德克萨斯州南部两种共栖猫科动物身上的硬蜱和跳蚤侵扰及其相关细菌

《Ticks and Tick-borne Diseases》：Ixodid and flea infestations and associated bacteria on two sympatric felid species in South Texas

　　艾伦·T·肖勒 | 希拉里·斯沃茨 | 玛雅·默里 | 阿丽莎·纳尔逊 | 亚历山大·R·克诺贝赫尔 | 莎拉·M·冈特
美国农业部，农业研究服务局，克尼普林-布什兰美国牲畜昆虫研究实验室，弗雷德里克斯堡路2700号，克尔维尔，德克萨斯州，78028，美国

**摘要**
硬蜱和跳蚤会寄生在野生猫科动物身上，并可能传播对兽医和公共卫生构成威胁的病原体。我们从同域分布的南德克萨斯山猫（L. rufus）和豹猫（L. pardalis）身上收集到了硬蜱和跳蚤样本。与以往的研究相比，这两种猫科动物身上的硬蜱种类更为丰富：山猫身上发现了三个属的七种硬蜱，豹猫身上发现了三个属的六种硬蜱。我们首次在德克萨斯州的山猫身上发现了热带马蜱（Dermacentor nitens），并在两种猫科动物身上都发现了Ixodes keiransi。尽管假卡宴蜱（Amblyomma tenellum）的若虫在豹猫身上的数量最多，但这是在美国首次记录到该蜱种的存在。在跳蚤方面，这两种猫科动物几乎全部（>99%）感染了猪蚤（Pulex porcinus）。在豹猫身上还发现了一只猫蚤（Ctenocephalides felis），这是该物种在德克萨斯州的首次记录。分子分析显示，从这些猫科动物身上采集的硬蜱中检测到了无形体属（Anaplasma spp.）、埃立克体属（Ehrlichia spp.）、螺旋体属（Borrelia spp.）和立克次体属（Rickettsia spp.）细菌。虽然每种细菌群体都存在于某些硬蜱中，但美洲犬蜱（Dermacentor variabilis）在山猫身上特别容易携带无形体属细菌，而普通钝缘蜱（Amblyomma inornatum）在豹猫身上则容易携带立克次体属细菌。虽然其中一些细菌可能对脊椎动物具有致病性，但许多可能是内共生菌，我们的研究结果表明这两种猫科动物目前面临较低的蜱传疾病风险。这些结果对美墨边境地区的公共卫生和兽医健康具有重要意义，因为蜱虫分布范围的扩大、气候变化导致的栖息地变化以及人类与野生动物接触的增加都增加了病原体传播的可能性。

**1. 引言**
硬蜱是一种广泛分布的医学和兽医外寄生虫，它们以多种脊椎动物为食，并能传播许多对公共卫生具有重要影响的病原体（疾病控制中心，2018年；Eisen等人，2017年；Nicholson等人，2019年；Sonenshine和Roe，2013年）。在北美，多种硬蜱物种会寄生在家猫（Felis catus）（Akucewich等人，2002年；Little等人，2018年；Saleh等人，2021年；Shannon等人，2017年；Thomas等人，2016年）以及多种野生猫科动物身上，如美洲狮（Puma concolor）（Wehinger等人，1995年）、美洲豹（Panthera onca）和 Jaguarundis（Herpailurus yagouarundi）（López-Pérez等人，2022年）、山猫（Lynx rufus）和豹猫（Leopardus pardalis）（Kohls和Rogers，1953年；Saleh等人，2021年；Sergio等人，2015年；Wehinger等人，1995年）。野生和家养猫科动物还携带能够传播疾病的跳蚤（Rust，2017年）。这些猫科动物可能携带诸如无形体病、细胞浆虫病、埃立克体病、兔热病、巴通体病和立克次体病等病原体（Nagamori和Reichard，2015年；Akucewich等人，2002年；Birkenheuer等人，2006年；Magnarelli等人，2005年；Occi等人，2019年；Saleh等人，2021年；Shannon等人，2017年；Shock等人，2011年），这些疾病对伴侣动物健康甚至人类健康构成持续威胁。随着气候变化、土地利用变化以及野生动物与人类接触范围的扩大，野生猫科动物可能成为美墨边境地区蜱传病原体生态变化的预警指标。

尽管豹猫在美国处于濒危状态，但山猫在从加拿大南部到墨西哥南部的许多生态系统中数量相对较多，包括荆棘灌木丛、沙漠、森林和草原（Barcenas和Medellin，2021年；Hall，1981年）。豹猫的分布范围从亚利桑那州南部和德克萨斯州延伸到中美洲和南美洲（Gonzalez等人，2003年），它们栖息在红树林、稀树草原、荆棘灌木丛和海拔低于1200米的热带森林中（Murray和Gardner，1997年；Nowell和Jackson，1996年）。这两种猫科动物共存的栖息地还包括家畜、自由活动的家养动物以及不断扩大的城市周边人口。因此，了解这些同域分布的猫科动物所携带的外寄生虫及其相关细菌对于研究病原体的传播途径至关重要。本研究的目的是识别南德克萨斯州山猫和豹猫身上的硬蜱和跳蚤种类，并确定采集到的硬蜱中是否存在潜在的致病细菌。

**2. 方法**
2.1. 硬蜱和跳蚤
我们在德克萨斯州卡梅伦县东部的拉古纳阿塔斯科萨国家野生动物保护区（LANWR）以及附近的Farm-to-Market Road 106公路沿线使用金属盒陷阱（Tomahawk公司，威斯康星州托马霍克）捕捉山猫和豹猫。这些陷阱被放置在距离道路或动物路径100米内的豹猫偏好的塔毛利潘荆棘灌木丛中（Ewing和Best，2004年）。陷阱使用了视觉诱饵（闪亮的CD光盘和金属流苏），悬挂在距离陷阱开口3-5米处以吸引猫科动物的注意，并在陷阱后部的单独金属盒中放置活的岩鸽（Columba livia）作为诱饵以将猫引入陷阱。捕获动物后，按照既定程序（Sternberg和Swarts，2021年）进行麻醉、数据收集、追踪项圈佩戴、药物逆转处理、恢复和释放。动物捕捉属于美国鱼类和野生动物服务局的常规动物护理工作，因此无需IACUC批准。用镊子从捕获的动物身上取出若虫和成虫硬蜱并放入70%乙醇中保存；由于幼虫体型太小难以检测，因此未进行采集。山猫身上的跳蚤被收集到一个乙醇小瓶中，而豹猫身上的跳蚤则分别保存在标记好的乙醇小瓶中。样本被冷藏后邮寄至美国农业部-动植物卫生检验局国家兽医服务实验室（NVSL），爱荷华州艾姆斯市，在那里使用立体显微镜和标准形态学鉴定钥匙及其他参考资料对节肢动物进行鉴定（Alfred和Mertins，2022年；Eads，1950年；Nava等人，2023年；Strickland等人，1976年），并对成虫样本进行性别鉴定。

2.2. 硬蜱中的细菌
随后将硬蜱邮寄至德克萨斯州休斯顿的贝勒医学院，用无菌手术刀沿矢状面将每个硬蜱切成两半：一半用于提取核酸；另一半保存以备后续使用。使用QIAGEN DNeasy Blood and Tissue Kit（QIAGEN，加利福尼亚州瓦伦西亚）提取基因组DNA，并在添加蛋白酶K后于56°C下过夜孵育。提取的DNA通过NanoDrop分光光度法进行定量，以确保提取成功且含有足够的DNA用于PCR扩增（NanoVue Plus，GE Healthcare，伊利诺伊州芝加哥）。初步使用针对无形体属、螺旋体属和立克次体属的引物和循环条件进行实时聚合酶链反应（PCR）检测（补充表1）。PCR在QuantStudio 5系统（ThermoFisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆）上进行；阳性样本进一步使用物种水平的终点PCR检测。对于无形体属阳性样本，首先使用针对埃立克体属细菌的两种终点PCR进行扩增，分别检测柠檬酸合成酶基因（gltA）和二硫键形成蛋白基因（dsb）；然后使用针对无形体16S rRNA基因的PCR进行检测。对于螺旋体属阳性样本，使用针对基因间间隔区（IGS）和鞭毛蛋白（flaB）基因的PCR进行扩增。对于循环阈值≤30的立克次体属阳性样本，进一步使用针对外膜蛋白A（ompA）和丝氨酸蛋白酶HTRA（hrtA）基因的PCR进行检测。所有PCR产物通过1%琼脂糖凝胶电泳可视化（Wide Mini-Sub Cell GT，Bio-Rad Laboratories，加利福尼亚州赫拉克勒斯）。对于嵌套或半嵌套反应，使用无菌手术刀从凝胶中切割出适当大小的条带，并使用QIAGEN Gel Extraction Kit提取条带。对于单次PCR反应，使用QIAGEN QIAquick PCR Purification Kit进行纯化。

从提取的DNA中获取正向和反向序列，由Lone Star Labs（德克萨斯州休斯顿）进行Sanger测序。具有清晰色谱图的序列进一步分析。正向序列及其反向互补序列使用Molecular Evolutionary Genetics Analysis 11（MEGA11，宾夕法尼亚州费城）进行比对。每个比对结果的最高匹配序列的物种鉴定、登录号和匹配百分比均被记录下来。

**3. 结果**
2017年5月6日至2021年2月3日期间共捕获并采样了15只成年山猫（表1，补充表2）；2012年3月3日至2021年5月18日期间共捕获并采样了16只豹猫（表1，补充表3）。在山猫身上发现了7种硬蜱，包括Amblyomma inornatum、Amblyomma maculatum、Amblyomma mixtum、Amblyomma tenellum、Dermacentor nitens、Dermacentor variabilis和Ixodes keiransi（表1，补充表2）。在15只山猫中，有1只没有硬蜱；从14只山猫身上收集的128只硬蜱中，96.1%为成虫（Dermacentor variabilis的感染率为93.3%，平均感染强度为8.9；表1，补充表2）。在山猫身上发现1只Amblyomma inornatum；从山猫硬蜱中总共收集到3只Amblyomma mixtum若虫，感染率为20%，平均感染强度为1.0。从山猫身上还收集到2只雌性、1只雄性和2只Amblyomma tenellum若虫，感染率为20%，平均感染强度为1.7。从山猫身上还收集到1只雌性Amblyomma maculatum、1只雌性Dermacentor nitens、1只雄性Amblyomma inornatum和1只雌性和1只雄性Ixodes keiransi（表1，补充表2）。

表1. 从德克萨斯州卡梅伦县LANWR的山猫（L. rufus）和豹猫（L. pardalis）身上收集到的成虫和外寄生虫
| 宿主物种 | 外寄生虫分类 | 检测到的物种 | 收集到的成虫数量 | 收集到的若虫数量 |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| 山猫（L. rufus） | 硬蜱 | Dermacentor variabilis | 41只（雌性41只，雄性74只） | 0只 |
| Ixodes keiransi | 1只（雌性1只，雄性1只） | 0只 |
| Amblyomma tenellum | 2只（雌性2只，雄性1只） | 2只 |
| Amblyomma mixtum | 0只 | 3只 |
| Dermacentor nitens | 1只（雌性1只，雄性0只） | 0只 |
| Amblyomma inornatum | 1只（雄性1只） | 0只 |
| 豹猫（L. pardalis） | 硬蜱 | Dermacentor nitens | 3只（雌性3只，雄性1只） | 17只 |
| Amblyomma mixtum | 0只 | 17只（雌性9只，雄性7只） | 0只 |
| Amblyomma inornatum | 9只（雌性9只，雄性7只） | 0只 |
| Amblyomma tenellum | 3只（雌性3只，雄性1只） | 35只 |
| Dermacentor variabilis | 17只（雌性17只，雄性13只） | 0只 |
| Ixodes keiransi | 1只（雌性1只） | 0只 |
| 跳蚤 | Pulex porcinus | 83只（雌性83只，雄性6只） | 1只 |
| Ctenocephalides felis | 1只（雄性1只） | 0只 |

豹猫（所有个体均携带至少1只硬蜱）共携带108只硬蜱，其中49只为若虫，55只为成虫，包括Amblyomma inornatum、Amblyomma mixtum、Amblyomma tenellum、Dermacentor nitens和Ixodes keiransi（表1，补充表3）。Dermacentor variabilis在12只豹猫身上共发现30只（感染率为75%，平均感染强度为2.5；表1，补充表3）。6只豹猫（感染率为37.5%）携带Amblyomma mixtum，全部为若虫，其中1只为雌性（平均感染强度为2.8；表1，补充表3）。在5只豹猫身上共发现35只Amblyomma tenellum（感染率为31.2%，感染强度为7.8%，包括31只若虫和4只成虫；表1，补充表3）。6只豹猫（感染率为37.5%）携带16只Amblyomma inornatum，其中9只为雌性，7只为雄性（表1，补充表3）。从山猫身上收集到的62只跳蚤全部为Pulex porcinus，包括41只雌性和21只雄性。16只豹猫中有11只（感染率为68.8%，平均感染强度为13.1）每只至少携带1只跳蚤（表1，补充表4）。在145只豹猫跳蚤中，99.3%为Pulex porcinus，其中57.3%为雌性，42.7%为雄性（表1，补充表4）。仅1只豹猫（感染率为0.7%）携带Ctenocephalides felis（雄性；表1，补充表4）。

2.3. 硬蜱中的细菌
初步检测发现236只硬蜱中有35只（14.8%）携带细菌，包括11只中的无形体属、4只中的螺旋体属和20只中的立克次体属（表2）。第二轮分子检测在35只硬蜱中发现了8种细菌的DNA，包括3种已命名细菌和5种额外的操作分类单元（表3）。未在单个硬蜱样本中发现这些细菌的共感染现象。最初在Amblyomma inornatum和Dermacentor variabilis中检测到无形体属DNA。后续的物种水平检测在Amblyomma inornatum中检测到Ehrlichia ewingii（登录号PZ099897，与GenBank记录DQ365880的匹配度为97%）。在Dermacentor variabilis中检测到Anaplasma bovis（登录号PZ025925–30，与GenBank记录OK560164的匹配度超过99%）、未指定的埃立克体菌株和未指定的无形体菌株（表3）。伯氏疏螺旋体（Borrelia）的DNA仅出现在D. variabilis样本中，其与B. puertoricensis（Bermúdez等人，2021年）参考序列的匹配度最高，达到95%（Bermúdez等人，专利编号PZ205229–31，与GenBank记录CP075379.1的匹配度也为95%）（表3）。在A. tenellum和D. nitens中未检测到细菌DNA。在A. inornatum、A. mixtum、D. variabilis和I. keiransi中发现了立克次体DNA（表1，补充表4）。后续的物种水平检测确认D. variabilis中存在Rickettsia rhipicephali（专利编号PZ106364–5，与GenBank记录KP861346.1的匹配度超过99%）（表3）。

表2. 根据猫科动物和蜱虫种类，初步通过实时聚合酶链反应（PCR）检测到的Anaplasmataceae、伯氏疏螺旋体属（Borrelia spp.）和立克次体属（Rickettsia spp.）的DNA。

蜱虫种类、性别、生活阶段：
- L. rufus
- L. pardalis

| 蜱虫种类 | 性别 | 生活阶段 | Anaplasmataceae | 伯氏疏螺旋体属（Borrelia spp.） | 立克次体属（Rickettsia spp.） |
|---------|-------|-------------|------------------|----------------------|
| Amblyomma inornatum | 成年雌性 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0/0/0/0/0/0/0/0/0/0 |
| Amblyomma maculatum | 成年雌性 | 0/10 | 0/10 | 0/0/0/0/0/0/0/0/0/0/0/0 | 0/0/0/0/0/0/0/0 |
| Amblyomma mixtum | 成年雌性 | 0/0 | 0/0 | 0/0/0/0/0/0/0/0/0/0/0/0 | 0/0/0/0/0/0/0/0 |
| Amblyomma tenellum | 成年雌性 | 0/20 | 0/20 | 30/30 | 17/17/1/17 |
| Dermacentor nitens | 成年雌性 | 0/10 | 10/10 | 30/30 | 3/35/0/35/0/35/0/35 |
| Dermacentor variabilis | 成年雌性 | 3/41 | 11/41 | 11/41 | 1/17/1/17/1/17 |
| Dermacentor variabilis | 成年雄性 | 6/74 | 1/74 | 2/74 | 0/13/1/13/0/13/0/13 |
| Ixodes keiransi | 成年雌性 | 0/10 | 11/10 | 10/10 | 0/0/0/0/0/0/0/0 |

表3. 在德克萨斯州南部野生猫科动物身上发现的蜱虫中检测到的细菌种类DNA。

表3. 在德克萨斯州南部野生猫科动物身上发现的蜱虫中检测到的细菌种类。

**讨论：**
此前关于德克萨斯州南部野生猫科动物的众多研究中，很少有研究将重点放在它们的体外寄生虫上。尽管Mercer（1988年）和Reeves（2022年）偶然提到了在L. rufus和L. pardalis身上发现的某些蜱虫和跳蚤，但迄今为止报道的L. rufus上的蜱虫多样性最高为五种（Forrester，1992年；Wehinger等人，1995年）。除德克萨斯州外，没有其他研究报道在L. pardalis上发现超过三种蜱虫。然而，Guglielmone等人（2021年）的文献综述指出，L. pardalis上总共出现了九种蜱虫（其中三种是偶然发现的）。我们在每种猫科动物身上都发现了六种蜱虫，而L. rufus上还发现了一种额外的Amblyomma maculatum。

Dermacentor variabilis（所有成虫）在我们的L. rufus样本中最为常见，且在L. pardalis中也很普遍。其分布范围包括美国西经约105°以东的地区（Lehane等人，2020年）、邻近的加拿大南部（Lindquist等人，2016年）以及邻近的墨西哥北部（Guzmán-Cornejo等人，2016年）。虽然成年Dermacentor variabilis寄生于各种中型到大型哺乳动物，但其幼虫主要寄生于小型哺乳动物，尤其是啮齿类动物（Bishopp和Trembley，1945年；Lindquist等人，2016年）。此前已有记录显示Dermacentor variabilis存在于德克萨斯州南部的两种猫科动物身上（Eads，1951年；Mercer等人，1988年；Reeves，2022年）。

在我们的L. pardalis样本中，三种Amblyomma属蜱虫较为常见：A. inornatum、A. mixtum和A. tenellum。这三种蜱虫也存在于我们采集的L. rufus样本中，但数量较少。它们主要分布在温暖地区，北界约为北纬29°（Eads，1951年；Eads和Borom，1975年；Guglielmone等人，2021年，2023年）。A. inornatum的分布范围从德克萨斯州延伸至哥伦比亚和厄瓜多尔（Alfred和Mertins，2022年；Guglielmone等人，2021年）；A. tenellum的分布范围完全包含在A. mixtum的南部，直至尼加拉瓜（Düttmann等人，2016年；Guzmán-Cornejo等人，2016年；Guglielmone等人，2021年）。在LANWR地区，A. tenellum的数量是A. mixtum的4倍以上（Hilburn等人，1989年；Showler，2023年；美国农业部，未发表数据），这可能解释了为什么我们在两种猫科动物身上发现更多的A. tenellum。与我们的研究不同，大多数关于德克萨斯州南部蜱虫的先前研究未包括A. mixtum和A. tenellum的幼虫阶段，因为区分它们在当时是不可靠或不方便的，直到Alfred和Mertins（2022年）提供了准确的方法。

尽管A. inornatum、A. mixtum和A. tenellum的所有发育阶段都寄生于中型到大型哺乳动物（Eads和Borom，1975年；Hoogstraal和Aeschlimann，1982年），但A. inornum的幼虫主要寄生于小型哺乳动物，尤其是啮齿类动物和地面活动的鸟类（Eads和Borom，1975年；Light等人，2020年）。因此，我们在猫科动物身上仅发现了A. inornum的成虫。相反，由于我们能够识别并记录下样本中的A. mixtum幼虫，我们发现了此前未报道的A. mixtum和A. tenellum在猫科动物身上的存在情况。A. mixtum仅以若虫形式存在，而A. tenellum，尤其是在L. pardalis上，是最丰富的蜱虫种类。在我们研究中，这只感染最严重的L. pardalis上有27只蜱虫，其中22只是A. tenellum，包括20只若虫。总体而言，在两种猫科动物身上，A. mixtum和A. tenellum的若虫数量远远超过成虫。在墨西哥也有报道显示A. mixtum和A. tenellum存在于L. pardalis上（Guzmán-Cornejo等人，2024年；Light等人，2019年），但我们的研究是首次在美国记录到A. tenellum存在于L. pardalis上（德克萨斯州南部还有13份未发表的NVSL记录）。

Dermacentor nitens原产于美洲热带地区（Barros-Battesti等人，2006年；Guglielmone等人，2021年，2023年），在20世纪60年代曾是佛罗里达州的短暂外来寄生虫（Strickland和Gerrish，1964年），但其通常的北界位于德克萨斯州南部（James和Frier，2004年）。Hoogstraal和Aeschlimann（1982年）认为Dermacentor nitens是一种“严格单宿主”寄生虫，主要寄生于鹿类，但在某些地区也会寄生于其他哺乳动物，包括家马、牛和狗（Bishopp和Trembley，1945年；Strickland等人，1976年；Nava等人，2017年）。目前尚未有报道显示Dermacentor nitens存在于德克萨斯州南部的L. rufus和L. pardalis上，但NVSL有两条未发表的记录（1991年，2012年）。我们采集的两种受感染的猫科动物身上的Dermacentor nitens都显示出附着和取食的迹象，然而，野生猫科动物是否能够维持Dermacentor nitens的种群仍存疑（Rodrigues等人，2017年）。

Nava等人（2023年）和Rodríguez-Vivas等人（2023年）指出“I. affinis”是由至少四种新热带和近北界的蜱虫组成的复合体。在美国东南部、墨西哥南部和伯利兹发现的种群被描述为一个新物种I. keiransi（Rodríguez-Vivas等人，2024年）。2012年，最初被鉴定为I. affinis幼虫的个体是从LANWR的一种Peromyscus属鼠类中采集到的（NVSL编号12–007,486，案例TW12–119）。2015年末后，NVSL在德克萨斯州南部从白尾鹿（Odocoileus virginianus）和一种野生尼莱羚羊（Boselaphus tragocamelus）中发现了30只I. keiransi成虫。I. keiransi是我们在L. rufus和L. pardalis上发现的唯一其他蜱虫种类。这是首次在德克萨斯州野生猫科动物上记录到这种蜱虫。

我们在L. rufus上仅采集到一只雌性Amblyomma maculatum。这种蜱虫的分布范围从康涅狄格州（Molaei等人，2021年）延伸至密苏里州南部、伊利诺伊州和印第安纳州（Molaei等人，2024年），并覆盖南美洲西北部沿海地区（Teel等人，2010年）。它通常栖息在草原地带（Teel等人，2010年）；因此，LANWR地区的L. rufus和L. pardalis所喜爱的密集灌木丛可能是它们较少出现的原因。A. inornum的幼虫主要寄生于小型哺乳动物和地面活动的鸟类；而成虫则倾向于寄生于中型到大型哺乳动物，尤其是有蹄类动物（Guglielmone等人，2021年；Teel等人，2010年）。此前已有记录显示它存在于德克萨斯州南部的L. rufus和L. pardalis上（Mercer等人，1988年；美国农业部，未发表数据）。

在我们发现的跳蚤中，只有北美特有的P. porcinus存在于德克萨斯州南部的L. rufus和L. pardalis上（Mercer等人，1988年；Reeves，2022年；美国农业部，未发表数据）。它曾被认为是一种罕见的、专门寄生于领猪（Dicotyles tajacu，Jordan和Rothschild，1923年）的跳蚤，但后来在德克萨斯州乌瓦尔德县的一只L. rufus上也发现了它（Eads，1951年）。其分布范围似乎仅限于D. dicotyles的栖息地（Eckerlin，2005年；Hightower等人，1953年；Mays Maestas等人，2024年；Samuel和Low，1970年；Samuel和Trainer，1970年）。此前已有记录显示它存在于德克萨斯州25个以上的县（Eads，1950年；Oliver和Eckerlin，2022年；美国农业部，未发表数据）。

我们在这里报告了在德克萨斯州L. pardalis上第二次采集到的C. felis（一个样本），此前Navarro Lopez（1985年）曾首次记录到该物种。在我们的研究中未在L. rufus上发现C. felis，也未在其他德克萨斯州地区发现相关记录，但在佛罗里达州（Layne，1971年）、乔治亚州（Azad等人，1997年；Durden等人，2012年；Morlan，1952年）和墨西哥（Barrera，1954年；Light等人，2019年；Méndez，1990年）也有记录。C. felis是全球范围内至少寄生于138种野生哺乳动物的蜱虫（Clark等人，2018年），通常是从受跳蚤感染的家猫身上传播过来的。

在我们研究中发现的九种体外寄生虫中，有七种是德克萨斯州南部的本地物种，与所研究的猫科动物共同进化。然而，I. keiransi和C. felis是外来物种，分别在不同时间传入。尽管I. keiransi可能长期存在于德克萨斯州每个县（Eads，1950年），但它似乎并未显著感染当地野生猫科动物。NVSL的蜱虫鉴定档案表明，I. keiransi可能是通过迁徙鸟类传入LANWR地区的（Heller等人，2016年；Scott等人，2016年），最早在2012年之前就已经存在。自那时起，其本地种群一直在使用野生有蹄类动物作为宿主持续增长。

Rhipicephalus（Boophilus） microplus是一种经济上重要的牲畜害虫，虽然在当地经过多年努力已被根除（Osbrink等人，2020年；Showler，2023年），但它仍然是LANWR地区的外来寄生虫。它是一种主要寄生于有蹄类动物的单宿主蜱虫（Hoogstraal和Aeschlimann，1982年），但在我们的研究中未发现它的存在。然而，有记录显示它在其他地区偶尔也会寄生于L. pardalis（Arag?o等人，1936年；Labruna等人，2005年；Souza等人，2021年；Light等人，2019年），也许在德克萨斯州南部也是如此。记录这些R. microplus发现的作者强调它们是机会性的、偶然出现的，并且仅存在于以牛为主要宿主的农业景观中。

在我们的研究中，一种未鉴定的立克次体是最常见的细菌，尤其是在L. pardalis上的蜱虫中。之前已有报道显示，在德克萨斯州南部，四种携带立克次体的蜱虫物种曾感染过多种立克次体（Gonzalez等人，2025年；Medlin等人，2015年；Williamson等人，2010年）。我们研究中唯一明确鉴定出的立克次体是R. rhipicephali，它在从L. rufus采集的两只D. variabilis样本中被发现。这种细菌已知会感染北美和南美的四种蜱虫属，之前也在德克萨斯州的D. variabilis中检测到（Mitchell等人，2016年）。

由于蜱虫传播的立克次体细菌可以以多种方式发挥作用，从蜱虫的共生体到宿主病原体不等（Rymaszewska和Piotrowski，2024年），我们不愿对未鉴定的立克次体物种的致病性进行推测。此外，即使在我们的两种D. variabilis样本中仅发现的R. rhipicephali也被认为通常是无害的，可能对受感染的蜱虫具有益处（Dumler和Walker，2024年；Macaluso等人，2002年）。

Anaplasma bovis是我们检测到的两种致病细菌之一，存在于六只来自L. rufus的D. variabilis样本中。我们还在三只来自L. rufus的D. variabilis样本中检测到了另一种Anaplasma属细菌，但无法鉴定其具体种类。据我们所知，此前尚未在D. variabilis中发现Anaplasma bovis，尽管Yabsley等人（2006年）在德克萨斯州南部受H. leporispalustris感染的两种兔形目动物中检测到类似Anaplasma bovis的细菌。

我们在四只蜱虫样本中检测到了伯氏疏螺旋体（Borrelia）DNA，均为D. variabilis，每只猫科动物上有两只受感染的个体。来自L. rufus的样本和一只来自L. pardalis的样本中的伯氏疏螺旋体DNA与B. puertoricensis的参考序列最为相似，后者属于蜱传回归热（TBRF）组的伯氏疏螺旋体属。B. puertoricensis首次在巴拿马的Alectorobius puertoricensis（Fox）蜱虫中被发现（Bermúdez等人，202在这个亚组中，Lin等人（2005年）和Williamson等人（2010年）从德克萨斯州的D. variabilis中分离出一种TBRF螺旋体——Candidatus Borrelia texasensis。最近，Mays Maestas等人（2025年）进一步分析了这种细菌的现状，他们在当地Cameron县的Alectorobius talaje（Guérin-Méneville）中发现了这种细菌。新发现的细菌DNA与B. puertoricensis的DNA有96-99%的相似性，作者推测这些细菌要么是通过蜱虫和螨虫在同一宿主体上共餐而获得的短暂感染，要么是当地D. variabilis种群中存在的一种相似但尚未被识别的Borrelia物种。另一种已知的致病细菌是Ehrlichia ewingii，但仅在一只来自L. pardalis的A. inornatum中微量存在。Medlin等人（2015年）和Gonzalez等人（2025年）报道了这种蜱虫感染E. ewingii的情况，但A. americanum是这种病原体的唯一已知传播媒介（Long等人，2004年）。

需要注意的是，本研究分析的样本来自从宿主体上采集的吸血蜱虫。细菌病原体的鉴定需要谨慎对待，因为我们无法确定检测到的DNA是来自宿主的血液还是蜱虫体内的感染。

**5. 结论**
本研究全面描述了德克萨斯州南部L. rufus和L. pardalis身上的蜱虫、跳蚤及其相关细菌寄生虫，揭示了比以往记录更多的外寄生虫种类。我们的分子筛查表明，野生猫科动物感染具有临床意义的蜱传疾病的风险较低，大多数检测到的细菌可能是内共生菌或致病性不确定的微生物。尽管如此，检测到包括Anaplasma bovis和Ehrlichia ewingii在内的已知人畜共患病和兽医病原体，强调了持续监测的重要性。随着气候变化、土地利用变化以及野生动物-人类-家畜界面的扩大，美洲山猫和豹猫可能成为监测新兴蜱虫和病原体动态的重要指标。对野生动物宿主、外寄生虫和细菌病原体的持续综合监测对于预测和缓解这一快速变化地区的公共卫生和兽医健康风险至关重要。

**资金来源**
本研究得到了美国农业部农业研究服务局、美国鱼类及野生动物服务局、休斯顿动物园、Laguna Atascosa之友组织以及Helen C.和Robert J. Kleberg, Jr.基金会的资助。本文中提及的商标名称或商业产品仅用于提供具体信息，并不代表美国农业部的推荐或认可。

**作者贡献声明**
Allan T. Showler：撰写——审阅与编辑、撰写——初稿、可视化、监督、项目管理、方法学、调查、数据分析、概念化。
Hilary Swarts：撰写——初稿、资源获取、方法学、调查、数据管理。
Maya Murry：调查。
Alisa Nelson：调查。
Alexander R. Kneubehl：调查。
Sarah M. Gunter：撰写——初稿、资源获取、方法学、调查、数据管理。