两种PCR检测方法在粪便样本中识别溶组织内阿米巴（Entamoeba histolytica）、E. dispar 和 E. moshkovskii 的效果评估

《Journal of Microbiological Methods》：Evaluation of two PCR protocols for the detection of Entamoeba histolytica/E. dispar/E. moshkovskii in stool samples

鲁斯奈迪·穆希卡（Rousneidy Mujica）|亨利·特罗塞尔（Henry Trosel）|伦佐·尼诺·因卡尼（Renzo Nino Incani）|约翰·赫苏斯（Jhon Jesús）|奈耶斯卡·门德斯（Nayeska Méndez）|玛丽亚·J·佩尔特格尔（María J. Perteguer）|伊丽莎白·费雷尔（Elizabeth Ferrer）

“弗朗西斯科·J·特里亚纳·阿隆索博士”生物医学研究所（BIOMED），卡拉沃沃大学（Universidad de Carabobo）阿拉瓜州（estado Aragua）马拉凯（Maracay）分校健康科学学院

摘要

阿米巴病的诊断（由溶组织内阿米巴引起）通常依靠粪便学技术进行，但在寄生虫载量较低的情况下，这些方法的敏感性较低。此外，诸如异形内阿米巴（Entamoeba dispar）和莫什科夫斯基内阿米巴（E. moshkovskii）等物种无法通过形态学方法区分。聚合酶链反应（PCR）可能是一个替代方案。本研究比较了四种DNA提取方法，并对两种PCR技术（基于18S序列的PCR-Eh用于溶组织内阿米巴，以及多重PCR-Ehdm用于溶组织内阿米巴、异形内阿米巴和莫什科夫斯基内阿米巴）进行了标准化，以用于粪便样本的分子诊断。评估了这些技术的特异性。将这两种标准化的PCR检测方法应用于来自委内瑞拉一个以内阿米巴属病原体流行的农村社区的180份粪便样本。将PCR结果与粪便学检测结果进行了对比。使用Wizard试剂盒进行DNA提取的方法效果最佳，因为所获得的DNA质量较高。PCR检测方法的标准化使得能够确定最佳的试剂浓度，这些浓度低于原始作者使用的浓度。18S序列分析显示了基因变异。在所评估的样本中，两种标准化PCR检测方法的敏感性低于粪便学检测方法，这可能是由于该地区寄生虫的基因变异所致。因此，在实际应用前，必须先用目标地区的样本对PCR技术进行验证。粪便学检测发现该感染具有高发病率，这凸显了分子诊断方法的重要性。