三重突变HSV-1表达可溶性B7-1联合CTLA-4阻断抑制舌癌淋巴结转移

《Cancer Science》：Triple-Mutated HSV-1 Expressing Soluble B7-1 Plus CTLA-4 Blockade Suppresses Lymph Node Metastasis in Tongue Cancer

　　

颈淋巴结转移是口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者预后不良的主要预测因子，这强调了寻求能有效靶向转移扩散疗法的必要性。研究人员此前报道过，第三代溶瘤单纯疱疹病毒1型(HSV-1) G47Δ可快速从舌肿瘤转移至颈部淋巴结，并在小鼠模型中抑制转移。基于这种嗜淋巴特性以及CD28–B7-1相互作用对T细胞活化的免疫学重要性，研究人员探索了T-mB7-1的潜力，这是一种基于G47Δ的新型溶瘤HSV-1，可表达可溶性鼠B7-1。T-mB7-1在体外分泌可溶性B7-1，且不损害细胞病变活性。在体内，瘤内注射T-mB7-1抑制了耐药KLN205-MUC1皮下模型的肿瘤生长，并延长了SCCVII原位舌肿瘤模型小鼠的生存期。在表现出快速淋巴转移的KLN205-MUC1原位舌癌模型中，单剂量T-mB7-1（而非对照病毒T-01）显著减少了颈部淋巴结转移并提高了生存率。重复低剂量给予T-mB7-1进一步导致近乎完全的淋巴结转移抑制，并显著延长生存期。流式细胞术显示，T-01和T-mB7-1均在18小时诱导颈部淋巴结中CD69+T细胞活化，但在24小时该比例在T-mB7-1组降低。重要的是，将T-mB7-1与全身性CTLA-4阻断联合使用，显著延长了携带原位KLN205-MUC1肿瘤小鼠的生存期，在该致死性模型中所有治疗小鼠均存活超过80天。这些发现表明，表达可溶性B7-1的溶瘤HSV-1联合CTLA-4阻断可持久抑制淋巴结转移，为区域性转移性OSCC提供了一种有前景的微创策略。

口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma, OSCC）是口腔最常见的恶性肿瘤之一，尽管手术、放疗和化疗取得了进展，但伴有颈部淋巴结转移的患者预后仍然不佳。近年来，免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors, ICIs）虽成为晚期OSCC的治疗选择，但其临床获益受限于较低的响应率和严重的免疫相关不良反应。与此同时，溶瘤病毒疗法作为一种新兴的微创治疗手段备受关注。特别是第三代三重突变溶瘤单纯疱疹病毒1型（Herpes Simplex Virus Type 1, HSV-1）——G47Δ，凭借其增强的肿瘤选择性复制能力和免疫刺激修饰，已在恶性胶质瘤治疗中显示出疗效。鉴于研究人员此前已证实G47Δ具有向颈部淋巴结快速传播并抑制转移的嗜淋巴特性，且考虑到CD28–B7-1共刺激信号在区域淋巴结内T细胞活化中的关键作用，本研究旨在评估一种基于G47Δ平台、表达可溶性鼠B7-1的溶瘤HSV-1（T-mB7-1）在治疗伴颈部淋巴结转移的OSCC模型中的疗效与安全性，并探讨其与CTLA-4阻断联用的协同潜力。该研究成果已发表于《Cancer Science》。

为实现上述目标，研究人员采用了多种关键技术方法。实验使用了源自日本研究与生物资源细胞库（JCRB）及理化学研究所（Riken）的生物资源研究中心的多种鼠源肿瘤细胞系（如SCCVII、KLN205-MUC1）及人OSCC细胞系（SAS）。T-mB7-1病毒通过T-BAC系统构建，利用Cre介导的重组将编码鼠B7-1胞外域与人免疫球蛋白G（IgG）Fc段融合的基因插入病毒基因组。体内实验采用免疫功能正常的DBA/2、C3H/He及A/J小鼠建立皮下及原位舌癌模型，通过瘤内注射病毒、腹腔注射抗CTLA-4抗体进行治疗，并利用流式细胞术、ELISA及实时PCR等手段分析病毒分布、免疫细胞活化及细胞因子表达情况。

研究结果显示：

1. 1.
   T-mB7-1在体外诱导B7-1分泌且不损害病毒细胞病变活性：酶联免疫吸附试验（ELISA）证实T-mB7-1感染细胞后可释放可溶性B7-1，且该病毒保留了与对照病毒T-01相当的对鼠源性鳞状细胞癌细胞的细胞病变活性。
2. 2.
   T-mB7-1的体内抗肿瘤疗效：在免疫活性宿主中，T-mB7-1在抵抗性KLN205-MUC1皮下模型中显著抑制肿瘤生长，并在SCCVII原位舌肿瘤模型中延长了生存期。
3. 3.
   舌内给药的安全性：在HSV-1易感A/J小鼠中，舌内注射高剂量的T-mB7-1未引起体重下降或行为异常，而野生型HSV-1则导致迅速发病和死亡，证实了该疗法的安全性。
4. 4.
   T-mB7-1抑制原位舌癌模型的淋巴结转移并延长生存期：在快速转移的KLN205-MUC1原位舌癌模型中，单剂T-mB7-1显著延长生存期并减小了颈部淋巴结体积，降低了淋巴结内活转移细胞数量。多次低剂量注射T-mB7-1实现了近乎完全的淋巴结转移抑制，并显著延长了生存期，大部分小鼠存活超过100天。
5. 5.
   可溶性B7-1调节淋巴结中的T细胞活化：流式细胞术分析显示，T-mB7-1和T-01在注射后18小时均诱导了CD69⁺T细胞活化，但在24小时T-mB7-1组的活化T细胞比例显著降低，同时干扰素-γ（IFN-γ）水平升高，提示局部可溶性B7-1表达缩短了早期T细胞活化标志物的持续时间，但增强了效应因子产生。
6. 6.
   联合全身CTLA-4阻断增强疗效：在KLN205-MUC1原位舌癌模型中，T-mB7-1与抗CTLA-4抗体联用显著优于单一疗法，所有联合治疗组的小鼠均存活超过80天，而在皮下模型中该联合疗法也显著抑制了肿瘤生长。

讨论部分指出，溶瘤病毒治疗的核心在于其刺激宿主抗肿瘤免疫的能力。B7-1作为关键的共刺激配体，通过结合CD28激活T细胞。本研究发现，虽然T-mB7-1对原发肿瘤的疗效与对照病毒相当，但在抑制淋巴结转移方面表现出显著优势。这一差异可能源于可溶性B7-1在引流淋巴结局部诱导的免疫微环境改变。尽管可溶性B7-1可通过结合CTLA-4传递抑制信号，但联合CTLA-4阻断策略有效地消除了这一潜在限制，释放了其全部免疫刺激潜能。此外，CTLA-4阻断可能通过削弱调节性T细胞（Tregs）的活性来增强抗肿瘤免疫。该研究首次在头颈癌模型中验证了基于G47Δ平台表达可溶性B7-1的策略，并确立了其安全性与有效性。尽管本研究未深入探讨与其他免疫检查点（如PD-1/PD-L1）的相互作用及其他免疫细胞亚群的具体贡献，但结果为开发新型免疫调节溶瘤HSV-1并将其与免疫检查点阻断联合用于区域性转移性OSCC的治疗提供了坚实的临床前依据。