《Mechanisms of Ageing and Development》：Circulating miR-483-5p predicts long term all-cause mortality in hospitalized older adults
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准确预测老年患者的长期死亡率仍然具有挑战性，因为时序年龄和常规临床指标不能完全捕捉生物脆弱性。循环microRNA（miRNA）已成为衰老相关病理生理学的潜在生物标志物，但其长期预后价值尚不明确。在这项嵌套于Report-AGE队列的前瞻性观察研究中，研究人员
准确预测老年患者的长期死亡率仍然具有挑战性，因为时序年龄和常规临床指标不能完全捕捉生物脆弱性。循环microRNA（miRNA）已成为衰老相关病理生理学的潜在生物标志物，但其长期预后价值尚不明确。在这项嵌套于Report-AGE队列的前瞻性观察研究中，研究人员评估了选定的循环miRNA是否能预测年龄≥65岁的住院患者10年全因死亡率。在648名参与者中测量了基线循环miR-483-5p、miR-320b、miR-21-5p和miR-146a-5p水平，并将其分为三分位数。在随访期间，共发生525例死亡。在考察的四种miRNA中，较高的循环miR-483-5p水平与死亡率增加相关。在完全调整的Cox模型中（纳入了人口学特征、共病负担、多重用药、肾功能、血液学指标、炎症参数、白蛋白和钙），最高miR-483-5p三分位数的参与者与最低三分位数相比，死亡风险显著更高。在排除慢性肾脏病（CKD）患者后，该关联依然稳健。在探索性分析中，miR-483-5p和miR-320b与表型年龄（Phenotypic Age）加速的相关性强于时序年龄。加入miR-483-5p可在早期和中期随访中适度改善死亡率区分度。这些发现表明，循环miR-483-5p与死亡率相关，并可能反映晚年的生物脆弱性。
研究背景、问题与研究动机
衰老伴随着多病共存和衰弱（frailty）的逐渐累积，而多种慢性病的临床管理常导致多重用药，共同导致了老年人群不成比例的死亡风险。然而，准确预测该人群的长期结局仍具挑战，因为标准临床指标只能部分捕捉衰老轨迹背后的生物衰退。识别能够量化衰老生物维度并优化预后分层的生物标志物，因此成为老年医学的一项主要研究重点。
微RNA（microRNA， miRNA， miRs）是调控转录后基因表达并参与广泛细胞通路的小型非编码RNA。在晚年主要慢性疾病中，miRNA表达改变被持续报道，表明miRNA失调反映了疾病的生物负荷。特别是，循环miRNA可能作为最终影响死亡风险病理状态的微创生物标志物。然而，循环miRNA是否也能预测老年患者的长期死亡率，以及其是否能补充经典的长期死亡率临床预测指标，在很大程度上尚未被探索。为了填补这些空白，本研究进行了前瞻性研究，评估一组预先设定的循环miRNA能否在一个特征良好的老年队列中预测10年全因死亡率，并评估了其相对于传统临床模型的增量判别价值。
研究方法概述
本研究是在Report-AGE项目框架内进行的前瞻性观察性研究，招募了2011年9月至2021年10月期间入住意大利三家IRCCS INRCA医院急性病房的≥65岁患者。本研究作为预先定义的子研究，纳入了约650名有可用生物样本的患者。通过医院记录和与国家登记处关联获取死亡率数据，确保完整确定生命状态。
选定的miRNA（miR-483-5p、miR-320b、miR-21-5p、miR-146a-5p）通过逆转录定量PCR（qRT-PCR）进行测量，并使用合成的cel-miR-39-3p进行标准化，相对表达（RE）采用2-ΔCt方法计算。协变量包括人口学特征、共病（使用Charlson共病指数，CCI评估）、多重用药（定义为同时使用≥5种药物）和一系列实验室参数。表型年龄（Phenotypic Age）及表型年龄加速（Phenotypic Age acceleration）根据Levine等人提出的基于临床生物标志物的算法计算。统计分析使用Cox比例风险模型、Kaplan-Meier估计、限制性立方样条和时间依赖性受试者工作特征曲线（AUC）等方法。
研究结果
3.1. 基线特征和随访
研究人群基线特征如表1所示。在研究人群（n=648）中，随访期间共发生525例死亡（81.0%）。死亡患者年龄显著更大，表型年龄加速更高，多重用药暴露更频繁，CCI负担更高，生化参数如白蛋白、血红蛋白、中性粒细胞-淋巴细胞比率（NLR）、估计肾小球滤过率（eGFR）等均存在差异。在循环miRNA中，仅miR-483-5p在死亡组中水平显著更高。miR-483-5p和miR-320b与表型年龄加速的正相关性强度高于与时序年龄的相关性。
3.2. 生存分析
在单变量Cox模型中，较高的miR-483-5p和miR-320b水平与10年全因死亡率显著相关，而miR-21-5p和miR-146a-5p无显著关联。后续多变量分析仅纳入miR-483-5p和miR-320b。
在完全调整的多变量Cox模型中（表3），最高三分位数miR-483-5p水平的参与者与最低三分位数相比，死亡风险高出36%（风险比，HR 1.37, 95% CI 1.10–1.70），而miR-320b在多变量调整后不再与死亡率独立相关。排除慢性肾病患者后，miR-483-5p的关联仍然显著。在同时包含两种miRNA的模型中，结果一致：miR-483-5p保持显著关联，而miR-320b不显著。
限制性立方样条分析（图1）显示miR-483-5p和miR-320b的循环水平与全因死亡率存在显著非线性关联。Kaplan-Meier曲线（图2）显示，按miR-483-5p三分位数分层的生存轨迹存在显著差异，最高三分位数的生存率明显降低。
时间依赖性ROC曲线（图3）分析显示，在包含年龄、性别、CCI、多重用药和实验室参数的临床模型基础上加入miR-483-5p，可在1年、3年和4年随访时带来统计学上显著的、尽管是适度的判别能力提升，但在后期时间点无显著益处。
讨论与结论总结
在这项住院老年患者的前瞻性队列研究中，研究人员发现较高的循环miR-483-5p水平与10年随访期间增加的长期全因死亡率相关。在调整了多种协变量后，该关联仍然显著，并且在排除慢性肾病患者后保持稳健。在所研究的四种候选miRNA中，仅miR-483-5p是独立相关的标志物。经典的炎症相关miRNA（miR-146a-5p和miR-21-5p）未能预测长期死亡率，提示晚年的慢性死亡风险并不仅仅是炎症负荷的累积结果，而是反映了代谢、结构和功能衰退跨多系统的整合。
从生物学角度看，miR-483-5p与代谢调节、纤维化、血管功能障碍和组织重塑等通路相关，其与表型年龄加速的强相关性支持其作为系统性脆弱性（而非特定疾病表型）标志物的潜在作用。从预后角度看，miR-483-5p在综合性临床模型之外提供的增量判别价值有限，主要局限于早中期随访，这反映了高龄死亡风险的多因素本质。
研究结论翻译：总之，本研究将循环miR-483-5p确定为老年人长期死亡率的独立关联因子，将先前在急性疾病中的观察结果扩展到慢性衰老背景。虽然其预后影响有限，但这些发现支持了特定循环microRNA可能反映晚年累积生物脆弱性的概念。未来的研究应侧重于重复验证、纵向评估以及将miRNA与功能、临床和分子衰老表型相结合，而非过早地进行临床转化。
