RP11-738E22.3 通过抑制自噬和凋亡来促进肝细胞癌的进展，其机制涉及 MAPK/ERK/mTOR 信号通路

《International Journal of Biological Macromolecules》：RP11-738E22.3 promotes hepatocellular carcinoma progression by inhibiting autophagy and apoptosis via MAPK/ERK/mTOR pathway

　　

陈一红|胡艾雅|唐世琪|崔光祖|马嘉尧|李茵|刘海聪|周欣|彭青萍|唐迪雅|王新文|韩颖|蔡长静|曾珊|沈红|江斌远

中南大学湘雅医院肿瘤科，中国湖南长沙

摘要

肝细胞癌（HCC）是一种高度异质性的肿瘤，对全球数百万人构成了威胁。长链基因间非编码RNA（lincRNA）已被认为是影响HCC患者预后的关键调控因子。然而，它们在HCC中的具体作用机制仍需进一步研究。尚未报道的lincRNA RP11-738E22.3在HCC中的作用仍然未知。在本研究中，通过Arraystar长链非编码RNA（lncRNA）微阵列测序技术鉴定出差异表达的lincRNA，并使用RT-qPCR和FISH技术检测了RP11-738E22.3的表达水平。通过体外和体内实验探讨了RP11-738E22.3对HCC细胞自噬、凋亡、异种移植瘤生长和转移的影响。此外，还进行了RNA测序、双报告基因荧光检测和 Rescue实验以阐明其分子机制。我们发现RP11-738E22.3在HCC组织中显著过表达，并与较差的预后和不良的临床病理特征相关。功能上，RP11-738E22.3通过上调MAPK/ERK/mTOR信号通路的激活因子FBXO6，在体外和体内促进了HCC的迁移和增殖。机制上，RP11-738E22.3通过竞争性结合miR-504-3p和miR-3135b来调节FBXO6的表达，从而激活MAPK/ERK/mTOR通路，抑制HCC中的自噬和凋亡。总之，lincRNA RP11-738E22.3是一个新的、有前景的HCC进展生物标志物，通过抑制自噬和凋亡并激活MAPK/ERK/mTOR信号通路发挥其致癌作用。针对RP11-738E22.3可能为HCC治疗带来新的治疗机会。

引言

全球范围内，HCC是癌症相关死亡的第三大常见原因[1]。尽管TACE（经动脉化疗栓塞）、TKIs（酪氨酸激酶抑制剂）和免疫疗法等治疗策略取得了进展，但HCC患者的预后仍然不理想[2]、[3]、[4]。大多数HCC患者在晚期才被发现，这导致5年生存率仅为18%[5]、[6]。因此，发现新的治疗靶点和预后预测因子对于改善HCC患者的临床结果具有重要意义。

长度超过200个核苷酸且基本上无法编码蛋白质的RNA被称为lncRNAs[7]。它们在转录、RNA加工和翻译水平上控制基因表达中起着关键作用[8]、[9]。近几十年来，数千种lncRNAs已被证明与肿瘤进展、凋亡和治疗敏感性有关[10]、[11]、[12]。尽管关于lncRNAs的研究越来越多，但它们在癌症发生和进展中的作用仍不完全清楚。因此，识别未被探索的lncRNAs对于深入了解HCC进展具有重要意义。

本研究发现了一种新的lncRNA RP11-738E22.3，其在HCC中显著升高，并与HCC患者的不良预后相关。功能上，RP11-738E22.3促进HCC的发展，同时抑制自噬和凋亡。机制上，RP11-738E22.3作为竞争性内源性RNA（ceRNA），通过结合miR-504-3p和miR-3135b来调节MAPK/ERK/mTOR信号通路，从而调控HCC细胞中的自噬和凋亡。总之，我们的发现表明RP11-738E22.3在驱动HCC进展中起着关键作用，并为其作为治疗靶点提供了新的见解。

部分摘录

样本收集

从中南大学湘雅医院接受手术切除的90名患者中获得了配对的HCC组织和相邻正常肝组织（ANLT）。本研究已获得湘雅医院伦理委员会的批准（批准编号：201802039）。详细的临床病理信息总结在表1中。

Arraystar lncRNA微阵列

新获得的HCC组织和ANLT（三对）进行了RNA提取。经过严格的质量控制评估后，...

肿瘤组织和细胞系中RP11-738E22.3的高表达与HCC预后显著相关

三对新鲜的HCC标本和ANLT接受了lncRNA微阵列分析，以研究HCC患者中lincRNA的表达情况。总体而言，731个lincRNA在HCC组织中的表达显著增加，而624个在ANLT中表达减少。改变的表达的lncRNA展示在图1A-B中。在选定的六个最显著上调的lincRNA中，RP11-738E22.3表现出最显著的差异表达（图1C和补充图S1）。

讨论

近年来，越来越多的证据表明，失调的lncRNAs是多种癌症发生和发展过程中的关键调控因子[20]、[21]。我们使用lncRNA微阵列系统分析了HCC中异常表达的lncRNAs，并在三个匹配的肿瘤-正常肝组织对中验证了前六个lincRNA的表达水平。随后选择了表达水平最高的RP11-738E22.3进行进一步分析。

缩写

HCC
肝细胞癌
lincRNAs
长链基因间非编码RNA
竞争性内源性RNA
qRT-PCR
逆转录定量实时聚合酶链反应IHC
免疫组化HE
苏木精和伊红FISH
荧光原位杂交CCK-8
细胞计数试剂盒-8EdU
5-乙炔基-2′-脱氧尿苷TEM
透射电子显微镜ANLT
相邻正常肝组织