蒂洛酮（Tilorone）能够抑制由转化生长因子-β（TGF-β）驱动的成纤维细胞活化，并恢复骨形态发生蛋白（BMP）-Smad1/5/8信号通路的功能：这对喉气管纤维化具有重要意义

《Journal of Translational Medicine》：Tilorone suppresses TGF-β–driven fibroblast activation and restores BMP–Smad1/5/8 signaling: implications for laryngotracheal fibrosis

　　

摘要

背景

喉气管纤维化是长期插管的罕见但严重的并发症，会导致气道狭窄、呼吸窘迫、声音嘶哑，在晚期病例中甚至可能引发危及生命的气道阻塞。目前的治疗方法主要以手术为主，而米托霉素C、皮质类固醇或5-氟尿嘧啶等药物疗法的效果并不一致且可能存在毒性。因此，仍然迫切需要安全有效的抗纤维化疗法。转化生长因子-β（TGF-β）是纤维化的关键介质，它促进成纤维细胞的活化、迁移以及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等促纤维化标志物的表达。

目的

本研究旨在体外评估合成小分子tilorone二氯化物的抗纤维化潜力，特别是在人体呼吸系统成纤维细胞中的作用。

方法

通过分析人类喉气管纤维化组织样本来评估纤维化变化。使用MRC-5人源肺成纤维细胞建立的体外模型来研究tilorone的作用。分子生物学分析（RT-qPCR、免疫细胞化学、Western blotting）用于量化关键信号分子的mRNA和蛋白质表达。通过细胞增殖和存活率检测评估tilorone的潜在细胞毒性效应。功能测定实验包括伤口划痕实验和单细胞追踪，用于评估成纤维细胞的运动能力；原子力显微镜（AFM）用于测量细胞外基质的弹性。

结果

在人类喉气管纤维化组织及经TGF-β处理的MRC-5成纤维细胞中，骨形态发生蛋白（BMP）信号通路中关键转录因子Smad1/5/8的磷酸化水平均降低。Tilorone处理未影响MRC-5细胞的存活率或增殖，但增加了BMP2、BMP4、BMP7和BMP14（GDF5；生长分化因子5）的mRNA表达，增强了Smad1/5/8的磷酸化，并抑制了TGF-β诱导的Smad2/3磷酸化。从功能角度来看，tilorone抑制了TGF-β驱动的成纤维细胞迁移和α-SMA的表达，降低了胶原蛋白I和III的mRNA水平，并恢复了细胞外基质的弹性，这一点通过AFM得到了证实。

结论

Tilorone能够拮抗TGF-β介导的促纤维化信号通路，并在体外恢复MRC-5成纤维细胞中的BMP通路活性。这些发现表明tilorone是治疗喉气管纤维化等纤维化性气道疾病的有希望的治疗候选药物。