Daraxonrasib (RMC-6236) 的药代动力学：转运蛋白和药物代谢酶对一类首创泛RAS分子胶的影响

《Pharmacological Research》：Daraxonrasib (RMC-6236) pharmacokinetics: impact of transporters and drug-metabolizing enzymes on a first-in-class pan-RAS molecular glue

　　

摘要 Daraxonrasib (RMC-6236) 是一种首创的口服泛RAS（RAS）抑制剂，利用独特的分子胶机制靶向所有RAS蛋白亚型。正在进行的III期临床试验旨在治疗携带RAS突变的实体瘤，包括非小细胞肺癌（NSCLC）、胰腺导管腺癌（PDAC）和结直肠癌（CRC）。KRAS突变NSCLC在30%的患者中发生脑转移。迫切需要有效疗法，而血脑屏障（BBB）可能构成额外的治疗障碍。研究人员评估了BBB处表达的药物外排转运蛋白（ABCB1， ABCG2）、药物代谢酶（CYP3A， CES1， CES2）和药物摄取转运蛋白（OATP1A/1B）如何影响口服daraxonrasib的血浆暴露和器官处置。在体外，人类ABCB1转运daraxonrasib。在转运蛋白和酶缺陷小鼠以及CYP3A4人源化小鼠中研究了口服daraxonrasib的药代动力学。与野生型对照相比，Abcb1a/1b-和Oatp1a/1b-缺陷小鼠的daraxonrasib血浆暴露显著增加（P < 0.01），表明这些蛋白在体内转运daraxonrasib。口服联合使用ABCB1/ABCG2抑制剂elacridar验证了Abcb1a/1b介导的daraxonrasib跨BBB转运，导致野生型小鼠脑部渗透增加20倍（P < 0.01）。在CYP3A4人源化Cyp3a-/-小鼠中，daraxonrasib的血浆暴露显著降低（>3倍，P < 0.05）。Ces1和Ces2缺陷对daraxonrasib药代动力学基本无影响。因此，ABCB1外排转运蛋白、OATP1A/1B摄取转运蛋白和人类CYP3A4是daraxonrasib药代动力学的重要决定因素。ABCB1功能可能限制daraxonrasib的脑部渗透，并可能限制其对脑转移的疗效。总之，这些临床前发现可能有助于优化daraxonrasib在临床环境中的应用。

一、 研究背景、问题与研究目的

RAS突变是人类癌症中最常见的遗传改变之一，存在于约20%的肿瘤中。致癌性RAS突变持续激活其主要下游信号通路PI3K/AKT/mTOR和RAF/MEK/ERK，导致细胞不受控制地分裂和癌症进展。目前，仅KRAS^G12C(OFF)抑制剂sotorasib和adagrasib获得了FDA批准，这使得大量携带其他RAS突变的患者缺乏靶向治疗策略。对于发生脑转移的KRAS突变非小细胞肺癌（NSCLC）患者（占所有患者的30%），血脑屏障（BBB）构成了额外的治疗障碍，它可以将药物泵出大脑，因此对有效治疗的需求尤为迫切。

近年来，出现了一类全新的RAS抑制剂，其利用独特的分子胶作用机制，旨在用一种化合物靶向多种致癌性RAS变异。Daraxonrasib (RMC-6236) 是此类药物中首个进入临床的口服泛RAS抑制剂，目前正在进行III期临床试验。其作为分子胶的作用机制涉及与亲环蛋白A (Cyclophilin A, CypA) 和RAS通过非共价相互作用组装成三重复合物，从而破坏RAS下游致癌通路的激活。尽管临床前和初步临床数据显示了其良好的抗肿瘤活性，但其对野生型RAS亚型的抑制引发了关于潜在靶点毒性的担忧，且长期使用可能导致耐药。药物代谢酶和转运蛋白是决定药物体内过程（吸收、分布、代谢、排泄，即ADME）的关键因素，可显著影响药物的血浆暴露、组织分布、疗效和毒性。然而，在本文研究之前，尚无公开数据阐明药物转运蛋白或代谢酶是否影响daraxonrasib的药代动力学特性。

为了填补这一知识空白，本研究旨在系统评估BBB关键外排转运蛋白（ABCB1/P-gp， ABCG2/BCRP）、主要摄取转运蛋白（OATP1A/1B）以及药物代谢酶（CYP3A， CES1， CES2）对口服daraxonrasib血浆暴露和器官处置的影响。这项研究对于预测潜在的临床药物相互作用（DDI）、个体间药代动力学差异，以及评估和克服其治疗脑转移的可能障碍，具有重要的理论和实践意义。本研究发表于《Pharmacological Research》。

二、 主要研究方法概述

本研究综合运用了体外和体内实验模型。首先，利用过表达人源hABCB1、hABCG2或鼠源mAbcg2的Madin-Darby犬肾细胞（MDCK-II）及其亲本细胞进行了跨上皮药物转运实验，评估daraxonrasib是否为这些外排转运蛋白的底物。体内研究则在多种基因工程小鼠模型中进行，包括Abcb1a/1b、Abcg2、Oatp1a/1b、Ces1、Ces2单敲或双敲除小鼠，以及Cyp3a敲除和CYP3A4人源化（Cyp3aXAV）小鼠。所有小鼠（性别根据实验可用性选择，年龄8-16周）经口服给予单次25 mg/kg剂量的daraxonrasib，并在不同时间点（主要为3或4小时，部分实验为8小时）采集血样和组织样本（脑、肝、小肠、小肠内容物等）。通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量分析样品中daraxonrasib的浓度。药代动力学参数如血药浓度-时间曲线下面积（AUC）、达峰浓度（C_max）等通过计算获得。此外，还进行了一项“增效”研究，即在野生型小鼠口服daraxonrasib前2小时，给予ABCB1/ABCG2双重抑制剂elacridar（50 mg/kg），以验证抑制转运蛋白对脑渗透的增强作用。数据统计分析采用非参数Wilcoxon秩和检验。

三、 研究结果与发现

3.1. Daraxonrasib在体外被ABCB1转运

体外转运实验表明，在表达hABCB1的MDCK-II细胞中，daraxonrasib表现出明显的从基底侧到顶侧的定向转运（efflux ratio r = 5.50），该转运可被ABCB1抑制剂zosuquidar完全抑制。而在hABCG2或mAbcg2过表达的细胞中，未观察到主动转运现象。这证实daraxonrasib是人ABCB1的转运底物，而非hABCG2或mAbcg2的底物。

3.2. BBB的ABC外排转运蛋白限制daraxonrasib的脑部渗透

在Abcb1a/1b;Abcg2双敲除（^-/-）小鼠中，口服daraxonrasib后，其血浆暴露（AUC_0-3h）较野生型小鼠显著增加1.5倍。更重要的是，双敲除小鼠脑组织中的绝对药物浓度和脑-血浆比分别增加了10.1倍和5.3倍。这表明Abcb1和/或Abcg2显著限制了daraxonrasib的脑部暴露。

3.3. 主要是Abcb1a/1b限制了daraxonrasib的血浆和脑部暴露

为进一步区分Abcb1a/1b和Abcg2的贡献，研究人员比较了单敲除模型。结果显示，Abcb1a/1b^-/-小鼠的血浆AUC_0-4h和脑-血浆比分别增加了3.2倍和26.9倍，与双敲除小鼠效果相当。而Abcg2^-/-小鼠仅显示轻微的脑-血浆比增加（2.5倍）。这表明限制daraxonrasib血浆暴露和脑渗透的主要是Abcb1a/1b转运蛋白。

3.4. ABCB1/ABCG2抑制剂Elacridar可增加daraxonrasib的脑部渗透

在野生型小鼠中，提前口服elacridar可使daraxonrasib的血浆暴露增加2.0倍，脑-血浆比大幅提升19.6倍，达到了与Abcb1a/1b;Abcg2^-/-小鼠相似的水平。这验证了药理学抑制ABCB1/ABCG2可以有效克服转运蛋白介导的脑渗透限制。

3.5. Oatp1a/1b转运蛋白的缺失会增加daraxonrasib的系统暴露并减少肝脏摄取

Oatp1a/1b^-/-小鼠的血浆AUC_0-3h较野生型增加了2.1倍，而肝-血浆比和肠-血浆比分别降低了2.5倍和2.3倍。同时，小肠内容物中残留的药物比例增加。这些结果提示Oatp1a/1b参与了daraxonrasib的肝脏摄取（影响其清除）和可能的肠道摄取，其功能缺失导致肝脏清除率下降，是系统性暴露升高的主要原因。

3.6. 人CYP3A4限制daraxonrasib的血浆暴露

在表达人CYP3A4的Cyp3aXAV人源化小鼠中，daraxonrasib的血浆AUC_0-8h相较于Cyp3a^-/-小鼠显著降低了3.2倍。而小鼠Cyp3a缺失本身对血浆暴露无显著影响。这表明人CYP3A4能够有效代谢daraxonrasib，从而限制其系统暴露。

3.7. Ces1和Ces2对daraxonrasib药代动力学的影响极小

Ces1^-/-或Ces2^-/-小鼠与野生型小鼠相比，daraxonrasib的血浆暴露均无显著差异。仅在Ces1^-/-小鼠中观察到肝-血浆比有轻微升高。这表明羧酸酯酶Ces1和Ces2在daraxonrasib的代谢和处置中作用有限。

四、 讨论与结论总结

本研究首次系统地阐明了多种关键药物处置蛋白对新型泛RAS抑制剂daraxonrasib药代动力学的影响。主要结论如下：

Daraxonrasib是一种良好的ABCB1转运底物，其功能显著降低了daraxonrasib的血浆暴露并严重限制了其脑部渗透，这可能会削弱该药治疗脑转移的疗效。通过共同服用ABCB1/ABCG2抑制剂elacridar，可以在小鼠模型中有效提升其脑部药物浓度，这为未来探索临床增效策略提供了临床前依据。同时，daraxonrasib似乎是Oatp1a/1b摄取转运蛋白的底物，其功能影响药物的肝脏清除和可能的肠道吸收。此外，人CYP3A4（而非小鼠同源酶）能够代谢daraxonrasib，从而限制其系统暴露。羧酸酯酶Ces1和Ces2对daraxonrasib的药代动力学影响可忽略不计。

这些发现具有重要的临床启示。首先，ABCB1介导的脑渗透限制提示，在治疗RAS突变脑转移瘤时，可能需要考虑联合使用转运蛋白抑制剂或调整给药策略。其次，作为OATP1B和CYP3A4的潜在底物，daraxonrasib的临床药代动力学可能受到合并用药（导致DDI）以及OATP1B1、CYP3A4/5基因多态性的显著影响，从而导致个体间暴露量差异和毒性风险。因此，在临床应用中需密切关注这些因素，并对可能的DDI和药物基因组学进行深入评估，以实现daraxonrasib的个性化用药，在提高疗效的同时最小化不良反应。本研究为优化这一前景广阔的新型抗癌药物的临床应用提供了重要的药代动力学理论基础。