选择性一步荧光探测技术：通过香豆素合成法测定剂型中的托特罗定含量、含量均匀性以及人体血浆中的托特罗定浓度

《Talanta》：Selective One-Pot Fluorescent Probing Technique for Determination of Tolterodine in Dosage Forms, Content Uniformity, and Human Plasma via Coumarin Synthesis

　　

穆罕默德·奥拉比（Mohamed Oraby）|哈立德·M·巴德尔·埃尔-丁（Khalid M. Badr El-Din）|赛义德·M·德拉亚（Sayed M. Derayea）|艾哈迈德·S·艾哈迈德（Ahmed S. Ahmed）|穆罕默德·A·阿卜杜勒沙库尔（Mohamed A. Abdelshakour）

埃及索哈格大学（Sohag University）药学院药物分析化学系，新索哈格（New Sohag）82524

摘要

托特罗定酒石酸盐（Tolterodine tartrate，简称TTD）是一种专门用于治疗膀胱过度活动综合征（overactive bladder syndrome）的抗胆碱能药物，于1998年获得美国食品药品监督管理局（FDA）的批准。自批准以来，由于其在临床上的广泛应用，迫切需要开发一种成本效益高、灵敏度强、选择性好且重复性好的荧光光谱分析法。本研究通过冯佩奇曼缩合（Von Pechmann condensation）反应对TTD的酚基进行衍生化处理，开发出了这种荧光光谱分析方法。TTD与乙酰乙酸乙酯（ethyl acetoacetate，简称EAA）反应生成一种高荧光性的香豆素化合物，在λex = 359 nm的光照下，该化合物在λem = 420 nm处可被检测到。实验结果表明，在100.0至1500.0 ng/mL的浓度范围内，TTD浓度与荧光强度之间存在线性关系（r=0.9996）。该方法不仅可用于纯TTD的测定，还可用于含有共配药物盐酸坦索罗辛（Tamsulosin Hydrochloride，简称TAM）的制剂中TTD含量的分析，以及评估药片的质量均匀性。此外，该方法还用于测定添加了TTD的人血浆样本中的TTD浓度。利用生态评估工具（eco-scale、AGREE和GAPI）进一步验证了该方法的环境友好性。这项经过验证的技术为药品和生物样品中的TTD分析提供了一种高效的选择。

引言

1998年，FDA批准了TTD作为首个专门用于治疗膀胱过度活动综合征的抗胆碱能药物[1]、[2]。尿频和尿失禁是膀胱过度活动综合征的典型症状。动物研究表明，TTD主要作用于膀胱，其作用强度高于唾液腺。临床观察发现，与其他抗胆碱能药物相比，TTD的副作用更少[3]。TTD的化学结构为2-[(1R)-3-[二(丙-2-基)氨基]-1-苯基丙基]-4-甲基苯酚（图1）。已有许多关于TTD分析的分析方法被报道，包括分光光度法[4]、[5]、[6]、荧光法[7]、[8]、[9]、[10]、薄层色谱法[11]、[12]、[13]、高效液相色谱法[14]、[15]、[16]、[17]、[18]、电泳法[19]以及电分析技术[20]、[21]、[22]。

虽然色谱法具有较高的灵敏度，能够研究药物的降解产物和药代动力学，但这些方法通常操作繁琐，需要大量纯有机溶剂，并且需要专业操作人员。此外，分光光度法的灵敏度有限[23]、[24]。

已有四种荧光分析法[7]、[8]、[9]、[10]被用于TTD的测定，但它们的灵敏度普遍较低。第三种方法[9]虽然通过多步骤反应和丹磺酰氯（dansyl chloride）衍生化实现了较好的灵敏度，但需要使用危险性的有机溶剂二氯甲烷进行萃取。第四种方法[10]通过十二烷基硫酸钠溶液增强TTD的荧光强度，虽然灵敏度尚可，但由于许多共配药物（如TAM）的干扰而缺乏选择性。

本研究的主要创新在于开发了一种简单、选择性高、可靠性强且灵敏度更高的TTD定量分析方法。即使存在共配药物TAM的情况下，该方法依然有效。这一目标是通过荧光光谱法实现的，具体方法是利用冯佩奇曼缩合对TTD的酚基进行衍生化处理，从而提高了方法的选择性。

我们使用了三种环保评估工具（eco-scale、AGREE和GAPI）来评估所提出方法在化学物质和操作流程方面的环境影响。评估结果表明，这些荧光光谱分析方法具有很高的环保性。该方法已严格遵循国际协调委员会（ICH）的指导原则[25]进行了验证，适用于人血浆中TTD的测定、含量均匀性的评估以及药品制剂的分析。

方法片段

仪器

荧光光谱分析使用的是位于日本东京八千代市（Hachioji）的Jasco FP-8350荧光光谱仪。该仪器配备了一个150瓦的氙弧灯（Xe-arc lamp）和设置为400伏特的光电倍增管（PMT）。发射光和激发光的单色器的狭缝宽度均为5纳米，扫描速率为每分钟1000纳米。实验用水由英国斯塔福德郡（Staffordshire）的Cole-Parmer公司生产的Aquatron water still a4000d装置制备。

试剂和材料

TTD的标准品由Adwia公司提供。

结果与讨论

文献综述显示，目前用于测定药品中TTD含量的成熟方法非常有限。因此，建立一种简单的TTD定量方法至关重要。鉴于荧光光谱法使用简便、选择性高、灵敏度优异，并且在实验室中易于获得相关仪器，本研究选择了该方法。实验条件对TTD的荧光强度有显著影响。

结论

本研究建立了一种创新、选择性高且经过严格验证的荧光光谱分析法，用于TTD的定量。该方法通过冯佩奇曼缩合反应对TTD的酚基进行衍生化处理，生成一种在λem = 420 nm（λex = 359 nm）处可检测到的高荧光性香豆素化合物。在100.0至1500.0 ng/mL的浓度范围内，TTD浓度与荧光强度之间存在强相关性（r = 0.9996）。

作者贡献声明

穆罕默德·A·阿卜杜勒沙库尔（Mohamed A. Abdelshakour）：方法验证、实验设计。艾哈迈德·S·艾哈迈德（Ahmed S. Ahmed）：初稿撰写、软件开发、方法设计、概念构思。赛义德·M·德拉亚（Sayed M. Derayea）：修订与编辑、监督、概念构思。哈立德·M·巴德尔·埃尔-丁（Khalid M. Badr El-Din）：数据可视化、监督、数据管理。穆罕默德·奥拉比（Mohamed Oraby）：修订与编辑、方法验证。

作者声明不存在任何可能影响本文研究的利益冲突。

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。