分级添加黑水虻幼虫粉对泸西肉种公鸡精液质量及血清生化指标的影响

《Veterinary and Animal Science》：Effects of graded dietary black soldier fly larvae powder inclusion on semen quality and serum biochemical indices of Luxi game breeder roosters

　　曹少杰|郭彦敏|李世伟|郭家乐|尹宏伟|赵先林
中国山东省菏泽市菏泽大学农业与生物工程学院，274000

**摘要**
本研究探讨了将黑水虻幼虫粉（BSFLP）分级添加到日粮中，作为部分替代豆粕对泸西斗鸡精液质量和氧化状态的影响。实验中，将5个不同比例（0%、5%、10%、15%和20%）的BSFLP添加到日粮中（热量和氮含量保持不变），喂给40只泸西斗鸡，以评估精液质量参数、抗氧化酶活性及生化指标。结果表明，与对照组相比，添加10%-20% BSFLP的日粮显著提高了泸西斗鸡的精子活力、存活率和顶体完整性（p < 0.05）。此外，精子的直线运动速度、摆动幅度和曲线运动速度也有所改善（p < 0.05）。然而， progressive motility、平均路径速度（VAP）、精子头部轨迹的平均角位移（MAD）或 beat cross frequency（BCF）没有统计学上的显著差异（p > 0.05）。当日粮中添加5%-20% BSFLP时，精液中的CAT、GSH、GR和SOD活性显著增加（p < 0.05），而MDA含量显著降低（p < 0.05）。此外，添加10%-20% BSFLP的泸西斗鸡血清中的ALT、AST、TP、ALB和ALP水平没有显著差异（p > 0.05）。多项式对比分析显示，多个生殖和抗氧化参数表现出显著的线性响应，而二次效应未被检测到。生化指标未受到BSFLP添加的影响，表明在本研究条件下，日粮中添加高达20%的BSFLP不会对肝脏相关或代谢参数产生不利影响。因此，本研究得出结论：在泸西斗鸡日粮中添加5%-20%的BSFLP可以作为有效的替代蛋白质来源，以提升精液质量和抗氧化酶活性。

**引言**
泸西斗鸡是一种原产于山东省西南部的地方家禽品种，属于高大的多用途品种，具有很强的格斗能力，可用于观赏、娱乐和食用。2015年，它被列入国家畜禽遗传资源目录。泸西斗鸡以其抗病性著称，消费者因其肉质和营养价值而青睐其产品。然而，由于生长速度较慢和繁殖性能较低，该品种的推广受到限制。因此，提高泸西斗鸡的繁殖效率以及寻找成本效益高的饲料成分成为当前研究的重要方向（Bi等人，2017；Chen GuanJun等人，2012）。

全球家禽行业面临的主要挑战是蛋白质饲料资源的短缺。豆粕和玉米粕占家禽饲料成分的60%以上，为家禽提供蛋白质和能量（Ahiwe等人，2024）。因此，在家禽日粮中采用廉价且高效的替代能源和蛋白质来源可能是可持续的选择（Nassar等人，2023）。此外，饲养是家禽行业对环境影响最大的因素，占气候变化总量的82%（Andretta等人，2021）。豆粕作为蛋白质来源，在家禽饲料配方中最为常用（Leinonen等人，2013）。目前，中国是全球最大的大豆消费国，年进口量约为1亿吨（Jiang等人，2025）。这种对大豆进口的依赖引发了对其未来供应稳定性的担忧，同时也关注其生产过程中的环境问题。这些因素促使人们探索家禽日粮中的替代蛋白质来源。可食用昆虫因其天然蛋白质和必需营养素而受到特别关注（Józefiak等人，2016）。

昆虫因其营养价值、环境效益和经济优势而被视为创新的饲料来源。随着对动物蛋白需求的增长、土地和水资源的有效利用以及不可再生能源的局限性，可食用昆虫的重要性日益凸显（Hancz等人，2024）。黑水虻幼虫粉（BSFLP）富含蛋白质、脂肪酸和维生素，具有较高的饲料利用率，无需特殊处理或喂养管理即可轻松加入传统家禽日粮（Elahi等人，2022；Sajid等人，2023；Xu等人，2020）。黑水虻（Hermetia illucens）属于双翅目Stratiomyidae科，具有较短的繁殖周期、快速生长、低成本和低毒性，因此受到广泛研究（Alifian等人，2025；Dafri等人，2025）。干燥粉碎后的黑水虻幼虫含有高比例的粗蛋白（42%-48%）、脂肪（31%-35%）、矿物质（钙4.8%-5.1%、磷0.6%-0.63%）以及维生素B1、烟酸和维生素E等生物活性维生素（Xu等人，2014）。高蛋白含量为精子细胞的精子发生和结构蛋白合成提供了必需的氨基酸（Xue等人，2022）。脂质有助于维持膜完整性，并为精子运动提供能量（Bond等人，2024；Li等人，2026）。钙和磷等矿物质在精子激活和顶体反应中起关键作用（Jiwuba等人，2020）。B族维生素作为线粒体能量代谢的酶辅因子，支持精子运动所需的ATP生成（Gon?alves & Portari，2021），而维生素E作为脂溶性抗氧化剂，可保护精子膜免受氧化损伤（Ogwuegbu等人，2022）。这些营养成分共同有助于改善繁殖性能。研究表明，将一定比例的BSFLP添加到日粮中可提高多种鱼类的生长性能、繁殖性能和免疫力（Barroso等人，2014；Dietz & Liebert，2018；Peng等人，2022；Peng等人，2021；Xie等人，2023；Xu等人，2021）。在猪日粮中添加7%-10%的BSFLP可显著增加仔猪的日增重，并提高其免疫力和生长速度（Crosbie等人，2021；Kar等人，2021；Kawasaki等人，2023；Lee等人，2024；Liu等人，2022）。同样，BSFLP的添加也可改善肉鸡的生长性能，加快屠宰率，增加蛋鸡生殖器官的抗氧化能力，并提高产蛋量（Al-Qazzaz等人，2016；Dabbou等人，2018a；Han等人，2023；Marono等人，2017；Mohammed等人，2017）。由于泸西斗鸡与商业肉鸡或蛋鸡在遗传背景、生殖生理及代谢和生长速度方面存在差异，它们对能量和微量营养素的需求可能有所不同。因此，研究BSFLP衍生物对泸西斗鸡精液质量的影响对于制定特定品种的营养策略至关重要。

**材料与方法**
本研究获得了中国菏泽大学农业与生物工程学院伦理委员会的批准（批准编号P#ZR2019MC038）。实验所用泸西斗鸡来自莒城宏祥畜牧有限公司（中国泸西斗鸡保护场）。

**实验动物与分组**
从40只健康、45周龄、平均体重3.42 ± 0.22公斤的泸西斗鸡中采集精液样本，每周进行两次腹部按摩。每次采集视为一次重复测量；为避免伪重复，统计分析时使用每只公鸡所有采集次数的精液参数平均值。将泸西斗鸡分为5组，每组8只，饲养在70 × 60 × 75厘米的笼子里。所有实验公鸡在相同的环境和管理条件下饲养，并提供等氮、等热量的日粮及自由饮水（表1）。先前研究表明，在肉鸡日粮中添加5%和15%的BSFLP对生长性能和肉质有益（Dabbou等人，2018b；Schiavone等人，2017），但进一步增加BSFLP比例或用其完全替代豆粕（50%、75%和100%）会对家禽健康和生产产生负面影响（Murawska等人，2021）。因此，本研究中BSFLP的比例分别为0%、5%、10%、15%和20%。第1组喂食5% BSFLP，第2组10%，第3组15%，第4组20%。这些添加比例旨在部分替代豆粕和麸皮，而非低剂量补充。所有日粮均设计为等氮和等热量，以确保处理组间的差异反映了BSFLP的营养特性，而非粗蛋白或能量供应的变化。适应期为期28天，喂养试验持续12周。对照组喂食不含BSFLP的常规日粮。BSFLP购自菏泽宠物市场。虽然商业来源的BSFLP在营养成分、微生物安全性和批次一致性上可能存在差异，但该供应商的BSFLP在家禽营养研究中得到广泛应用，且已知含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素和矿物质（Xu等人，2014）。实验鸡只接受为泸西斗鸡定制的标准化常规日粮。实验公鸡在开始采集精液前两周接受了系统训练。具体来说，公鸡首先适应人类操作并被诱导产生性反应。训练内容包括两周的逐步处理和刺激：前6天每天轻轻处理以减少压力和恐惧；第7-14天，每隔一天进行有节奏的背部-腹部按摩。起初部分公鸡的精液量较少或无射精现象，但随着反复处理和刺激，大多数公鸡产生了稳定的射精反应，只有正常反应的公鸡被选入后续研究。精液样本在喂养12周后于清晨采集（每周三次），方法如前所述（Du等人，2025；Sun等人，2022）。采集前修剪并消毒公鸡尾部的羽毛以避免精液污染。

**表1.**提供给Luxi猎鸡种鸡的饲料的成分和营养价值。
**成分及添加比例（%）**
| BSFLP-5 | BSFLP-10 | BSFLP-15 | BSFLP-20 |
|-------|-------|-------|-------|
| 玉米 | 62.5 | 60.0 | 57.0 | 50.0 |
| 麸皮 | 3.0 | 3.5 | 6.0 | 9.0 | 10.0 |
| 大豆粉 | 22.5 | 19.5 | 15.0 | 8.0 | 8.0 |
| BSFLP | 0.0 | 5.0 | 10.0 | 15.0 | 20.0 |
| 石灰石 | 7.0 | 7.0 | 7.0 | 7.0 | 7.0 |
| 预混料* | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
| 合计 | 100.0 | 100.0 | 100.0 | 100.0 |

**营养素水平（ME/(MJ/kg)**
| 蛋白质（CP） | 15.83 | 15.83 | 15.83 | 15.83 |
| 钙（Ca） | 4.55 | 4.55 | 4.55 | 4.55 |
| 磷（P） | 0.52 | 0.52 | 0.52 | 0.52 |

**BSFLP**为黑水虻幼虫粉。

**预混料每公斤饲料提供的营养成分：**
- 维生素A：9900 IU
- 维生素B1：3.0 mg
- 维生素B2：6.0 mg
- 维生素B6：4.5 mg
- 维生素B12：0.025 mg
- 维生素D3：4500 IU
- 维生素E：40 mg
- 维生素K：2.5 mg
- 生物素：0.080 mg
- 胆碱：500 mg
- d-泛酸：10 mg
- 叶酸：1.0 mg
- 烟酸：35 mg
- 植物酶：1000 FTU

**注：**
- 粗蛋白（CP）、钙（Ca）和磷（P）为实测值，其他营养素均为计算值。

### 精液质量和酶活性的测定
从每只公鸡体内收集精液后，使用改良的Ringer溶液（每100 mL蒸馏水中含氯化钠0.68 g、氯化钾0.0173 g、氯化钙0.0064 g、硫酸镁0.0025 g和碳酸氢钠0.245 g）按1:100的比例稀释样本。高稀释比例（1:100）仅用于显微/CASA评估以获得最佳精子浓度，并非用于精液保存或繁殖目的。稀释过程使用等渗缓冲液以减少渗透压应力，样本稀释后立即通过自动精子质量分析仪（HS-9000，成都，Puhua Technology Co., Ltd）进行进一步分析（Aghaei et al., 2010）。分析仪用于测定精子活力、直线度、摆动幅度、前进性、曲线运动速度、平均运动速度、平均运动角度等参数。每组重复三次，记录平均值以供后续分析。

### 精子存活率的测定
精子存活率通过计算每样本中活精子数量占总精子数量的比例来评估。采用eosin-nigrosine染色法（Mussa et al., 2023）。活精子在深色背景下保持无色，而死精子会被染色呈粉红色或红色。这种差异染色方法可在光学显微镜下准确区分活精子与死精子。具体操作是将10 μl精液与20 μl eosin-nigrosin染色液混合后滴在玻璃载玻片上，空气干燥后计数超过200个精子以确定存活率。

### 顶体完整性的测定
顶体完整性通过Giemsa染色显微镜法测定（Zhao et al., 2010; Zhao et al., 2015）。在载玻片上制备精液薄层，空气干燥5–10分钟后用福尔马林磷酸盐固定15分钟，洗涤干燥后用Giemsa染色90分钟，再用自来水冲洗并干燥。在明场显微镜（LEIKA DM IRB）下观察精子，计数具有完整顶体的精子数量。

### 抗氧化酶活性和MDA的测定
酶活性按先前方法测定（Zhao et al., 2015）。具体操作为：将精液在4 °C下以3000 g离心10分钟，收集上清液。使用GSH-Px试剂盒（南京健成，中国）按说明书测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性（单位：U/L）。谷胱甘肽还原酶（GR）活性按Marti et al., 2007方法测定。将0.6 mM氧化型谷胱甘肽、磷酸钠缓冲液、0.5 mM EDTA和85 mM NADPH+H+混合后进行反应。过氧化氢酶（CAT）活性按Goth, 1991方法测定。将0.3 mL样本在50 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中37.5 °C下孵育60秒，然后用1.0 mL 32.4 mM钼酸盐终止反应，测量405 nm处的吸光度（单位：U/mL）。超氧化物歧化酶（SOD）活性按Vives-Bauza et al., 2007方法测定。将精液按1:5比例稀释在磷酸盐缓冲液中，加入含有50 mM碳酸钠、0.025 mM硝基蓝四唑、0.1 mM黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶的反应混合物中。SOD活性以抑制硝基蓝四唑所需的酶量表示（单位：U/mL）。MDA含量使用商业试剂盒（南京健成生物工程有限公司）测定。

### 血清生化指标的测定
在饲养试验结束时及精液收集后，使用无菌注射器从翅膀静脉采集每只实验鸡的5 ml血液样本，放入无EDTA的血液收集管中，使用市售试剂盒（南京健成生物工程研究所，中国）检测血清生化指标，如丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和碱性磷酸酶（ALP）。血清生化指标按Somparn et al., 2024方法测定。血液样本在4 °C下以1500 g离心15分钟分离血清，然后储存在-20 °C下待分析。

### 统计分析
数据汇总在MS Excel表格中，并使用SPSS 25版进行完全随机设计分析。BSFLP添加比例（0%、5%、10%、15%、20%）作为固定因素，每只公鸡视为独立实验单元。每周采集两次精液样本，取每只公鸡各参数的平均值进行统计分析，以避免伪重复。统计模型如下：
Yijk = μ + ai + Sij
其中，Yijk为因变量的观测值，μ为总体均值，ai为BSFLP添加水平的固定效应（i = 0%、5%、10%、15%、20%），Sij为实验误差。

每只公鸡视为独立实验单元，重复采集的精液参数在分析前取平均值。实验开始时各鸡体重相似（3.42 ± 0.22 kg），因此体重未作为协变量纳入统计模型。分析前检查数据以验证参数检验的假设，使用Shapiro–Wilk检验评估残差的正态性，使用Levene检验评估方差齐性。所有数据集满足单因素方差分析的假设。通过Tukey的HSD方法检测不同处理组间的均值差异，p < 0.05的差异视为显著。此外，应用正交多项式对比分析评估BSFLP添加水平（0%、5%、10%、15%、20%）对精液质量的线性及二次效应。

**结果与讨论**
种鸡在鸡的繁殖中起着重要作用，营养是影响其繁殖能力和生育力的主要因素之一（Zawisza et al., 2023）。研究表明，精子活力和顶体完整性与受精能力密切相关（Memili et al., 2020），因此评估了BSFLP的膳食补充效果，结果显示不同添加水平显著提高了Luxi猎鸡种鸡的精子存活率、活力和顶体完整性（p < 0.05）。多项式对比分析显示多个精液质量和抗氧化参数存在显著线性效应（p < 0.05），而二次效应不显著（p > 0.05）。这些结果表明，在评估范围内BSFLP添加量与生殖和抗氧化参数呈剂量依赖性改善关系。

**BSFLP对精子活力、存活率和顶体完整性的影响**
添加15% BSFLP的饲料显著提高了Luxi猎鸡种鸡的精子活力、存活率和顶体完整性（p < 0.05，图1，表2）。线性活力（LM）随添加量增加（从对照组的22.09 ± 1.16%增加到20%组的27.23 ± 1.64%）（p < 0.05）。所有添加组（5%、10%、15%、20%）的LM值均高于对照组，且所有组均显示出显著改善。总活力在所有BSFLP添加组中显著增加（p < 0.05），表明添加量与活力呈线性关系。尽管20%组的数值最高，但与10%和15%组无统计学差异。二次效应的缺失表明在测试范围内未达到最佳添加水平。虽然总活力（MOT）显著增加（p < 0.05），但前进性活力（PMOT）无变化（p > 0.05），说明BSFLP主要增强了精子整体活性而非前进运动能力。活力和运动参数的线性改善表明存在剂量依赖性效应，而二次效应的缺失表明添加量在生理耐受范围内。

**结论**
BSFLP作为营养补充剂，富含蛋白质（40%–57%）、脂肪（31%–35%）、必需氨基酸、矿物质和多种维生素（Shah et al., 2022），尤其是维生素E和B含量较高（钙5%–8%、磷0.6%–1.5%高于鱼粉（Makkar et al., 2014; Sogari et al., 2019）。此外，BSFLP还含有几丁质、抗菌肽和其他生物活性物质（Elhag et al., 2017; Tran et al., 2022）。其灰分含量为9.85%，钙2.14%、磷1.15%、镁1.35%、钾1.35%、锌13.10 mg/kg、铜11.20 mg/kg、铁20.40 mg/kg，基于干物质的能量为5278.49 kcal/kg（De Marco et al., 2015; Jayanegara et al., 2017）。主要必需氨基酸包括丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val）（Cullere et al., 2016）。先前研究显示，粗蛋白和能量水平的膳食补充显著提高了Domyati鸭的精液质量和生育力（Ghonim et al., 2010; Martínez-Soto et al., 2013）。蛋白质是精子和精浆的重要组成部分。饮食中蛋白质的缺乏或不足会导致种公鸡血浆蛋白和氨基酸的缺乏，从而对精子生成产生负面影响，或者降低精子活力，进而降低种公鸡的生育能力（Li等人，2025年）。维生素E是一种天然抗氧化剂，通过多种机制改善精子质量，尤其是通过抑制脂质过氧化（Rengaraj和Hong，2015年）。多项研究证明了维生素E缺乏与雄性生殖功能受损之间的关联。维生素E已被认定为抗不育维生素，长期缺乏或饮食中不足会导致精子生成异常，并影响精液质量，如精子活力、精子存活率和精子能力（Bj?rneboe等人，1990年；Combs，1981年）。此外，黑水虻幼虫粉（BSFLP）富含月桂酸、棕榈酸、必需氨基酸、矿物质微量元素和多种生物活性物质（Sharma等人，2024年）。氨基酸、维生素和微量元素的缺乏会减少精子数量，增加异常精子的数量，并降低精液的活力（Martínez-Soto等人，2013年）。此外，BSFLP含有高量的B族维生素和锌、锰等微量元素（Li等人，2025年）；维生素B在精子生成过程中起着关键作用，可以促进精子的正常发育和成熟，帮助提高精子的活力和形态，并改善精子的质量和数量（Banihani，2017年）。此外，维生素B作为细胞代谢中的酶辅因子也起着重要作用，特别是在氨基酸、脂质和碳水化合物代谢途径中，以支持能量的产生（Depeint等人，2006年；GEN?，2024年）。几种B族维生素，如B1（硫胺素）、B2（核黄素）、B3（烟酸）和B5（泛酸），通过其在关键辅酶中的作用直接调节氧化线粒体磷酸化，包括TPP（硫胺素焦磷酸）、FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸）、辅酶A和NAD?/NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）（Han等人，2025年）。这些辅因子有助于在线粒体内合成ATP，这对维持精子活力和鞭毛运动至关重要。因此，充足的B族维生素供应可以支持高效的线粒体功能和能量代谢，从而提高精子的功能表现（Hrub?a等人，2022年）。同样，锌有助于维持精子膜结构的稳定性和通透性。锌缺乏会减少睾酮的合成和分泌、精子数量以及精子活力（Mousavi Esfiokhi等人，2023年）。锰是维持正常生殖功能所必需的微量元素，其缺乏会导致精子成熟障碍，从而导致少精症或无精症（Orzo?ek等人，2021年）。实验饲料被配制为等氮饮食，并添加了预混料；因此，观察到的精液活力改善不能仅归因于单一微量营养素。相反，BSFLP的积极作用可能反映了其高质量蛋白质、氨基酸组成、脂质成分（包括月桂酸）和生物活性化合物的综合影响。这些成分可能支持精子生成，增强精子完整性，并减少氧化应激，从而提高精子的存活率和活力。

黑水虻幼虫粉（BSFLP）对Luxi猎鸡精液抗氧化酶活性、脂质过氧化和生化指标的影响。下载：下载高分辨率图片（234KB）下载：下载全尺寸图片
图1. 不同比例添加黑水虻幼虫粉（BSFLP）对Luxi猎鸡精液质量参数的影响。X轴表示BSFLP添加水平（0%、5%、10%、15%和20%的饮食），Y轴显示精子活力、精子存活率和顶体完整性率（%）。数值以平均值±标准误表示。条形图上不同的字母表示处理组之间存在显著差异（P < 0.05）。
表2. 不同比例添加黑水虻幼虫粉（BSFLP）对Luxi猎鸡种公鸡精液质量的影响。
精液参数 | BSFLP添加水平（%） | 响应模式
| --- | --- | --- |
| 0% | | 线性 |
| 5% | | |
| 10% | | |
| 15% | | |
| 20% | | |
| 线性 | |
| 22.09 ± 1.16b | |
| 24.32±1.32ab | |
| 25.22±1.61a | |
| 26.48±1.91a | |
| 27.23±1.64ap | < 0.05 |
| 总活力（%） | 84.73±3.02b | |
| 86.43±2.95a | |
| 86.23±2.64a | |
| 87.29±1.96a | |
| 88.32±2.42ap | < 0.05 |
| 进步活力（%） | 55.47±2.82 | |
| 57.26±2.64 | |
| 56.01±3.25 | |
| 56.26±2.52 | |
| 55.78±3.05 | |
| NS | |
| VCL（μm/s） | 47.27±2.70b | |
| 49.03±1.63ab | |
| 50.03±1.94a | |
| 51.22±2.68a | |
| 51.33±1.99ap | < 0.05 |
| VSL（μm/s） | 29.33±1.23b | |
| 32.56±1.11ab | |
| 33.52±1.56a | |
| 33.99±1.42a | |
| 34.01±1.32ap | < 0.05 |
| VAP（μm/s） | 40.06±3.97 | |
| 42.66±2.81 | |
| 44.76±2.36 | |
| 44.43±1.93 | |
| 43.38±3.66 | |
| NS | |
| MAD度（°） | 148.41±21.96 | |
| 156.83±26.77 | |
| 156.83±28.20 | |
| 151.33±25.89 | |
| 157.33±29.64 | |
| NS | |
| ALH（μm） | 11.72 ± 1.50b | |
| 12.73±1.51ab | |
| 13.91±1.70a | |
| 14.07±1.33a | |
| 15.60±1.04ap | < 0.05 |
| BCF（Hz） | 1.08±0.18 | |
| 1.26±0.13 | |
| 1.30±0.13 | |
| 1.49±0.26 | |
| 1.48±0.24 | |
| NS | |

添加5%–20%的BSFLP显著提高了Luxi猎鸡种公鸡精液中CAT、GSH-px、SOD和GR的活性（p < 0.05），同时降低了MDA的活性（表3）。与对照组相比，喂食20% BSFLP的Luxi猎鸡种公鸡精液中的CAT活性为1.59 U/mL、GSH-Px为108.83 U·mg?1蛋白、SOD为1.51 U/mL、GR为4.54 U/L，这些数值显著高于对照组。喂食20% BSFLP的Luxi猎鸡种公鸡精液中的MDA水平为12.74 nmol·mg-1蛋白，也低于对照组。SOD、CAT、GR和GSH-px的水平高于对照组（p < 0.05）。所有处理组的MDA水平都低于对照组。这可能与BSFLP中较高的必需氨基酸、矿物质和维生素含量有关。此外，多项式对比分析显示CAT、GSH-Px、SOD和GR的活性有显著的线性增加（p < 0.05），而MDA浓度显著下降，表明脂质过氧化减少。研究表明，BSFLP富含必需氨基酸、矿物质和维生素，其钙和磷的含量高于鱼粉和大豆粉（Lu等人，2020年）。某些维生素，如维生素E，具有抗氧化作用，可以增加精液中抗氧化酶的活性并降低MDA的含量。将BSFLP添加到鱼饲料中可以显著提高抗氧化酶活性并降低鱼肌肉中的MDA含量（Lu等人，2020年）。抗氧化酶活性的线性增强以及MDA浓度的降低表明，随着BSFLP添加量的增加，氧化平衡得到了改善。二次方效应的缺失表明，在评估的添加范围内，抗氧化能力持续提高，没有出现氧化过载或收益递减的情况。这项实验证明，将BSFLP添加到饲料中可以增加精液中抗氧化酶的活性并降低MDA的含量。

表3. 不同比例添加黑水虻幼虫粉（BSFLP）对Luxi猎鸡种公鸡精液中抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响。
精液参数 | BSFLP添加水平（%） | 响应模式 |
| --- | --- | --- |
| 0% | | 线性 |
| 5% | | |
| 10% | | |
| 15% | | |
| 20% | | |
| 线性 | |
| CAT（U/mL） | 0.92±0.19b | |
| 1.53±0.23a | |
| 1.58±0.19a | |
| 1.58±0.07a | |
| 1.59±0.10ap | < 0.05 |
| NS | |
| GSH-Px（U·mg?1蛋白） | 96.01±2.38b | |
| 105.2 ± 3.11a | |
| 107.17±3.13a | |
| 108.50±4.99a | |
| 108.83±3.85ap | < 0.05 |
| NS | |
| SOD（U/mL） | 1.01±0.09b | |
| 1.16±0.14a | |
| 1.32±0.14a | |
| 1.51±0.16a | |
| 1.51±0.15ap | < 0.05 |
| NS | |
| GR（U/L） | 3.61±0.13b | |
| 4.06 ± 0.10a | |
| 4.49±0.13a | |
| 4.49±0.09a | |
| 4.54±0.08ap | < 0.05 |
| NS | |
| MDA（nmol·mg?1蛋白） | 17.52±1.86a | |
| 13.96±1.15b | |
| 12.99±1.15b | |
| 12.77±1.14b | |
| 12.74±1.14bp | < 0.05 |
| NS | |

将BSFLP添加到饲料中对Luxi猎鸡种公鸡血清中的ALT、AST、TP、ALB和ALP没有显著影响（p > 0.05）（表4）。此外，多项式对比分析未发现显著的线性或二次方趋势（p > 0.05）。TP和ALB是评估家禽健康状况的重要指标。血清蛋白在维持身体稳态中起着重要作用。ALB是体内蛋白质合成的最有利氨基酸来源（Filipovic等人，2007年）。ALT和AST可以预测肝脏功能，如果身体组织和细胞出现异常，血清中的ALT和AST活性会增加。本研究发现，喂食不同水平BSFLP的公鸡的血清生化指标没有显著变化。Marono和Chen Xiaochun报告称，用黑水虻幼虫粉替代大豆粉对产蛋鸡的血清生化指标没有显著影响（Marono等人，2017年），这与本研究结果一致。血清生化指标无显著变化表明，饮食中BSFLP添加量达到20%并未引起与肝脏相关或代谢标志物的可检测变化。然而，全面的生理安全性评估需要额外的评估，如组织病理学检查和长期健康监测。

尽管BSFLP有时被描述为饲料添加剂，但在本研究中，它被视为部分替代大豆粉的功能性蛋白质成分。保持的饮食粗蛋白和能量水平证实，观察到的精液质量和抗氧化状态的改善与BSFLP的蛋白质来源和生物活性成分有关，而不是营养摄入量的增加。此外，增加BSFLP的添加量伴随着米糠含量的逐渐增加，以维持等氮和等热量的饮食。米糠含有较高的纤维成分，可能会影响营养物质的消化率和肠道吸收。然而，总饮食粗蛋白和代谢能保持在恒定水平，且未观察到对精液质量的不良影响。这表明，米糠添加带来的适度纤维增加并未损害Luxi猎鸡的繁殖性能。此外，BSFLP喂养的鸟类中观察到的抗氧化状态和精液质量的改善表明，由于BSFLP中高质量蛋白质、脂质成分和生物活性化合物的存在，任何潜在的营养消化率下降可能被抵消了。尽管如此，未来研究需要直接测量营养消化率和纤维成分，以进一步阐明昆虫蛋白添加、饮食纤维和繁殖性能之间的相互作用。

尽管当前研究提供了关于BSFLP对Luxi猎鸡精液质量影响的有用初步见解，但仍需承认一些方法学限制。首先，样本量相对有限，这可能限制了结果的普遍性并降低了检测微妙处理效应的统计能力。其次，精液样本是从同一只鸡反复收集并在分析前进行平均处理；因此，未应用重复测量统计模型。未来使用更大样本量和适当的重复测量设计的研究将提供关于精液特征随时间变化的更可靠的推断。第三，本研究仅关注精液质量参数，未评估直接繁殖结果，如生育率、交配成功率和孵化率。因此，BSFLP补充对整体繁殖性能的潜在影响需要通过繁殖试验进一步验证。

本研究评估了不同比例添加BSFLP（0–20%）对Luxi猎鸡种公鸡精液质量参数的影响。结果显示，10–20%的添加水平与精液质量的改善相关，包括精子活力及相关运动学特征。然而，由于未对生长性能、饲料效率、交配成功率、繁殖率和孵化率进行评估，因此研究结果仅限于精液质量方面的数据，无法全面反映其繁殖性能。因此，尽管BSFLP作为一种具有潜在功能特性的替代蛋白质来源显示出良好的前景，但在提出实际饮食建议之前，仍需进一步研究其對长期繁殖结果、繁殖参数和生产性能的影响。

**伦理声明**
本研究已获得中国菏泽市菏泽大学农业与生物工程学院伦理委员会的批准（项目编号：P#ZR2019MC038）。实验中使用的 Luxi 繁殖公鸡选自诸城宏祥畜牧有限公司（中国 Luxi 猎鸡保育场）。

**参与同意书**
不适用。

**发表同意书**
不适用。

**资金支持**
- 企业项目：中国陕西省杨凌市杨凌畜牧科技有限公司资助的“微生物发酵与资源昆虫在自然环境中的应用研究，以实现畜禽粪便的无害化及资源化利用技术”，项目编号：2024371701125973；
- 中国山东省自然科学基金，项目编号：ZR2019MC036；
- 山东省创新培训计划；
- 荷泽大学博士基金（XY20BS16）。

**作者贡献声明**
- 曹少杰：资源获取、方法论设计、数据分析、数据管理。
- 郭彦敏：撰写、审稿与编辑、软件使用、项目管理、方法论研究、调查设计。
- 李世伟：撰写初稿、数据分析、概念构建。
- 郭家乐：撰写初稿、数据分析、概念构建。
- 尹宏伟：撰写初稿、数据分析、概念构建。
- 赵先林：撰写、审稿与编辑、项目管理、资金筹措、数据管理、概念构建。