全面的基因组编辑与信号通路工程技术使得腺病毒生产细胞更具效力且更安全

《Communications Biology》：Comprehensive genome editing and signaling pathway engineering evolve potent and safe adenoviral producer cell

　　

摘要

腺病毒作为一种疫苗和癌症治疗的载体，因其能够消灭肿瘤细胞并刺激宿主免疫反应而备受关注。然而，很少有生产细胞完全适合用于腺病毒的制备。在本文中，我们提出了一种策略，结合了同源无关的靶向整合技术和sgRNA文库，这种方法不仅系统地调控了细胞基因表达谱，使B/C亚型腺病毒的产量提高了3到7倍，还将HEK293细胞中的原始腺病毒序列替换为重组E1转基因，从而显著降低了临床致病性复制型腺病毒的生产。此外，通过月在生物反应器中进行定向进化，培育出了MC09克隆细胞，这种细胞在安全性和效力方面均有出色表现，可用于临床级别的腺病毒大规模生产。从分子层面来看，通过同时抑制碳代谢、凋亡和溶酶体途径（通过三重敲低H6PD、Lamin A/C和caspase-3基因来实现），可以降低MC09细胞中的腺病毒产量。同时，这些分子的过度表达又能进一步促进腺病毒载体的生物合成，这说明多个途径之间存在协同作用，共同增强了腺病毒的生产能力。