环孢素A通过激活内质网应激（endoplasmic reticulum stress），靶向miR-212-5p/ATF6轴，从而促进肾脏纤维化（promotes renal fibrosis）

《Journal of Translational Medicine》：Cyclosporine A promotes renal fibrosis through activating endoplasmic reticulum stress by targeting miR-212-5p/ATF6 axis

　　

摘要

引言

环孢素A（CsA）是一种广泛使用的免疫抑制药物，但其长期使用与肾纤维化有关。尽管其在临床上的重要性显而易见，但CsA诱导肾纤维化的分子机制仍知之甚少。

方法

我们使用了C57BL/6小鼠（每组6只），并给予CsA治疗（30 mg/kg/天，通过灌胃），同时使用波士顿大学小鼠近端肾小管（BUMPT）细胞（每组6只），这些细胞暴露于CsA（8 μM）环境中。评估方法包括Masson三色染色、Western blot、定量实时PCR、免疫组化和原位杂交。机制研究使用了miR-212-5p模拟物和抑制剂，激活转录因子6（ATF6）的过表达，以及内质网（ER）应激抑制剂4-苯丁酸（4-PBA）。数据以均值±标准差的形式呈现；统计显著性定义为p<0.05。

结果

CsA在体内和体外均诱导了显著的肾纤维化，表现为胶原沉积增加以及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白、I型胶原和IV型胶原以及关键促纤维化因子的表达升高（p<0.05）。RNA分析显示，miR-212-5p在CsA处理的肾脏中显著上调，尤其是在肾小管中。同时，ATF6（未折叠蛋白反应（UPR）的保护成分）显著下调。生物信息学预测和荧光素酶报告基因实验证实miR-212-5p直接靶向Atf6 mRNA的3′非翻译区。从功能上看，miR-212-5p模拟物加剧了CsA诱导的ATF6抑制和纤维化，而抗miR-212-5p则恢复了ATF6的表达，减轻了内质网应激，并显著降低了纤维化标志物。类似地，ATF6的过表达或使用4-PBA抑制内质网应激也能改善CsA诱导的纤维化。

结论

我们的发现将miR-212-5p确定为CsA的一个先前未被识别的分子靶点，并确立了miR-212-5p/ATF6轴作为CsA诱导肾毒性的核心驱动因素。这些发现为CsA肾毒性的分子机制提供了新的见解，并确定了预防CsA诱导肾纤维化的潜在治疗靶点。