红荚 Dogwood 提取物对肉鸡生长性能、蛋白质消化率、胫骨抗折强度、免疫反应及肠道健康的影响（在球虫病疫苗挑战模型中）

《Poultry Science》：Effects of red osier dogwood extract on growth performance, protein digestibility, tibia breaking strength, immune response, and gut health of broiler chickens in a coccidiosis vaccine challenge model

　　伊塔洛·桑托斯·雷伊斯·佩雷拉（Italo Santos Reis Pereira）| 黛博拉·阿德沃莱（Deborah Adewole）
萨斯喀彻温大学农业与生物资源学院动物与家禽科学系，萨斯卡通S7N 5A8，加拿大

**摘要**
随着家禽行业因对抗生素耐药性的担忧而逐渐停止使用抗生素作为生长促进剂，以前能够控制的疾病（如球虫病、热应激和沙门氏菌感染）变得更加普遍。富含多酚的植物源饲料添加剂能够改善肠道发育，具有抗菌和抗氧化作用，并提升生长性能。红花狗木提取物（RDE）富含多酚，可促进鸡的生长、改善肠道微生物群，并减轻沙门氏菌和热应激对肉鸡的影响。然而，目前尚无研究探讨RDE对患有球虫病的鸡的影响。本研究旨在探讨RDE对患有球虫病的肉鸡的生长、消化率、肉和器官产量、骨骼强度、免疫反应、肠道形态以及肠道微生物群的影响。

**方法**
共336只1日龄的罗斯308肉鸡随机分为3组：对照组（仅含玉米-大豆粉）、添加0.15% RDE的组以及添加0.30% RDE的组。第14天时，一半的鸡被接种12倍剂量的Immucox 3?疫苗，另一半则接受等体积的生理盐水。每组设有8个重复实验笼，每笼饲养7只鸡。第21天采集空肠组织、回肠内容物和血液样本；第28天采集肉和器官的相对重量以及胫骨重量。结果表明，球虫病会导致囊泡重量增加、隐窝深度减小（P=0.0048）、绒毛高度与隐窝深度比值降低（P=0.0004）、肝脏重量增加（P=0.0001）、盲肠α多样性降低（P=0.0174）以及有益细菌的相对丰度下降（P<0.05）。RDE可线性增加脾脏重量（P=0.0179），同时不影响囊泡和肝脏重量；IgM滴度（P=0.0340）和粗蛋白消化率（P=0.0429）也有所提高，其中0.15% RDE的效果最佳。在患有球虫病的鸡群中，0.15% RDE组的绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度比值高于0.30% RDE组。因此，RDE在0.30%添加量下有助于提升生长性能，在0.15%添加量下则有助于优化肠道微生物群，从而促进肉鸡的健康和生长。

**引言**
50多年来，畜牧业一直使用抗生素作为生长促进剂，以预防亚临床疾病并提高生长性能（Gaskins等人，2002年）。然而，这类物质的广泛使用引发了公众对抗生素耐药性的担忧。这导致瑞典于1986年开始禁止将抗生素用作生长促进剂，随后这一禁令扩展至世界许多地区（Dibner & Richards，2005年）。随着全球对抗微生物药物使用的趋势转变，主要畜牧业国家（如美国、中国和巴西）已实施严格禁令或限制将重要抗生素用于非治疗目的（FDA，2026年；Hu & Cowling，2020年；MAPA，2020年）。因此，鼓励有益肠道微生物生长并增强肠道完整性的营养策略成为减少抗生素依赖的关键措施（Dibner & Richards，2005年；Klasing，1998年；Wickramasuriya等人，2024年）。

球虫病是由艾美耳属（Eimeria）原生动物引起的寄生虫病，影响多种动物的胃肠道。在集约化养鸡场中，由于饲养密度高，球虫病更为严重，因为寄生虫繁殖更快且持续存在（Mesa-Pineda等人，2021年）。艾美耳侵入肠道后会在肠壁内快速繁殖并破坏组织，使肠道更容易受到机会性病原体的侵袭，导致菌群失调、营养吸收减少和生长性能下降（Razavi等人，2024年）。此外，艾美耳卵囊对多种消毒剂具有抗性，即使彻底清洁和消毒也难以清除（Mesa-Pineda等人，2021年）。据Blake等人（2020年）报道，英国2%的鸡因球虫病死亡或被淘汰，其中大部分死亡发生在第三周。球虫病的高发病率和持续性导致经济损失远超死亡数量，2016年全球损失超过130亿美元（Blake等人，2020年）。目前，控制球虫病最有效的方法是接种疫苗（Peek & Landman，2011年）；但植物源添加剂也被视为有效的替代抗球虫剂（Balasundram等人，2006年）。研究表明，富含多酚的产品（如葡萄渣）可提高饲料效率（Gungor等人，2021年）和肠道形态及微生物群（Viveros等人，2011年）。其他植物来源的多酚产品也具有抗球虫作用，其抗氧化特性使其成为对抗球虫病的有效替代品（Alhotan & Abudabos，2019年；Cejas等人，2011年）。

红花狗木提取物（RDE）富含芦丁、没食子酸、鞣花酸、槲皮素和酪醇等多酚（Apea-Bah等人，2020年；Erinle等人，2023年），这些成分赋予RDE强大的抗氧化和抗菌活性（Badhani等人，2015年；Koo等人，2021年；Scales等人，2015年；Yang等人，2019年）。研究还表明RDE可提升生长性能和肠道形态（Mogire等人，2021年；Erinle等人，2022年；Erinle等人，2023年；Erinle & Boulianne，2023年；Koo等人，2021年）。Oretomiloye和Adewole（2024年）发现RDE可逆转热应激对肠道形态的负面影响，并改善肠道微生物群，效果与抗生素相当。Erinle等人（2022b）的研究比较了RDE与甲基水杨酸杆菌肽在接种沙门氏菌脂多糖的鸡体内的效果，结果显示RDE能减轻生长性能的负面影响并改善肠道微生物群和形态。

尽管球虫病具有全球经济意义，但尚无研究探讨RDE对患有球虫病的鸡的影响。鉴于RDE在多种压力条件下能改善生长性能和肠道健康，本研究旨在探讨其在生长性能、肠道形态、粗蛋白消化率、器官相对重量、免疫反应、胫骨强度及肠道微生物群方面的作用。研究假设球虫病会损害肠道健康，从而影响生长性能，而RDE则能改善肠道健康和免疫反应，进而提升生长性能。

**伦理声明**
本研究获得了大学动物护理委员会动物研究伦理委员会（AUP#20240039）的批准，并遵循加拿大动物护理委员会指南进行。

**实验设计与实施**
实验在萨斯喀彻温大学家禽研究与教学单元的温度控制室内进行。336只1日龄的罗斯308肉鸡来自当地孵化场，随机分配到48个笼子中（每个笼子51厘米宽、51厘米长、46厘米高，每笼7只鸡）。光照和温度条件符合品种要求（Ross，Broiler手册，2025年）。饲料和水分自由供应。

**饲料配方**
饲料配方（表1）旨在满足或超过Aviagen 2022 Ross 308的营养需求，分为三个阶段（起始期、生长期和育肥期）。所有饲料均在萨斯喀彻温大学加拿大饲料研究中心（North Battleford，SK）生产。起始期饲料为碎粒形式，喂食1-14天；生长期和育肥期饲料分别为颗粒形式，喂食15-21天和22-35天。RDE由Red Dog Enterprises（Swan River，MB）提供，采用喷雾干燥法从曼尼托巴省采集的红花狗木叶和茎中提取。

**结果**
RDE添加量（%）：0.15%、0.30%、0.15%、0.30%、0.15%、0.30%
**饲料成分**：
- 玉米粉：42.1%、42.3%、42.1%、5.8%、5.7%、5.5%、48.0%、48.0%
- 大豆粉（47%粗蛋白）：40.3%、40.0%、40.0%、36.1%、36.1%、31.4%、31.2%
- 小麦：10.0%、10.0%、10.0%、10.0%、10.0%、10.0%、10.0%、10.0%、10.0%
- 菜籽油：2.79%、2.78%、2.78%、3.05%、3.05%、3.05%、5.67%、5.67%、5.67%
- 二钙磷酸盐：1.66%、1.66%、1.66%、1.32%、1.32%、1.32%、0.93%、0.93%、0.93%
- 石灰石：1.38%、1.38%、1.38%、1.04%、1.04%、1.04%、1.52%、1.52%、1.52%
- 甲硫氨酸：0.71%、0.69%、0.69%、0.63%、0.63%、0.63%、0.49%、0.49%、0.49%
- 微量维生素混合物：0.50%、0.50%、0.50%、0.50%、0.50%、0.50%、0.50%、0.50%、0.50%
- 酸不溶灰分：0.00%、0.00%、0.00%、1.00%、1.00%、1.00%、1.00%、1.00%、1.00%
- RDE：0.00%、0.15%、0.30%、0.00%、0.15%、0.30%、0.00%、0.30%
- 盐（NaCl）：0.37%、0.37%、0.37%、0.38%、0.38%、0.38%、0.38%、0.38%
- 赖氨酸HCl：0.21%、0.21%、0.21%、0.16%、0.16%、0.01%、0.01%、0.01%

**数据分析**
使用Leco蛋白分析仪（Model Leco-FP-527L，Leco Corporation，美国）测量饲料粗蛋白含量；使用adiabatic bomb calorimeter（Parr Instruments Company，美国）测量总能量；采用Folin-Ciocalteu方法测定总多酚含量。

**结论**
RDE在0.30%添加量下可提升生长性能和肠道健康，在0.15%添加量下可优化肠道微生物群。结果表明，RDE对患有球虫病的鸡具有积极影响，既能改善生长性能，又能增强肠道健康和免疫反应。数据使用AAT Bioquest四参数逻辑斯蒂（4PL）曲线回归在线计算器（https://www.aatbio.com/tools/four-parameter-logistic-4pl-curve-regression-online-calculator）进行拟合，访问日期为2025年7月13日。

**空肠形态**
在试验的第21天，从同一只鸟身上采集了4厘米长的空肠中部段落，并用10%中性缓冲福尔马林固定24小时。之后，将组织转移到70%乙醇溶液中以停止固定。随后，每个空肠中部被处理成包含三个组织切片的载玻片，并由Prairie Diagnostic Services（加拿大萨斯卡通市）用苏木精和伊红进行染色。使用Olympus BX41显微镜和4倍或10倍物镜观察组织切片。从每个绒毛的顶端测量到隐窝开口的距离，共测量了十个完整的绒毛。测量结果使用Infinity Analyze 7软件（版本7.0）进行处理（图1）。绒毛高度与隐窝深度比（VH:CD）是通过绒毛高度与隐窝深度的比值计算得出的。

**图1.** 用苏木精和伊红染色的空肠中部的光学显微镜图像，放大100倍，显示了绒毛高度和三个隐窝深度的测量值。分别表示接受（A）基础饮食、（B）RDE 0.15%和（C）RDE 0.30%处理的鸟的空肠组织形态。

**肠道病变评分**
在试验的第21天，从每个笼子中的一只鸟身上评估了宏观病变评分。回肠近端一半（靠近梅克尔憩室的部分）的病变评分基于Johnson & Reid（1970）的评分系统，评分范围从1到5，其中1表示仅限于浆膜表面的少量瘀点，5表示含有血液、黏液和水的内容物，并伴有恶臭。

**肉产量**
在试验的第28天，每个笼子中的一只鸟被安乐死并称重，然后切除并称重胸肌。左侧大腿完全去皮后称重，而右侧大腿去骨后分别记录肉和骨的重量。重量数据相对于鸟的体重进行了处理。

**骨骼断裂强度**
将胸肌和大腿从鸟身上分离后，分离出左腿。清除胫骨上的肌腱和肌肉，并在-20°C下冷冻以备后续测试。之后，将每根胫骨在4°C下解冻超过24小时，然后放在相距40毫米的支撑物上，背面向上，使用Instron Universal Testing机器（Instron 3366；美国马萨诸塞州诺伍德市）以30毫米/分钟的加载速率进行三点弯曲测试（Chew等人，2021年），使用50公斤的负载传感器。断裂时的负载以牛顿（N）为单位报告。

**蛋白质消化率**
在试验的第28天，从每个笼子中的一只鸟身上收集回肠内容物，以确定蛋白质的表观回肠消化率（AID）。将回肠后半部分的内容物倒入小瓶中，并在-20°C下储存以备后续测定粗蛋白（CP）和酸不溶性灰分。之后，使用FreeZone 18 Liter Console冷冻干燥机（美国密苏里州堪萨斯城Labconco公司）将回肠消化物冷冻干燥超过4天。干燥后，使用研钵和杵手动研磨样品。根据Vogtmann等人（1975年）的方法，三次测定饲料和回肠消化物的酸不溶性灰分含量。使用Leco蛋白分析仪（Leco Corporation，美国马萨诸塞州圣约瑟夫市，型号Leco-FP-527L）测定消化物的粗蛋白含量。根据Adewole等人（2017年）的方法，使用不可消化标记物测定CP AID。

**肠道微生物群**
在试验的第21天收集回肠和盲肠的内容物，并在-80°C下储存。根据制造商的说明，使用QIAamp Powerfecal Pro DNA Kit（QIAGEN，德国希伦登，目录号51804）提取DNA。使用Nanodrop分光光度计评估DNA浓度和纯度。浓度超过200 ng/μL的样品被稀释以满足测序的最大浓度要求。使用Illumina MiSeq和Integrated Microbiome Resource（IMR - http://imr.bio，达尔豪斯大学）的细菌特异性双条形码引物V3-V4对细菌16S rRNA进行PCR扩增。使用Microbiome Helper Pipeline（Comeau等人，2017年）分析微生物群数据，并在用Cutadapt（Martin，2011年）修剪前后将高通量测序读数汇总为FASTQ文件。然后生成扩增子序列变异体（ASVs），并用Deblur过滤污染物，并将ASV丰度表汇总为QZA文件（Bolyen等人，2019年）。分类分配使用Greengenes 2（2022.10）作为参考数据库，SEPP（Janssen等人，2018年）。使用稀疏曲线确定所有样本的α多样性。

**统计分析**
使用Shapiro-Wilk检验（PROC UNIVARIATE，SAS 9.4，美国北卡罗来纳州卡里）评估数据的正态性。为了比较组均值，采用了方差分析（ANOVA）（PROC MIXED）。当均值显著不同时，使用Tukey范围检验（HSD）进行多处理比较。最后，使用PROC ORTHOREG进行RDE效应的正交多项式回归。统计显著性设置为P < 0.05，趋势观察为0.05 < P < 0.10。

IgM浓度数据显示非参数分布，最佳拟合为伽马分布。因此，在使用SAS 9.4的PROC GLIMMIX进行分析之前，对数据进行了对数转换。当均值显著不同时，使用Tukey范围检验比较多种处理。

在肠道微生物群中，使用PROC MIXED在SAS 9.4中分析了饮食处理和挑战模型的香农熵。使用STAMP v2.1.3（Parks和Beiko，2015年）和Kruskal-Wallis H检验分析了ASV的差异丰度。

**初步分析**
表1展示了分析的饮食组成。所有饮食处理在RDE添加水平上的营养成分相似，除了TPC，在0.15%和0.30% RDE添加水平下分别增加了约10%和20%，与CON相比。

**生长性能**
表2展示了RDE添加水平和球虫病疫苗挑战模型对生长性能的影响。在整个试验期间，球虫病疫苗挑战及其与RDE的交互作用对日采食量（FI）、体重（BW）、体重增长（BGW）或饲料转化率（FCR）均无显著影响（P>0.05）。

**表2.** 红接骨木提取物和球虫病对肉鸡整体饲料摄入量、体重增长和饲料转化率的影响。

**空细胞**
RDE添加水平（%）
正交多项式P值
球虫病挑战
交互作用
空细胞
0.00
0.15
0.30
SEMP值
线性
R2
二次方
未受挑战
受挑战
SEMP值
P值
饲料摄入量（g/只鸟）
第0-7天
144.4
140.6
137.3
2.0
4
0.05
96
0.01
70
0.11
80.05
96
0.11
第0-14天
195
19.4
b
52
3.8
a
53
2.8
a
3.4
8
0.02
84
0.00
90
0.13
90.02
99
0.14
第0-21天
125
5
b
126
8
ab
127
9
a
12.5
8
0.04
69
0.09
13
0.06
0.04
19
0.13
21
128
5
126
3
10.27
0.32
94
0.56
78
第0-27天
32
36
32
55
32
46
39.3
0.11
74
0.04
63
0.08
40.10
47
0.09
33
27
32
31
30.83
0.98
60.75
2

**体重（g/只鸟）**
第7天
186.0
18
1.2
18
2.4
2.0
30.2
24
0.21
66
0.03
30.2
24
0.06
第14天
50
2.1
b
51
7
ab
52
8.2
a
4.6
5
0.00
11
0.00
20.25
7
0.00
11
0.26
0
第21天
10
11
b
10
59
a
10
78
a
16.1
10.00
05
0.30
34
0.02
30.00
40.29
5
10
67
10
51
11
6.1
10.5
31
80.76
18
第27天
16
45
16
69
16
63
20.98
0.69
87
0.54
80
0.00
80.69
14
0.01
17
88
17
43
17.68
0.83
47
0.49
69

**蛋白质消化率**
在试验的第28天，从每个笼子中的一只鸟身上收集回肠内容物，以确定蛋白质的表观回肠消化率（AID）。将回肠后半部分的内容物倒入小瓶中，并在-20°C下储存以备后续测定粗蛋白（CP）和酸不溶性灰分。之后，使用FreeZone 18 Liter Console冷冻干燥机（美国密苏里州堪萨斯城Labconco公司）将回肠消化物冷冻干燥超过4天。干燥后，使用研钵和杵手动研磨样品。根据Vogtmann等人（1975年）的方法，三次测定饲料和回肠消化物的酸不溶性灰分含量。使用Leco蛋白分析仪（Leco Corporation，美国马萨诸塞州圣约瑟夫市，型号Leco-FP-527L）测定消化物的粗蛋白含量。根据Adewole等人（2017年）的方法，使用不可消化标记物测定CP AID。

**肠道微生物群**
在试验的第21天收集回肠和盲肠的内容物，并在-80°C下储存。根据制造商的说明，使用QIAamp Powerfecal Pro DNA Kit（QIAGEN，德国希伦登，目录号51804）提取DNA。使用Nanodrop分光光度计评估DNA浓度和纯度。浓度超过200 ng/μL的样品被稀释以满足测序的最大浓度要求。使用Illumina MiSeq和Integrated Microbiome Resource（IMR - http://imr.bio，达尔豪斯大学）的细菌特异性双条形码引物V3-V4对细菌16S rRNA进行PCR扩增。使用Microbiome Helper Pipeline（Comeau等人，2017年）分析微生物群数据，并在用Cutadapt（Martin，2011年）修剪前后将高通量测序读数汇总为FASTQ文件。然后生成扩增子序列变异体（ASVs），并用Deblur过滤污染物，并将ASV丰度表汇总为QZA文件（Bolyen等人，2019年）。使用Greengenes 2（2022.10）作为参考数据库进行分类分配，SEPP（Janssen等人，2018年）。使用稀疏曲线确定所有样本的α多样性。

**统计分析**
使用Shapiro-Wilk检验（PROC UNIVARIATE，SAS 9.4，美国北卡罗来纳州卡里）评估数据的正态性。为了比较组均值，采用了方差分析（ANOVA）（PROC MIXED）。当均值显著不同时，使用Tukey范围检验（HSD）进行多处理比较。最后，使用PROC ORTHOREG进行RDE效应的正交多项式回归。统计显著性设置为P < 0.05，趋势观察为0.05 < P < 0.10。

IgM浓度数据显示非参数分布，最佳拟合为伽马分布。因此，在使用SAS 9.4的PROC GLIMMIX进行分析之前，对数据进行了对数转换。当均值显著不同时，使用Tukey范围检验比较多种处理。

在肠道微生物群中，使用PROC MIXED在SAS 9.4中分析了饮食处理和挑战模型的香农熵。使用STAMP v2.1.3（Parks和Beiko，2015年）和Kruskal-Wallis H检验分析了ASV的差异丰度。在盲肠中，这种挑战减少了Saccharopolyspora和Ruminococcus属以及Christensenellaceae R-7群的相对丰度，同时增加了Romboutsia的数量（P<0.05）。球虫病疫苗挑战对回肠和盲肠微生物群的影响如图2所示。RDE对回肠或盲肠内容物的α多样性没有显著影响（P>0.05）。0.30%的RDE含量略微减少了回肠中的蓝细菌数量（P=0.0740），而0.15%的RDE含量则显著增加了酸杆菌群的相对丰度（P=0.0120）。与0.30% RDE组和对照组相比，0.15% RDE显著增加了Eubacterium hallii在盲肠中的相对丰度（P=0.0370）。RDE在盲肠和回肠微生物群中的影响如图3所示。下载：下载高分辨率图像（162KB）下载：下载全尺寸图像

图2. 盒形图显示了回肠微生物群之间的显著差异（Kruskal-Wallis H检验）。球虫病疫苗挑战减少了Proteobacteria门、Enterococcus属、Butyricicoccus属、Subdoligranulum属和Eubacterium hallii群的相对丰度。同时，增加了Lactobacillus spp. C组的相对数量；U为未受挑战组。

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图3. 盒形图显示了盲肠微生物群之间的显著差异（Kruskal-Wallis H检验）。球虫病疫苗挑战显著减少了Christensenellaceae（R-7群）、Ruminococcus属和Saccharopolyspora属的相对丰度，同时增加了Romboutsia的数量；C为受挑战组，U为未受挑战组。

讨论
球虫病疫苗挑战对整体生长性能没有显著影响，表明该挑战模型较为温和，反映了亚临床水平的Eimeria感染。此类模型常用于评估肠道的恢复能力和免疫激活，而不会引起严重的病理变化或死亡（Souza等人，2024年）。在本研究中，尽管生长性能保持不变，但挑战导致了肠道形态、免疫器官重量和微生物组成的变化，表明存在肠道压力。虽然Eimeria疫苗挑战模型似乎没有影响整体生长性能或IgM水平，但它确实导致了肠道形态和器官重量的负面变化，表明存在肠道损伤和炎症过程。这种明显的病理效应并未影响饲料摄入量（FI）、体重（BWG）或饲料转化率（FCR），这是轻度但有效的Eimeria感染挑战的常见特征（Wang等人，2019年）。此外，接受疫苗挑战的鸡只体内与短链脂肪酸（SCFA）产生相关的细菌数量减少，而SCFA是肠道炎症的关键指标（Liu等人，2024年）。受影响的细菌包括有益菌群，如Faecalibacterium和Butyricicoccus（Eeckhaut等人，2016年；Kumari等人，2021年；Miquel等人，2013年）以及产生丙酸的Eubacterium hallii（Engels等人，2016年；Kumari等人，2021年）和Subdoligranulum属及Enterococcus属，这些细菌的作用机制尚不清楚，但它们与健康个体的肠道健康和SCFA产量增加有关（Van Hul等人，2020年；Wang等人，2020年）。然而，在受挑战的鸡只中，Lactobacillus的相对丰度增加，可能是由于乳酸菌的补偿性富集（Guo等人，2025年）。同时，在盲肠中，这种挑战减少了与健康微生物相关的细菌数量，如Ruminococcus和Christensenellaceae R-7群（La Reau & Suen，2018年；Waters & Ley，2019年）以及天然抗生素生产者Saccharopolyspora（Peckman & Kharel，2024年）；同时增加了简单碳水化合物发酵菌Romboutsia的数量（Gerritsen等人，2017年）。这类细菌的减少通常是由于肠道炎症导致的，炎症会导致肠道腔和组织的氧合异常，从而抑制SCFA生产菌的生长，因为这些细菌大多是专性厌氧菌（Liu等人，2024年）。SCFA（如丁酸、乙酸和丙酸）是肠道组织及周围组织的重要能量来源（Bergman，1990年；Sun等人，2021年）。0.15%的RDE含量显著增加了酸杆菌群和Eubacterium hallii的相对丰度，这与Erinle等人（2023b）的先前研究结果相似，他们在研究中发现0.3%和0.5%的RDE含量略微改善了盲肠中Actinobacteriota和Bifidobacterium的相对丰度。虽然未直接测量短链脂肪酸的浓度，但这些微生物群的变化是基于文献中已建立的功能关联进行解释的。因此，这些发现应被视为关联性的而非机制性的。未来包含功能终点（如SCFA定量或宏基因组分析）的研究将有助于确认观察到的微生物变化的代谢后果。

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图4. 红花狗木提取物（RDE）添加对盲肠（A和B）和回肠微生物群（C）的影响。0.15%的RDE含量增加了酸杆菌群和Eubacterium hallii属的相对丰度。在回肠中，0.30%的RDE含量减少了蓝细菌门的相对数量。

与之前的研究（Erinle等人，2022年；Mogire等人，2021年）一致，RDE的添加改善了整体生长性能。在试验的第0至14天和第0至21天，饲料摄入量和平均体重（ABWG）有所增加。此外，在试验的第一周，0.30%的RDE添加使饲料转化率（FCR）最高。第28天CP AID的二次增长可能解释了RDE对生长性能的改善。RDE增加了脾脏的相对重量而不影响法氏囊或肝脏的相对重量，这表明其具有靶向的免疫调节作用，类似于其他植物源饲料添加剂（如迷迭香、薄荷和生姜）的效果（Ghozlan等人，2017年；Herve等人，2018年；Hosseinzadeh等人，2023年），这些添加剂可以促进B细胞和T细胞的分化，从而增加脾脏重量。随着RDE含量的增加，胫骨断裂强度的线性下降可能是由于某些多酚（包括没食子酸，红花狗木提取物中含量丰富）的钙螯合作用（Sarjit等人，2015年）所致。重要的是，这种效应并未伴随骨骼重量、生长性能或肉产量的下降。0.30%添加量下的更明显下降表明，较高的RDE添加量可能需要调整矿物质补充剂，这突显了在添加富含多酚的植物源添加剂时优化剂量的重要性。喂食0.15% RDE的鸡只大腿的相对重量高于0.30% RDE的鸡只。这一剂量还使疫苗挑战组的绒毛高度最高、隐窝深度最低，并改善了VH:CD比率，表明其在免疫压力下的显著益处。脾脏重量的增加表明RDE引发了淋巴细胞和巨噬细胞的增殖、分化和动员（Gao等人，2009年）。这与RDE还增加了产生SCFA的细菌相对数量的现象一致，因为已知丁酸、丙酸等SCFA会影响免疫细胞的分化（Brown等人，2003年；Gao等人，2009年）。这些变化也可能解释了RDE添加后IgM水平升高的现象。

因此，考虑到RDE对蛋白质消化率、空肠组织形态和肠道微生物群的好处，0.15%的添加量可能不会像0.30%那样显著提高生长率，但它能提供最佳的肠道完整性并优化营养利用，同时不会对肉产量或胫骨负荷产生负面影响。

作者贡献
概念构思：DA
数据整理：IP
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资金获取：DA
研究：IP, DA
方法学：IP, DA
项目管理：DA
资源：DA
监督：DA
写作——初稿：IP
写作——审阅和编辑：IP, DA

未引用的参考文献：
Erinle等人，2023年；Erinle等人，2022a年；Mogire等人，2021a年；Mogire等人，2021b年

CRedI作者贡献声明：
Italo Santos Reis Pereira：写作——审阅与编辑；写作——原始草稿；方法学；研究；数据整理。
Deborah Adewole：写作——审阅与编辑；验证；监督；项目管理；方法学；研究；资金获取；概念构思。