MTT、EdU、流式细胞术和Transwell实验评估细胞活力、增殖、凋亡和迁移情况。为了了解SIN在免疫逃逸中的作用，将胃癌细胞与外周血单核细胞（PBMCs）在体外共培养。利用流式细胞术和LDH细胞毒性试剂盒检测胃癌细胞对CD8⁺ T细胞凋亡率、增殖和细胞毒性的影响。通过RT-qPCR检测甲基转移酶样3（METTL3）和中胚层特异性转录本（MEST）的表达。Western blot检测METTL3、MEST、RHOA和ROCK2蛋白的表达。利用SRAMP和RMbase预测后，通过MeRIP-qPCR和RIP实验确定METTL3和MEST之间的潜在相互作用。通过异种移植模型评估SIN在体内的胃癌细胞生长中的作用。

结果

SIN抑制了胃癌细胞的生长和免疫逃逸。SIN处理的胃癌细胞中METTL3和MEST的含量降低。METTL3的上调减弱了SIN对胃癌细胞的抗肿瘤作用。其机制在于METTL3通过m6A甲基化增强了MEST mRNA的稳定性。SIN通过METTL3/MEST轴调节RhoA/ROCK2信号通路。SIN在体内抑制了肿瘤生长。

结论

SIN治疗部分通过METTL3/MEST轴抑制胃癌细胞的发育，为胃癌的治疗提供了潜在策略。

部分内容

引言

胃癌（GC）是一种起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，近年来被公认为全球公共卫生领域日益严重的挑战[1]。由于早期症状不典型且缺乏定期筛查，大多数患者通常在晚期才被诊断出来[2]。尽管在外科切除、围手术期化疗、靶向治疗和免疫治疗方面取得了显著进展，但治疗效果仍不令人满意[3]，[4]。因此，

细胞培养和临床样本

人胃黏膜上皮细胞（GES-1, IM-H084，Immocell Biotechnology，厦门，中国）和胃癌细胞（HGC-27, CL-0107）在RPMI-1640培养基（Procell，武汉，中国）中于37?C、5% CO₂条件下培养。另一种胃癌细胞系（AGS, CL-0022，Procell）在Ham’s F-12培养基（Procell）中培养。随后，将HGC-27和AGS细胞在80%-90%汇合度时用适当的SIN溶液（Sigma-Aldrich，圣路易斯，MO，美国）处理24小时。

在参与者签署书面知情同意书后，

ELISA

首先，用植物血凝素（PHA，Sigma-Aldrich）刺激5×10⁵外周血单核细胞（PBMCs，CP-H158，Procell）72小时，然后与HGC-27和AGS细胞共培养24小时。随后使用特异性ELISA试剂盒检测上清液中的TNF-α和IFN-γ含量。

SIN抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和免疫逃逸

为了确定SIN的功能作用，将AGS和HGC-27细胞用不同浓度的SIN处理24小时。如图1A所示，SIN处理后细胞活力明显受到抑制，且这种抑制作用呈剂量依赖性。考虑到20μM浓度下的细胞活力百分比最接近50%，因此选择该浓度进行后续的体外实验。随后，SIN处理显著降低了AGS和HGC-27细胞中EdU阳性细胞的百分比。

讨论

如今，基于传统医学的天然产物在中国得到了广泛认可和广泛应用，作为多种人类癌症的潜在治疗方法，因为它们具有多重作用机制、低毒性和多条作用途径[29]。许多中药可以通过调节多种生物过程（如细胞活力、免疫功能和转移）来抑制胃癌的发展[29]，[30]。辛诺明（SIN）作为一种源自辛诺明属植物（Sinomenium acutum）的生物碱，具有

结论

总之，这些结果表明，SIN通过改变METTL3/MEST轴来抑制肿瘤生长、迁移和免疫逃逸，为研究SIN在胃癌治疗中的应用提供了临床前依据。

伦理批准和参与同意

本研究严格遵循《赫尔辛基宣言》的相关规定和要求。所有参与者均签署了书面知情同意书，并得到了湘西自治州人民医院（吉首大学第一附属医院）伦理委员会的批准。

对所有动物进行的操作均符合湘西自治区实验动物伦理委员会制定的标准

资助

本研究得到了湖南省自然科学基金（区域联合基金）的支持，项目编号：2024JJ7557

CRediT作者贡献声明

杨鹏飞：项目管理、方法学、研究、数据管理。张崇新：方法学、研究、数据管理。姜晓静：监督、软件、项目管理。罗家顺：资源支持、项目管理、数据分析。向志刚：资源支持、项目管理、研究、数据管理。张帆：验证、监督、软件、数据管理。刘阳：监督、方法学、数据分析、数据管理。

利益冲突声明

不存在利益冲突。

致谢

无

出版同意

不适用。

利益冲突

作者没有需要披露的利益关系。

作者贡献

研究概念和设计：张崇新。数据分析和解释：杨鹏飞、张帆、向志刚。手稿起草：张崇新。重要学术内容的严格审稿：姜晓静、刘阳。统计分析：张帆、向志刚、罗家顺。研究监督：张崇新和刘阳