亚洲玉米螟保幼激素结合蛋白基因 OfJHBP的鉴定及在生长发育及滞育中的功能分析

　　

摘要： 【目的】鉴定亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis保幼激素结合蛋白(juvenile hormone binding protein, JHBP)基因OfJHBP，探析其在亚洲玉米螟生长发育及滞育中的功能。【方法】基于本实验室组装的亚洲玉米螟不同滞育状态的幼虫的转录组数据库(NCBI登录号: PRJNA1030200)，采用RT-PCR克隆鉴定OfJHBP的开放阅读框(open reading frame, ORF)序列；利用Expasy-ProtParam在线软件预测亚洲玉米螟OfJHBP的分子量及等电点；利用DNAMAN 6.0软件对亚洲玉米螟OfJHBP编码的氨基酸序列与其他昆虫JHBP的氨基酸序列进行比对；利用MEGA 11软件中的邻接法(neighbor-joining, NJ)构建系统发育树；利用qPCR检测OfJHBP在亚洲玉米螟非滞育、滞育和解除滞育的5龄幼虫中的表达量；利用dsRNA注射法干扰亚洲玉米螟5龄滞育幼虫的OfJHBP， 48 h时利用qPCR检测OfJHBP的表达量， 96 h时检测幼虫体内甘油三酯的含量， 9 d内逐日观测体重、滞育率、死亡率及表型的变化。【结果】获得了亚洲玉米螟OfJHBP(NCBI登录号: XM_028317397.1) 726 bp的ORF序列，编码241个氨基酸；OfJHBP预测分子量为27.06 kD，理论等电点为5.99。亚洲玉米螟OfJHBP与欧洲玉米螟O. nubilalis OnJHBP氨基酸序列一致性最高，为99.17%，亲缘关系最近。OfJHBP在亚洲玉米螟的不同滞育状态5龄幼虫中均有表达，在滞育期表达量最高，在非滞育与解除滞育后表达量较低。与注射dsGFP的对照组相比，注射dsOfJHBP后48 h时OfJHBP表达量下调78.32%，96 h时甘油三酯含量上升1.18倍，9 d时亚洲玉米螟的死亡率为46.67%，体重同比例下降，滞育率下降了53.33%，幼虫发育异常，不同程度出现畸形而死亡，存活个体多生长为黑色蛹，无法正常发育为成虫。【结论】OfJHBP与亚洲玉米螟生长发育密切相关，可能在亚洲玉米螟滞育过程中发挥重要作用。