利用RPA-CRISPR/Cas12a系统建立并应用检测中国稻田鳝鱼弹状病毒（CrERV）的方法

《Virology Journal》：Establishment and application of a detection method for chinese rice-field eels rhabdovirus (CrERV) using the RPA-CRISPR/Cas12a System

　　

摘要

中国稻田鳝鱼弹状病毒（CrERV）是一种新兴的病原体，可引起中国稻田鳝鱼（Monopterus albus）发生出血性疾病，导致疫情爆发、大量死亡以及水产养殖业遭受重大经济损失。因此，迫切需要开发快速可靠的现场检测诊断工具来解决这一问题。在本研究中，我们建立了一种基于RPA-CRISPR/Cas12a的检测方法，该方法具有优异的敏感性、特异性和稳定性。该方法的检测限可达101拷贝/μL。特异性测试证实该方法与五种其他主要水生病毒无交叉反应，包括草鱼呼肠孤病毒（GCRV-II）、鲤鱼春病毒血症病毒（SVCV）、大口黑鲈病毒（LMBV）、鲤疱疹病毒2型（CyHV-2）和白斑综合征病毒（WSSV）。重复性分析显示，该方法的内部和实验间变异系数均低于10%。通过对26份临床样本的分析，RPA-CRISPR/Cas12a方法的阳性检出率（23.08%，6/26）高于qRT-PCR方法（15.38%，4/26），这为其在CrERV检测中的诊断潜力提供了初步证据。总体而言，这些结果表明RPA-CRISPR/Cas12a平台是一种高度敏感、特异且易于使用的工具，适用于水产养殖环境中的快速CrERV监测。