利用单管流式细胞术精确检测CD34?CD38?CD45RA?白血病干细胞及其与急性髓系白血病中可测量残留病之间的强烈关联：一项回顾性队列研究

《Stem Cell Research & Therapy》：Refined detection of CD34?CD38?CD45RA? leukemic stem cells using a single-tube flow cytometry assay and its strong association with measurable residual disease in acute myeloid leukemia: a retrospective cohort study

　　

摘要

背景

白血病干细胞（LSCs）是导致急性髓系白血病复发的主要细胞来源，但由于其与正常祖细胞的免疫表型重叠以及不同检测方法之间的差异，通过多参数流式细胞术进行有效检测仍然具有挑战性。在CD34?CD38?的分选策略中加入CD45RA可显著提高恶性干细胞与正常干细胞/祖细胞之间的区分度，从而实现单管检测下的更精确计数。鉴于准确量化LSC群体的临床重要性，我们评估了一种改进的单管流式细胞术方法，该方法在CD34?CD38?分选门中加入了CD45RA，以提高对白血病干细胞的特异性。

方法

在109份急性髓系白血病（AML）骨髓样本的回顾性队列中，使用传统的三管八色检测面板评估了可测量的残留疾病（MRD），并采用改良的单管八色检测面板对LSCs进行了计数，将LSCs定义为CD34?CD38?CD45RA?。为确保分析结果的可靠性，我们设定了一个正式的定量下限（LLOQ），经验性地定义为50个CD45?事件的簇；低于样本特定LLOQ的样本不被视为阳性。MRD的阳性阈值设为≥0.1%，LSCs的阳性阈值设为≥0.004%。组间比较采用了Mann–Whitney U检验，相关性分析通过Pearson相关系数进行量化。

结果

在109名患者中，有28名（25.7%）患者的LSCs可以被检测到，而37名（33.9%）患者存在MRD。LSCs的存在与MRD的阳性之间存在显著关联（p = 0.00035）。MRD阳性的患者中LSC负担显著增加，同时，携带可检测LSCs的患者的MRD水平也显著升高（p = 2.01 × 10??）。在整个队列中，LSCs水平与MRD水平之间存在强正相关（R = 0.66，p = 3.2 × 10?1?）。LSCs和MRD的状态与性别、FLT3或NPM1突变状态无关。对LSC群体的免疫表型分析显示，CD33（89.3%）和多标记组合（89.3%）的异常共表达最为常见，CD44（67.9%）和CD123（53.6%）也频繁出现。

结论

通过采用基于CD45RA分选和严格LLOQ的改进LSC检测方法，可以实现对AML中LSC群体的特异性和临床可操作的量化。CD34?CD38?CD45RA? LSC亚群与MRD状态之间的强相关性表明其作为残留疾病监测的补充生物标志物的潜力；然而，需要在带有预后标注的队列中进行前瞻性验证，以确定其预后价值和临床适用性。