与年龄相关的方法学因素可能对自闭症谱系障碍血液miRNA生物标志物研究的再现性局限产生的影响：一项探索性荟萃分析

《Scientific Reports》：Potential contribution of age-related and methodological factors to limited reproducibility in autism spectrum disorder blood miRNA biomarker studies: an exploratory meta-analysis

摘要

关于自闭症谱系障碍（ASD）血液微小RNA（miRNA）生物标志物的跨研究分析存在不一致性，这表明方法上的差异可能显著限制了研究结果的重复性。我们对来自Gene Expression Omnibus的公开ASD血液miRNA数据集进行了探索性荟萃分析，采用了严格的纳入标准和标准化的分析流程。共有三个数据集被纳入分析（GSE89596、GSE67979、GSE222046），涵盖了90名参与者（45名ASD患者，45名对照组）的614种miRNA。研究采用Hedges’ g效应量进行随机效应荟萃分析，并进行了全面的异质性评估和留一法交叉验证。虽然没有任何miRNA在多次检验校正后仍保持显著显著性（Benjamini-Hochberg FDR < 0.05），但有7个候选miRNA在未校正的p值小于0.01且效应量较大的情况下表现出一致性。这些候选miRNA在不同研究之间的异质性接近于零，并且在交叉验证分析中保持了相同的方向性。观察到与年龄和实验平台相关的差异：成人和儿童的miRNA效应量之间的相关性接近于零（Kendall’s τ = -0.022）；然而，在现有数据中这两种变异因素相互混淆，无法分离。某些miRNA在不同研究之间的变异性非常显著（I2 > 80%），表明方法上存在显著差异。交叉验证显示，排除其中一个成人数据集后，指标的一致性从89.9%下降到68.9%。我们的研究结果表明，与年龄相关的方法因素（包括技术平台差异）可能影响ASD血液miRNA研究的重复性，血液中的生物标志物可能更多反映了周围生理状态而非疾病的核心机制。使用死后前额叶皮层数据（GSE59286；n = 45）进行的额外跨组织分析为这一解释提供了直接证据：大多数血液中的候选miRNA在脑组织中没有相应的表达，仅hsa-miR-29c-5p在两种组织中表现出方向性的一致性。这些发现表明，基于年龄的分层、实验平台的统一以及跨组织的验证应该是可靠发现ASD miRNA生物标志物的基本前提，而非可选的改进措施。