RNK08954的临床前特征与临床活性：一种高选择性、口服生物可利用的KRASG12D抑制剂

《Cancer Discovery》：Preclinical Characterization and Clinical Activity of RNK08954, a Highly Selective and Orally Bioavailable KRASG12D Inhibitor Open Access

　　

摘要：KRASG12D是实体瘤中最普遍的KRAS突变亚型，但目前尚无临床可用药物。RNK08954是一种强效、选择性KRASG12D抑制剂，可抑制KRASG12D突变细胞的增殖，并在小鼠异种移植模型中通过抑制KRAS介导的信号通路显著诱导肿瘤消退。RNK08954的体内效应归因于其独特的药代动力学（PK）特征及在肿瘤组织中的长滞留时间。该药物与免疫检查点阻断（ICB）具有协同作用。在Ia期研究中，36例可评估患者的中位随访时间为4.85个月。非小细胞肺癌（NSCLC）患者的客观缓解率（ORR，未确认）为58.33%，胰腺导管腺癌（PDAC）患者在1000-1200 mg剂量组中的ORR（未确认）为33.33%。本研究支持RNK08954作为单药或联合疗法在KRASG12D突变患者中的临床潜力。

论文解读：靶向KRAS^G12D的新型抑制剂RNK08954的临床前与临床突破

研究背景与意义

KRAS致癌基因是MAPK和PI3K/AKT/mTOR信号通路的关键调控因子，参与细胞增殖、存活与分化。KRAS突变常见于多种癌种，其中密码子12的突变最为频繁，而G12D是实体瘤中最普遍的亚型（尤其在胰腺导管腺癌（PDAC）、结直肠癌和非小细胞肺癌（NSCLC）中）。该突变导致GTP酶活性丧失，使KRAS锁定于组成性激活的GTP结合状态，持续驱动下游致癌信号。尽管针对KRAS^G12C的共价抑制剂已获批用于晚期NSCLC，但KRAS^G12D因缺乏邻近半胱氨酸残基，难以通过类似策略靶向，至今仍是临床未满足的需求。本研究由Revolution Medicines团队开展，旨在开发高选择性、口服生物可利用的KRAS^G12D抑制剂，填补这一空白，相关成果发表于《Cancer Discovery》。

关键技术方法

研究采用表面等离子共振（SPR）技术测定化合物与KRAS蛋白的结合亲和力；通过细胞活力检测（CellTiter-Glo, CTG）评估肿瘤细胞增殖抑制；利用Western blot分析KRAS下游信号分子（如p-ERK1/2、p-S6）的磷酸化水平；在体内实验中，构建细胞系来源异种移植（CDX）模型和患者来源异种移植（PDX）模型，结合药代动力学（PK）分析（LC/MS-MS法测定血浆和肿瘤组织药物浓度）评估抗肿瘤活性；临床研究部分为Ia期剂量递增试验（NCT06667544），纳入42例携带KRAS^G12D突变的晚期实体瘤患者，主要终点为安全性、耐受性及初步疗效。

研究结果

RNK08954对KRAS^G12D的强效选择性抑制

RNK08954为非共价抑制剂，通过结构-活性关系研究优化获得，其结构中两个碱性氨基可与KRAS^G12D的Asp12（D12）和Glu62（E62）形成盐桥，实现对KRAS^G12D的选择性抑制。SPR实验显示，RNK08954与无活性KRAS^G12D（GDP结合态）的解离常数（K_D）为39.5 pmol/L，与活性态（GTP结合态）的K_D为12.2 nmol/L，显著高于对野生型KRAS、KRAS^G12C和KRAS^G12V的亲和力。细胞实验中，RNK08954可浓度依赖性抑制SW1990细胞（人胰腺腺癌细胞系）中p-ERK1/2水平（6小时起效，持续至72小时），且在Meso Scale Discovery生物标志物检测中显示出比对照药MRTX1133更强的抑制作用。CTG实验表明，RNK08954对KRAS^G12D突变的人肿瘤细胞系（IC₅₀2.6-49.5 nmol/L）和Ba/F3细胞（IC₅₀中位数10.8 nmol/L）具有高效力，而对KRAS野生型及其他突变型细胞活性较低（IC₅₀>300 nmol/L）。

RNK08954在肿瘤组织中的优先蓄积

小鼠PK研究显示，RNK08954单次静脉或口服给药后半衰期（T_1/2）为7.86小时，稳态分布容积（Vss）达36.5 L/kg，口服生物利用度（F）为7.56%。在GP2d（结直肠腺癌）和SW1990异种移植模型中，肿瘤与血浆的药物暴露量比值（AUCτ）分别为42.5-69.7和22.4，表明药物在肿瘤组织中显著富集。高Vss提示其优异的组织穿透性，支持体内抗肿瘤活性。

在KRAS^G12D突变模型中的抗肿瘤活性

在A427（肺腺癌）、SW1990、Panc 04.03（PDAC）和GP2d等CDX模型中，RNK08954每日或每日两次给药均表现出剂量依赖性肿瘤生长抑制（TGI），其中GP2d模型在60 mg/kg每日一次给药时肿瘤消退率达70%，Panc 04.03模型在100 mg/kg每日两次给药时实现100%肿瘤消退。在PDAC患者来源异种移植（PDX）模型（PA1194、PA1252、PA1457）中，100-200 mg/kg剂量下肿瘤生长显著受抑；原位HPAF-II模型（胰腺癌细胞系）中，200 mg/kg每日一次给药28天可导致肿瘤明显缩小，且未引起显著体重下降。

RNK08954抑制KRAS信号并诱导体内肿瘤消退

GP2d异种移植模型PK/药效学（PD）分析显示，RNK08954给药后血浆和肿瘤暴露量呈剂量依赖性增加，且肿瘤中消除较慢。给药后4-24小时内，各剂量组均显著抑制p-ERK（ERK1/2磷酸化形式），100 mg/kg剂量组还可抑制p-S6（S6核糖体蛋白磷酸化形式）。RT-PCR结果显示，单剂量200 mg/kg RNK08954可使肿瘤组织中DUSP6 mRNA表达降低约80%，进一步证实其对KRAS/ERK通路的抑制。

调节肿瘤免疫微环境（TIME）增强抗肿瘤活性

在免疫 competent小鼠同基因模型（CT-26细胞系）中，RNK08954（100 mg/kg）单药可显著抑制肿瘤生长，且与抗PD-1抗体联用时协同增效，肿瘤消退更明显。单细胞RNA测序（scRNA-seq）分析显示，RNK08954处理后肿瘤中T细胞、B细胞和巨噬细胞比例改变，其中CD8⁺T细胞亚群显著增加（流式细胞术验证）。免疫荧光实验进一步证实联合治疗可提高肿瘤浸润CD8⁺T细胞比例，提示其通过调节TIME增强免疫应答。

RNK08954的临床早期活性证据

Ia期研究纳入42例经治患者（中位既往治疗线数2），涵盖PDAC（17例）、NSCLC（14例）、结直肠癌（4例）及其他实体瘤（7例），剂量范围200-1200 mg每日一次。安全性方面，所有患者均发生至少1次治疗相关不良事件（AE），主要为胃肠道反应（腹泻88.1%、呕吐71.4%、恶心66.7%），多为1-2级，3级以上AE发生率为23.8%（10/42），无剂量限制性毒性。疗效方面，36例可评估患者中，NSCLC患者客观缓解率（ORR，未确认）为58.33%（7/12，含5例确认部分缓解（PR）和2例未确认PR），疾病控制率（DCR）达100%；PDAC患者在1000-1200 mg剂量组中ORR为33.33%（2/6，含1例确认PR和1例未确认PR），DCR为100%，中位治疗持续时间达6.43个月。PK分析显示，稳态时药物吸收迅速（中位T_max,ss2-4小时），暴露量与剂量成比例，推荐扩展队列剂量为1000-1200 mg每日一次。

讨论与结论

讨论部分指出，KRAS^G12D因缺乏共价结合位点，靶向难度高于KRAS^G12C，而RNK08954作为非共价开关II口袋抑制剂，通过盐桥机制实现对GDP结合态KRAS^G12D的高选择性抑制，其独特的PK特征（长半衰期、高分布容积）支持肿瘤组织中的有效暴露。与已终止开发的MRTX1133相比，RNK08954显示出更优的稳定性和临床潜力。临床数据显示，RNK08954在经治NSCLC和PDAC患者中表现出令人鼓舞的缓解率和持久获益，尤其在高剂量组中PDAC的DCR显著高于历史数据（通常<50%）。此外，其与免疫检查点抑制剂的协同作用为克服KRAS突变肿瘤的免疫抑制微环境提供了新策略。

结论：RNK08954是一种选择性非共价KRAS^G12D抑制剂，在临床前模型中展现出强效抗肿瘤活性，Ia期研究证实其良好的安全性和初步临床活性，支持进一步开展单药或联合治疗的临床试验，有望成为首个靶向KRAS^G12D的口服治疗药物，改变实体瘤的治疗格局。