马黄扶子新辛方通过抑制卵白蛋白诱导的小鼠模型中的MHC-II介导的抗原呈递来缓解过敏性鼻炎

《Phytomedicine》：Mahuang Fuzi Xixin decoction attenuates allergic rhinitis by suppressing MHC-II-mediated antigen presentation in ovalbumin induced murine model

　　

魏晓涵|丁梦泽|谭晓梅

中国电子科技大学医学院药学系，成都，610072，中国

摘要

背景

过敏性鼻炎（AR）是一种慢性疾病，会损害日常生活并带来经济负担。麻黄附子细辛汤（MFXD）是中医中常用的治疗AR的草药方剂，因其已证实的临床疗效而受到青睐。然而，对其作用机制的研究仍然有限。

目的

评估MFXD在AR小鼠模型中的治疗效果，并研究其对抗原呈递的影响，从而阐明其潜在的作用机制。

材料与方法

建立了一种卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠AR模型，以评估MFXD的疗效。随后，通过数据独立获取（DIA）蛋白质组学技术分析了MFXD处理后鼻黏膜中差异表达的蛋白质（DEPs），并进行了通路富集分析。基于蛋白质组学结果，我们研究了MFXD对AR小鼠抗原呈递分子的影响。最后，使用人鼻上皮细胞（HNEpCs）、树突状细胞（DC2.4）和从OT-II小鼠中分离出的幼稚CD4⁺T细胞来确认MFXD对抗原呈递通路的抑制作用。此外，还对MFXD进行了化学表征。

结果

MFXD缓解了AR症状，减轻了组织病理学改变，并调节了AR小鼠鼻洗液（NLF）中的血浆组胺和IgE水平以及IL-4、IL-13和IFN-γ水平。MFXD显著减少了AR组和对照组之间的鼻黏膜DEPs数量，其中抗原处理和呈递通路受到最显著的影响。MFXD改变了脾脏的组织病理学和脾指数，并降低了AR小鼠鼻黏膜和脾脏中的主要组织相容性复合体II类（MHC-II）表达。体外实验中，MFXD降低了脂多糖（LPS）刺激的DC2.4细胞的抗原吞噬能力，并降低了HNEpCs和DC2.4细胞上的MHC-II和CD86表达；它还抑制了DC2.4诱导的幼稚OT-II CD4⁺T细胞的增殖和分化。MFXD还下调了CD74、组织蛋白酶S（CTSS）和MHC-II的表达；这种效应部分被CD74激动剂MIF和CD74过表达所逆转。

结论

本研究探讨了MFXD在AR中的潜在作用机制。研究结果表明，MFXD可能通过抑制CD74/CTSS/MHC-II轴来发挥其治疗作用，从而抑制抗原呈递。这项工作提供了机制上的见解，有助于指导MFXD的临床应用，并指出了未来AR药物开发的潜在靶点。

成分

麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、苯甲酰麻黄碱、苯甲酰海柯碱、苯甲酰海柯亭、阿萨酮。

引言

过敏性鼻炎（AR）是一种由吸入性过敏原引起的IgE依赖性免疫反应导致的慢性鼻黏膜炎症（Zhang等人，2021年）。它严重影响生活质量和社会交往，同时带来巨大的经济负担，已成为公共卫生、医疗保健和经济学领域日益严重的问题。AR的医学管理通常包括抗组胺药、鼻用皮质类固醇、减充血剂和白三烯受体拮抗剂。然而，这些药物主要只能缓解AR的症状，无法完全治愈，并且使用时常伴有特定的副作用（Siddiqui等人，2022年）。基于整体观念的传统中医（TCM）在AR的临床治疗中显示出显著的治疗效果（Yue等人，2024年）。

抗原呈递是AR发展的起始步骤。吸入性过敏原通过其内在的蛋白酶活性被抗原呈递细胞（APCs）内化并加工成免疫原性肽（Wang等人，2024年）。这些肽随后与主要组织相容性复合体II类（MHC-II）结合并在细胞表面展示。这种向CD4+辅助T淋巴细胞的呈递会促使Th细胞向Th2表型极化，从而释放触发免疫反应的细胞因子。APCs主要包括树突状细胞（DCs）和巨噬细胞。值得注意的是，鼻黏膜细胞也可以通过表达MHC II和CD86来执行抗原呈递（Kotsias等人，2019年）。因此，鼻黏膜细胞介导的抗原呈递对于AR的发生和发展至关重要。调节抗原呈递过程是控制该疾病的有效策略。

麻黄附子细辛汤（MFXD）由麻黄（Ephedra sinica Stapf）、附子（Aconitum carmichaelii Debx）和细辛（Asarum sieboldii Miq）制成。临床研究表明，MFXD在AR治疗中具有良好的疗效，与氯雷他定联合使用时可增强治疗效果并降低不良反应率（Liu等人，2024a；Sha，2012年）。我们之前的研究已经表明，MFXD可以显著缓解AR症状并抑制AR小鼠中的NLRP3/Caspase-1/GSDMD-N（Ding等人，2024年；Wei等人，2023年）。然而，MFXD对抗原呈递的影响尚未被探索。在本研究中，我们首先利用蛋白质组学技术识别了各组鼻黏膜组织中的差异蛋白质。然后，我们利用蛋白质组学分析的结果，在体外和体内验证了MFXD对抗原呈递过程的调节作用。我们发现，除了专门的抗原呈递细胞外，鼻黏膜上皮细胞也表达与抗原呈递相关的MHC-II分子，这些分子在MFXD干预后下调。我们进一步证实了MFXD对AR小鼠抗原呈递的抑制作用。此外，我们还发现MFXD可以抑制树突状细胞的成熟和抗原吞噬作用，抑制DC2.4向幼稚OT-II CD4+ T细胞的增殖和分化，并通过CD74/CTSS/MHC-II信号通路调节鼻黏膜上皮细胞中的抗原呈递。我们的研究提出了MFXD在AR中的潜在作用机制，从而加深了对其临床效果的理解。

章节片段

试剂

麻黄（E. sinica）、附子（A. carmichaelii）和细辛（A. sieboldii）购自广东康美药业有限公司。氢氧化铝购自天津大茂化学试剂厂；脂多糖（LPS）、卵清蛋白（OVA）和聚肌苷酸（Poly(I:C）购自Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）；FITC抗小鼠CD86抗体、FITC抗人CD86和APC抗小鼠I-A/I-E（MHC II）购自BioLegend公司（美国加利福尼亚州圣地亚哥）；

MFXD成分的表征

为了确保MFXD的质量和可重复性，对其进行了化学表征。选择的定量标记化合物基于中国药典中规定的每种草药的内容测定方法。由于麻黄碱、甲基麻黄碱和伪麻黄碱的特征吸收波长与其他成分不同，因此在210 nm和235 nm处进行了紫外检测（图1）。我们在MFXD中鉴定出了7种成分，

讨论

麻黄附子细辛汤是一种记载在《伤寒论》中的经典方剂，长期以来被用于治疗过敏性鼻炎。然而，对其作用机制的研究仍然有限。我们使用DIA蛋白质组学技术分析了OVA诱导的AR小鼠在接受MFXD处理后的鼻黏膜蛋白变化。与AR组相比，MFXD显著调节了81种蛋白质，其中抗原呈递通路受到的影响最为显著。MFXD还改善了脾脏

结论

总之，本研究阐明了MFXD调节AR中的抗原呈递并抑制脾脏和鼻黏膜中的MHC-II过度表达。MFXD通过抑制吞噬作用和下调CD86和MHC-II来阻碍树突状细胞的成熟，从而限制幼稚CD4⁺ T细胞的增殖和分化。此外，它还通过抑制CD74/CTSS/MHC-II轴来阻碍人鼻上皮细胞中的抗原呈递。这项研究提供了宝贵的机制见解

作者贡献声明

魏晓涵进行了实验并撰写了论文初稿。丁梦泽协助处理动物和进行Western blot实验。谭晓梅监督了这项研究。

利益冲突

不存在利益冲突。

资助

本研究得到了四川省自然科学基金（2025ZNSFSC1824）和广东省自然科学基金（2022A1515011649）的支持。

作者贡献和作者声明

魏晓涵主要进行了这项研究并撰写了论文初稿。丁梦泽协助处理动物和进行Western blot实验。谭晓梅提供了研究资金。所有数据均为内部生成，未使用任何论文生成服务。所有作者同意对工作的所有方面负责，确保数据的完整性和准确性。

Takizawa等人，2007年；Eifan和Durham，2016年

作者贡献声明

魏晓涵：撰写 – 审稿与编辑，撰写 – 原始草稿。丁梦泽：项目管理，方法学。谭晓梅：监督。

利益冲突声明

我们确认本出版物不存在已知的利益冲突，且本研究未接受任何可能影响其结果的财务支持。