实验设计及生物分析方法（LC–MS/MS）用于检测大鼠脑匀浆中的褪黑素和塔西美尔酮，并对其进行白度评估

《BMC Chemistry》：Design of experiments and bioanalytical LC–MS/MS method for analysis of melatonin and tasimelteon in rat brain homogenate with whiteness assessment

　　

摘要

睡眠障碍是一系列常见的问题，它们会影响夜间睡眠的质量，进而影响个人的日常功能。治疗方法从非处方产品到受监管的药品不等。褪黑素和塔西美尔通（Tasimelteon）是两种用于治疗严重至中度睡眠障碍的化合物。本研究开发并验证了一种灵敏、简单的生物分析方法——LC–MS/MS技术，用于测定大鼠脑组织中的褪黑素和塔西美尔通含量。色谱分析采用等速模式进行，西酞普兰（Citalopram）被选为合适的内标物。固定相使用Supelco Ascentis? Express Phenyl-Hexyl柱，流动相由0.2%的甲酸与乙腈和水（体积比65:35）的混合物组成。研究应用了响应面法（Response Surface Methodology）来优化三个独立因素（乙腈百分比、甲酸百分比和流速（mL/min）对分析结果的影响。研究的重点在于确定影响色谱分离效果的最关键因素，即塔西美尔通与褪黑素之间的分离度以及两者的拖尾现象。方差统计分析得出了分离这两种物质的最佳条件及最具影响力的因素。该方法验证遵循了国际协调委员会（International Council for Harmonization）关于生物分析方法验证的M10指南。验证结果表明，在褪黑素和塔西美尔通的浓度范围55.00–1650 ng/mL和20–600 ng/mL内，该方法具有较高的准确性和线性。验证方法的定量下限分别为55 ng/mL和20 ng/mL。对于褪黑素，日内准确度（回收率）在96.53%至102.68%之间，精密度（以相对标准偏差表示）在0.26%至0.96%之间；对于塔西美尔通，日内准确度在99.61%至103.75%之间，精密度在0.23%至0.93%之间；日间准确度在99.37%至103.87%之间，精密度在1.04%至2.11%之间。整个分析过程耗时3分钟，在最佳条件下，褪黑素和塔西美尔通的保留时间分别为1.9分钟和2.5分钟，实现了有效的色谱分离。样品的白度评分（Red Green Blue 12评分）为79.2%。

睡眠障碍是一系列常见的问题，它们会影响夜间睡眠的质量，进而影响个人的日常功能。治疗方法从非处方产品到受监管的药品不等。褪黑素和塔西美尔通是两种用于治疗严重至中度睡眠障碍的化合物。本研究开发并验证了一种灵敏、简单的生物分析方法——LC–MS/MS技术，用于测定大鼠脑组织中的褪黑素和塔西美尔通含量。色谱分析采用等速模式进行，西酞普兰被选为合适的内标物。固定相使用Supelco Ascentis? Express Phenyl-Hexyl柱，流动相由0.2%的甲酸与乙腈和水（体积比65:35）的混合物组成。研究应用了响应面法（Response Surface Methodology）来优化三个独立因素（乙腈百分比、甲酸百分比和流速（mL/min）对分析结果的影响。研究的重点在于确定影响色谱分离效果的最关键因素，即塔西美尔通与褪黑素之间的分离度以及两者的拖尾现象。方差统计分析得出了分离这两种物质的最佳条件及最具影响力的因素。该方法验证遵循了国际协调委员会（International Council for Harmonization）关于生物分析方法验证的M10指南。验证结果表明，在褪黑素和塔西美尔通的浓度范围55.00–1650 ng/mL和20–600 ng/mL内，该方法具有较高的准确性和线性。验证方法的定量下限分别为55 ng/mL和20 ng/mL。对于褪黑素，日内准确度（回收率）在96.53%至102.68%之间，精密度（以相对标准偏差表示）在0.26%至0.96%之间；对于塔西美尔通，日内准确度在99.61%至103.75%之间，精密度在0.23%至0.93%之间；日间准确度在99.37%至103.87%之间，精密度在1.04%至2.11%之间。整个分析过程耗时3分钟，在最佳条件下，褪黑素和塔西美尔通的保留时间分别为1.9分钟和2.5分钟，实现了有效的色谱分离。样品的白度评分（Red Green Blue 12评分）为79.2%。