新型工程因子X的合理设计：该因子包含嵌合激活肽，可作为血友病的替代治疗手段

《Journal of Thrombosis and Haemostasis》：Rational design of a novel engineered factor X with chimeric activation peptide as bypassing agent for haemophilia

　　

作者：Rebecca Tarantino、Matthew W. Bunce、Elena Tonetto、Maria Francesca Testa、Giancarlo Castaman、Francesco Bernardi、Mirko Pinotti、Rodney M. Camire、Alessio Branchini

所属机构：意大利费拉拉大学生命科学与生物技术系

摘要

背景

尽管针对A型（HA）和B型（HB）血友病的替代疗法已取得了显著进展，但中和抗体的产生仍然是一个重要问题，而合理设计能够绕过这些抗体的分子也成为亟待解决的难题。

研究目标

开发一种新型人因子X（FX）变体，该变体包含来自FIX的嵌合激活肽（AP），能够有效弥补FVIII或FIX的缺失。

方法

我们表达了这些工程改造后的变体并进行了纯化，同时通过功能实验对其激活特性进行了评估，还在含有HA和HB患者抑制剂的血浆中进行了相关测试。

结果

在筛选了大量重组变体后，选出了最具潜力的几个进行进一步的功能性分析。与野生型（FX^WT）不同，BP变体FX^BP4b和FX^BP4c在生理浓度下能够有效纠正HA和HB患者的凝血时间。显色实验表明，这两种变体仍可通过外源性tenase复合体或Russel Viper Venom（RVV）-X来激活凝血过程，但内源性激活途径受到抑制，因此它们主要依赖于剂量依赖性的FXIa激活机制。在凝血酶生成实验中，FX^BP4b-c能够恢复FX缺乏血浆中的凝血酶峰值和内源性凝血酶潜力（ETP）。值得注意的是，FX^BP4b在HA和HB患者的血浆中表现优于FX^WT，其活性与无B结构域的FVIII和FIX相当或更高。此外，FX^BP4b显著缩短了携带高滴度抗FVIII或抗FIX抗体的患者的凝血时间，其疗效水平可与现有的替代疗法相媲美。

结论

这些结果表明，FX^{BP4b是一种具有良好前景的多功能替代疗法，即使在存在抑制剂的情况下也能维持凝血过程，同时保持理想的激活特性。}