通过固态发酵Oncorhynchus mykiss(一种鲑鱼)来生产生物刺激剂时,对游离氨基酸提取物进行的定量和定性分析

《Process Biochemistry》:Quantitative and qualitative analysis of free amino acids extracts for biostimulants production via solid-state fermentation of Oncorhynchus mykiss

【字体: 时间:2026年05月04日 来源:Process Biochemistry 4

编辑推荐:

  Ikhlas Laasri|Oscar Martinez-Avila|Amin Laglaoui|Mohammed Bakkali|Sergio Ponsá|Laura Mejias摩洛哥丹吉尔阿卜杜勒马莱克·埃萨迪大学科学与技术学院生物技术与生物分子工程研究团队(ERBGB)摘

  
Ikhlas Laasri|Oscar Martinez-Avila|Amin Laglaoui|Mohammed Bakkali|Sergio Ponsá|Laura Mejias
摩洛哥丹吉尔阿卜杜勒马莱克·埃萨迪大学科学与技术学院生物技术与生物分子工程研究团队(ERBGB)

摘要

水产养殖是全球增长最快的动物食品产业,正迅速成为人类消费中水生动物营养的主要来源。然而,除了自然死亡外,鱼类加工还会产生大量废弃物,如果管理不当,会对环境造成危害。在这项研究中,通过固态发酵(SSF)技术从鱼废弃物(Oncorhynchus mykiss)中提取鱼蛋白水解物,以期用于生物刺激剂的应用,从而提高海洋资源的利用效率并减轻工业鱼废弃物带来的负面环境影响。所提出的技术策略使用单个反应器单元产生蛋白酶(通过水解酶的生产),然后利用这些酶来分解鱼废弃物。初步阶段包括在两种温度(30°C和37°C)下量化Bacillus cereus接种物产生的蛋白酶活性和游离氨基酸的释放量。此外,还评估了在不添加任何外部接种物的情况下(对照条件)O. mykiss废弃物的发酵情况,以确定两种方法的性能。结果表明,在对照条件下,30°C下的游离氨基酸释放量最高(38?±?1.52?mg?ml?1)。该过程在台式规模上进行了放大实验,评估了混合效果。另外,在静态条件下测试了欧米伽3和胶原蛋白的含量,分别为1.16%和0.82?g/100?g。在间歇混合条件下,最大释放量达到了25.69?±?2.8?mg?ml?1(48小时后)。这项研究证明了SSF技术在最大化游离氨基酸释放方面的有效性,最佳结果是在对照条件下的30°C。这些发现支持了一种可持续的鱼废弃物管理方法,既能提高资源利用率,又能减少环境影响。

引言

随着全球人口的持续增长,可持续的食品生产变得越来越重要,以确保有足够的食物供应给人类和动物,同时不损害环境,并确保后代能够获得他们所需的资源以茁壮成长[1]。为此,《废物框架指令》(2008/98/EC)推动了欧盟范围内的食品废弃物增值利用,同时还有新的政策策略,如“迈向空气、水和土壤零污染”的行动计划以及新的循环经济行动计划(CEAP),强调“减少废物,增加价值”[2]。
在2021年5月17日发送给欧洲议会和理事会的通信中,欧盟委员会强调了蓝色增长战略与可持续蓝色经济目标之间的一致性[3]。正如欧盟委员会的“海星使命”所倡导的,其中一个例子是推广低影响的水产养殖,这种养殖方式能够以最小的对生态系统的影响实现水生生物的可持续和环保养殖[4]。这有助于支持海洋空间的循环利用、低碳利用和多功能利用[4]。
农业工业和海洋废弃物的增值利用是欧盟循环经济目标的基石[5]。通过利用废弃物流生产高附加值的生物产品,研究人员和行业可以同时创造新的价值链和更可持续的发展[6]、[7]。全球对海产品的需求接近2亿吨,其中近50%来自水产养殖[8]。在水产养殖领域,大约27%的废弃物是由于鱼类自然死亡造成的[8],而加工后的鱼类(70%)中约有30-35%作为固体废弃物被丢弃,具体取决于鱼类种类和加工程度[9]。据估计,全球每年有近2500万吨的死鱼被丢弃或浪费[10]。鱼废弃物富含有机物和污染物,如果管理不当,会对环境构成风险[11]。这主要是由于其高有机物含量以及其他化学物质,如二噁英和类似甲基汞的污染物[12]。
鱼废弃物可以转化为鱼粉、肥料、鱼油、胶原蛋白和欧米伽3脂肪酸等产品[13]、[14]、[15]。这些产品大多通过化学或酶法获得。与化学方法相比,基于酶的技术几乎不产生废弃物,且对环境更友好[16]。尽管化学方法被广泛使用,但它们也有若干缺点,例如由于使用强溶剂或试剂可能导致蛋白质变性,残留化学物质的存在,以及缺乏选择性,从而导致不希望的物质被共同提取[17]。此外,使用有害化学物质还会引发环境问题,增加可持续性挑战,特定的化学提取过程可能能耗较高[18]。
酶法水解因能够生产出具有更好和更专门营养、技术和生物活性特性的水解物而受到越来越多的关注[19]。近几十年来,由于酶法的特异性、作用速度快以及相比传统方法(如酸水解或碱水解)能节省原材料、能源、化学物质和水资源,许多行业都采用了酶法[20]。尽管如此,由于酶的成本较高,酶法相对于化学方法仍然相对昂贵,使其在大规模应用中价格最高[21]。
像SSF这样的技术替代方案,结合自产蛋白酶和游离氨基酸(FAA)的释放,可能是一个潜在的解决方案。SSF依赖于在低水分条件下自产的蛋白酶和微生物活性,减少了对商业酶的依赖[22]。SSF可以改善物理化学和营养特性,同时支持循环增值策略[23]、[24]。蛋白质水解物在农业领域特别有吸引力,因为它们可以作为生物刺激剂,增强碳和氮代谢、酶活性以及抗逆性[25]、[26]。
此外,已有研究表明鱼水解物(FH)可以作为农业中使用的生物刺激剂的良好候选者[27]、[28]。它们有助于植物增强抗旱能力,促进有益微生物的生长和活性,并提高抗氧化特性[29]、[30]。
尽管之前的研究探讨了鱼废弃物的增值利用,但仍存在一些重要空白。一些研究仅依赖于化学水解,没有微生物发酵或自产酶,限制了其可持续性[31]。其他研究主要关注O. mykiss的内脏,没有考虑整个鱼废弃物的增值利用或自产酶的潜力[32]、[33]。本研究通过整合微生物发酵并评估整个废弃物流来弥补这些局限性。
尽管这些研究突显了鱼废弃物增值的潜力,但据我们所知,还没有研究探讨不同操作参数对蛋白质水解物总体产量的影响,特别是对其农业应用的影响。此外,也没有关于通过SSF释放FAA的详细研究,而FAA是水解过程中的一个关键方面,能提供超出酶活性的补充信息。相比之下,本研究通过整合微生物发酵,采用了一种更可持续的方法,实现了对整个鱼废弃物的增值利用,而不仅仅是关注内脏部分。
本研究旨在探讨发酵条件对氨基酸释放的影响。为此,研究分为三个目标:(1)使用Oncorhynchus mykiss自产的蛋白酶通过SSF进行蛋白质水解的测试和验证;(2)在台式规模上进行实验,评估其大规模应用的潜力;(3)通过分析细菌谱、胶原蛋白和欧米伽3含量来评估增值产品的质量和安全性。

章节片段

微生物

Bacillus cereus(DSM 31)来自莱布尼茨微生物与细胞培养有限公司(Leibniz Institute DSMZ)的德国微生物菌种库。该菌株保存在含有浸渍了该菌株的珍珠的冷冻管中,保存温度为?80°C。

接种物制备

为了制备接种物,将两颗珍珠悬浮在100毫升的Erlenmeyer烧瓶中,其中含有40毫升的无菌液体培养基(Trypticase大豆肉汤30?g?L?1,酵母提取物3?g?L?1)。培养物在最佳生长温度(30oC)下培养,并持续搅拌

结果与讨论

为了选择细菌,使用光密度(OD)作为细菌数量的指标来评估生长动态,测量波长为600?nm[46]。评估了四种芽孢杆菌菌株:Bacillus sp.Bacillus cereusBacillus licheniformisBacillus subtilis。其中,B. cereus在液体培养基中的OD值最高,表明其生长更好,微生物生物量也更高。虽然未直接评估蛋白酶活性,但选择了B. cereus用于SSF

结论

本研究通过发酵过程评估了蛋白质水解物的生产情况,评估了不同操作参数(如温度曲线、接种策略和生物活性)的影响。研究发现,未接种系统的氨基酸浓度高于使用B. cereus的接种系统。这表明鱼废弃物中的本土微生物群落或存活的孢子在蛋白质水解方面更为有效

CRediT作者贡献声明

Ikhlas Laasri:撰写——审稿与编辑,撰写——初稿,可视化,验证,软件,方法论,调查,数据分析,数据整理。Oscar Martinez-Avila:撰写——审稿与编辑,验证,监督,资源管理,项目管理,方法论,资金获取。Mohammed Bakkali:监督,项目管理。Amin Laglaoui:撰写——审稿与编辑,监督,项目管理。Laura Mejias:撰写——审稿与编辑,验证,

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了BioreFISH项目的支持:来自鱼废弃物的可持续生物产品(授权协议ID 2021 LLAV 00068)。该项目与知识产业资助(Llavor和Producte)相关,并得到了加泰罗尼亚政府研究与大学部门的支持。
相关新闻
生物通微信公众号
微信
新浪微博

热点排行

    今日动态 | 人才市场 | 新技术专栏 | 中国科学人 | 云展台 | BioHot | 云讲堂直播 | 会展中心 | 特价专栏 | 技术快讯 | 免费试用

    版权所有 生物通

    Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

    联系信箱:

    粤ICP备09063491号