通过黄酮醇靶向AMPK/ACC通路可抑制从头脂肪生成，并降低MASH-HCC小鼠模型中的肿瘤负担

《Life Sciences》：Targeting the AMPK/ACC pathway with luteolin suppresses de novo lipogenesis and limits tumor burden in a MASH-HCC mouse model

　　

问题三：摘要翻译 目的： 代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）是肝细胞癌（HCC）的主要驱动因素，但目前有效的治疗干预手段仍然有限。虽然木犀草素（luteolin）以其抗炎特性著称，但其在MASH向HCC转化过程中的疗效及潜在机制尚不完全清楚。本研究旨在探讨木犀草素对MASH-HCC的保护作用及AMPK/ACC信号通路在此过程中的作用。 材料与方法： 在体内实验中，采用二乙基亚硝胺（DEN）联合高脂高胆固醇（HFHC）饮食建立MASH-HCC小鼠模型。给予小鼠载体或木犀草素（50或100 mg/kg）治疗26周。通过血清甲胎蛋白（AFP）、组织学分析和蛋白质印迹法监测疾病进展。在体外实验中，用胆固醇刺激HepG2和Huh-7细胞，并给予木犀草素处理。采用AMPK抑制剂BAY-3827验证木犀草素的代谢获益是否依赖于该通路。 主要发现： 木犀草素治疗显著减少了MASH-HCC小鼠的肿瘤负荷，降低了血清AFP水平，并减轻了肝脏脂质积累和纤维化。体外结果与此一致，表明木犀草素可减少胆固醇诱导的脂质沉积。从机制上讲，木犀草素增加了AMPK及其下游靶点ACC的磷酸化水平。此外，使用BAY-3827进行药理学抑制AMPK后，消除了木犀草素在肝细胞中的降脂作用，证实了其治疗获益是通过激活AMPK介导的。 意义： 木犀草素通过激活AMPK/ACC信号通路并随后抑制新生脂肪生成（DNL），抑制了MASH向HCC的进展。这些发现凸显了木犀草素作为预防和治疗MASH相关肝癌的一种有前景的治疗候选药物。

问题四：论文解读

木犀草素通过激活AMPK/ACC通路抑制MASH相关肝癌的研究解读

研究背景与立项依据

肝细胞癌（HCC）是全球癌症相关死亡的第三大原因，五年生存率仅为约18%。随着高热量饮食和久坐生活方式的流行，代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MAFLD）的患病率急剧上升，其进展形式——代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）已成为肝硬化和HCC的关键驱动因素。到2019年，病毒性HCC开始下降，而MASH相关HCC（MASH-HCC）的发病率显著上升。MASH-HCC患者通常年龄较大，伴有较高的体重指数（BMI）和多种代谢合并症，预后较差。有效干预MASH-HCC的病理进展是当前迫切的临床需求。

新生脂肪生成（DNL）的异常激活是HCC发展的标志，乙酰辅酶A羧化酶（ACC）作为DNL的关键调节酶，其磷酸化失活可抑制脂肪酸合成。AMPK作为细胞能量状态的核心调节因子，通过磷酸化ACC来抑制脂肪酸合成。天然黄酮类化合物木犀草素（luteolin）具有抗氧化、降脂和抗肿瘤特性，但其对MASH向HCC进展的影响及其通过AMPK/ACC轴的作用机制尚不明确。因此，研究人员旨在探索木犀草素对MASH-HCC的影响及其分子机制。

主要关键技术方法

研究人员构建了DEN联合高脂高胆固醇（HFHC）饮食诱导的MASH-HCC小鼠模型，并给予不同剂量木犀草素干预26周。通过血清生化分析、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测甲胎蛋白（AFP）水平，结合苏木精-伊红（H&E）、油红O、Masson染色及免疫组化评估肝脏病理变化。利用RNA测序（RNA-seq）分析转录组变化，并通过Western blotting和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证关键蛋白及基因表达。在体外，利用胆固醇负载的HepG2和Huh-7细胞系，结合AMPK特异性抑制剂BAY-3827进行挽救实验，以验证信号通路的依赖性。

研究结果

3.1 木犀草素减轻MASH小鼠肝脏肿瘤发生

通过建立DEN/HFHC诱导的小鼠模型，研究发现与载体组相比，木犀草素（50和100 mg/kg）和阳性对照依折麦布（ezetimibe）组显著减少了肝脏肿瘤数量和最大肿瘤表面积。同时，木犀草素降低了血清AFP水平，并抑制了Lyve1、Ly6d、Birc5和Cd44等肿瘤相关标志物的mRNA表达，且对心、脾、肺、肾等主要器官形态无显著影响，表明其具有良好的系统安全性。

3.2 木犀草素降低HFHC饮食喂养小鼠的脂质水平

H&E和油红O染色显示，木犀草素和依折麦布显著减轻了HFHC诱导的肝脂肪变性和脂滴积累。血清生化分析进一步证实，木犀草素显著降低了总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）水平，并改善了由HFHC饮食引起的丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）升高，缓解了肝损伤。

3.3 木犀草素减轻MASH-HCC小鼠的肝纤维化

Masson三色染色、天狼星红染色及α平滑肌肌动蛋白（αSMA）免疫组化结果显示，木犀草素和依折麦布显著减轻了模型小鼠的纤维沉积。此外，木犀草素还下调了纤维化相关基因αSma和Col1a1的mRNA及蛋白表达水平，证实了其对肝纤维化的改善作用。

3.4 木犀草素在体外抑制脂质积累

WST-1法测定显示木犀草素以剂量依赖性方式降低HepG2细胞活力（IC₅₀为43.36 μM）。在胆固醇（200 μM）刺激的HepG2和Huh-7细胞中，10 μM木犀草素显著降低了细胞内TC水平，并减少了油红O和尼罗红（Nile Red）染色的脂滴含量，但对炎症因子的影响本文未作深入探讨。

3.5 木犀草素调节AMPK/ACC信号轴

RNA测序分析显示，木犀草素处理后差异表达基因（DEGs）主要富集于AMPK信号通路，其中Acca（编码ACC1）显著下调。Western blotting结果表明，HFHC饮食抑制了肝脏及细胞中AMPK和ACC的磷酸化，而木犀草素治疗以剂量依赖性方式恢复了AMPK的活化及其对ACC的抑制性磷酸化，同时增强了AMPK的上游激酶LKB1的表达。

3.6 AMPK抑制消除木犀草素的保护作用

使用AMPK抑制剂BAY-3827进行的挽救实验表明，在非细胞毒性浓度（2.5 μM）下，BAY-3827能够显著逆转木犀草素对胆固醇诱导的细胞内TC积累和脂滴形成的抑制作用。这表明木犀草素的降脂效应在很大程度上依赖于AMPK信号的激活。

结论与讨论

综上所述，本研究证实木犀草素通过激活AMPK/ACC信号通路，抑制新生脂肪生成，从而发挥抗MASH向HCC进展的作用。尽管AMPK激活的具体上游机制及临床有效剂量仍需进一步探索，但这项研究确立了木犀草素作为一种潜在的低毒性代谢干预候选药物，为MASH-HCC的治疗提供了新的靶点和策略。