来自猫弓形体（Eimeria necatrix）的微针蛋白3的分子特性及免疫保护潜力

《Parasites & Vectors》：Molecular characterization and immunoprotective potential of microneme protein 3 from Eimeria necatrix

　　

摘要

背景

Eimeria necatrix属于顶复门（Apicomplexa），是最具致病性的寄生虫之一，会导致鸡的高死亡率。微管蛋白（MICs）在顶复门寄生虫识别和侵入宿主细胞过程中起着关键作用，同时也是开发疫苗的理想候选物质。然而，关于E. necatrix微管蛋白的全面研究仍较为有限。

方法

Eimeria necatrix的MIC3基因（EnMIC3）被克隆并在大肠杆菌中表达。该重组蛋白（rEnMIC3）通过SDS-PAGE和Western blot进行了表征。通过Western blot和间接免疫荧光分析（IFA）确定了rEnMIC3的抗原性及其在E. necatrix孢子体（SZ）和第二代裂殖子（MZ-2）中的定位。研究了EnMIC3在不同发育阶段的动态表达及其对孢子体侵入宿主细胞的影响。通过观察体重增加、病变评分、卵囊生成情况、抗球虫指数（ACI）和抗体水平来评估rEnMIC3在鸡体内的免疫保护效果。

结果

EnMIC3的开放阅读框长度为798 bp，编码一个含有265个氨基酸的蛋白质，预测分子量为28.50 kDa。EnMIC3包含一个信号肽和一个类似表皮生长因子（EGF）的结构域。分子量约为36 kDa的rEnMIC3蛋白能够被E. necatrix感染后康复的鸡血清特异性识别。天然蛋白的分子量约为35 kDa，在孢子体（SZ）中定位于顶端区域，而在裂殖子（MZ-2）中则呈胞质分布。EnMIC3的mRNA在孢子体中的表达水平显著高于裂殖子，而蛋白质表达则呈现出相反的趋势。抗rEnMIC3的多克隆抗体以剂量依赖的方式抑制了孢子体对DF-1细胞的侵入。接种rEnMIC3后能够有效抵抗E. necatrix的攻击，其中高剂量组（200 μg）的ACI值最高（171.32），血清抗体水平也显著升高。

结论

这些发现不仅为理解EnMIC3蛋白在E. necatrix侵入宿主过程中的作用提供了基础，还为开发针对禽球虫病的亚单位疫苗提供了潜在的保护性抗原。

图形摘要

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