地西泮预处理对大鼠缺血-再灌注性急性肾损伤的影响 Piotr Wichary, Wojciech Wystrychowski, Miros?aw ?nietura, Szymon Bia?ka, Hanna Misio?ek, Antoni Wystrychowski, Grzegorz Wystrychowski

《Kidney and Dialysis》：Effect of Diazepam Premedication on Acute Kidney Injury Due to Ischemia-Reperfusion in Rats Piotr Wichary, Wojciech Wystrychowski, Miros?aw ?nietura, Szymon Bia?ka, Hanna Misio?ek, Antoni Wystrychowski and Grzegorz Wystrychowski

　　**摘要**
**背景**：缺血-再灌注损伤（IRI）会损害肾脏移植效果。地西泮可通过外周苯二氮卓受体减轻IRI的影响。本研究旨在评估地西泮预处理对大鼠肾脏IRI的影响。
**方法**：单侧肾切除术后14天，雄性Sprague-Dawley大鼠接受了45分钟的单一肾脏缺血处理。在缺血前60分钟，动物被随机分配为接受0.75毫克地西泮皮下注射组（n = 28）或0.5毫升0.9%氯化钠注射组（n = 31）。
**结果**：48小时后，地西泮注射组的血清肌酐水平较低，肌酐清除率较高（分别为119.8 ± 73.3 μmol/L vs 217.5 ± 105.3 μmol/L，p < 0.01；0.14 ± 0.07 mL/min/100 g BM vs 0.08 ± 0.05 mL/min/100 g BM，p < 0.01）。此外，地西泮组尿液中的钠和钾丢失量也较少（分别为1.24 ± 1.39% vs 2.87 ± 3.66%，p = 0.02；111.1 ± 95.7% vs 199.0 ± 143.3%，p < 0.01）。7天后，地西泮组在血清肌酐（53.7 ± 12.7 μmol/L vs 77.6 ± 21.3 μmol/L，p < 0.01）、肌酐清除率（0.22 ± 0.08 mL/min/100 g BM vs 0.17 ± 0.06 mL/min/100 g BM，p < 0.01）、钾保留（50.2 ± 31.7% vs 73.4 ± 38.7%，p < 0.01）以及肾水肿（1.92 ± 0.45 g vs 2.30 ± 0.61 g of kidney mass，p < 0.01）方面仍优于对照组）。此外，地西泮组24小时蛋白尿也有所减少（4.03 ± 2.62 mg vs 5.06 ± 2.74 mg，p = 0.06）。
**结论**：在肾脏缺血前给予地西泮可以减轻随后的大鼠肾脏损伤。苯二氮卓类药物可能对肾脏移植有益。

**1. 引言**
导致移植肾脏功能恢复延迟的因素之一是缺血-再灌注损伤（IRI）。IRI表现为器官血流暂时中断，随后血流恢复。临床情况下，这种情况可能发生在动脉低血压、低血容量或动脉夹闭解除时，或器官移植过程中。需要注意的是，在此过程中可能发生细胞死亡和不可逆的组织损伤。缺血与组织水肿或坏死相关，因此并非所有器官部位都能完全恢复血流。相反，再灌注和随后的组织重新氧合会通过产生活性氧自由基加剧缺血损伤[1]。此外，缺血-再灌注还被证明会因中性粒细胞激活因子的释放而损害远处器官[2]。
目前认为，肾脏缺血-再灌注损伤（IRI）是一个多因素过程，涉及线粒体功能障碍、氧化应激、炎症信号传导和补体激活。再灌注期间，线粒体电子传递链受损和琥珀酸积累会引发活性氧物种（ROS）的爆发，包括超氧阴离子、羟基自由基和过氧化氢。此外，Na+/K+-ATP酶、Na+/H+-ATP酶和Ca2+-ATP酶泵的功能也受影响[3,4]。受损细胞释放损伤相关分子模式（DAMPs），激活替代补体途径，形成膜攻击复合物（C5b9）并释放过敏毒素C3a和C5a，从而招募白细胞并加重肾小管损伤。氧化应激还可通过C3a/C3aR和C5a/C5aR触发补体激活，进一步损害线粒体功能[5,6]。IRI早期的炎症反应表现为促炎细胞因子（如TNF-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6）上调，这些细胞因子会增强粘附分子表达并招募中性粒细胞和单核细胞[4]。实验模型还表明，白细胞介素-17族细胞因子在肾脏IRI期间会放大炎症反应[7]。氧化应激、补体激活和细胞因子引发的炎症之间的复杂相互作用是肾脏IRI发病机制的基础，也为寻找针对性治疗策略提供了方向。

**2. 材料与方法**
实验采用约四周大的雄性Sprague-Dawley大鼠，来自波兰卡托维兹西里西亚医科大学的实验医学中心。所有大鼠在温度控制的环境（23°C）中自由进食标准实验室饲料和水，光照周期为12小时/天。

**2.1. IRI诱导的急性肾功能不全（AKI）模型**
大鼠首先接受单侧右侧肾切除术，14天后对剩余的左肾进行45分钟缺血处理。两种手术均通过腹部切口在吸入麻醉下进行。动物用开放滴注法产生的乙醚蒸汽麻醉。大鼠失去意识和肌肉张力后，立即将其从容器中取出并放置在外科手术台上。手术包括在腹部切口处做一个1厘米长的小切口并分离肾蒂。在肾切除术中，肾蒂被结扎并切除。整个过程耗时1-2分钟。缺血是通过在肾动脉上放置血管夹实现的，压缩强度根据血管口径调整（Aesculap AG，德国图特林根）。从皮肤切口开始，这一阶段持续约5分钟。缺血诱导后，用金属夹暂时封闭腹部切口45分钟，期间动物保持麻醉状态。随后在短暂麻醉下通过移除血管夹和缝合皮肤完成缺血恢复过程。伤口在几天内愈合，无炎症或感染并发症。

**2.2. 实验干预**
地西泮在大鼠实验中的剂量为0.5–10毫克/千克体重。低剂量具有抗焦虑作用，高剂量则具有镇静作用[25]。本研究中有约50%的动物随机接受0.75毫克地西泮皮下注射（Polfa Warszawa，华沙，波兰），相当于2.40 ± 0.23毫克/千克体重。注射在缺血前60分钟进行。对照组同时接受0.5毫升0.9%氯化钠溶液注射。两组大鼠同时进行实验，以比较治疗效果（即使对照组存活情况可能较差，但实际未发生）。一名操作员负责注射，另一名操作员负责缺血-再灌注过程，且不知道动物是否接受了预处理。未观察到任何不良事件。人类实验中的终止标准包括体重下降20%、伤口感染和嗜睡，但这些情况在所有实验动物中均未出现。

**2.3. 结果指标**
缺血-再灌注损伤的严重程度通过在缺血后第二天和第七天检测肾脏功能的生化指标来评估。缺血后第二天测定以下指标：大鼠体重、每日尿量、血清和尿液中的肌酐、钠和钾浓度以及尿液蛋白质浓度。还估算了内源性肌酐清除率、尿液中蛋白质与肌酐的比值以及钠和钾的排泄分数。缺血后第七天再次检测这些指标，并在动物安乐死后测量切除的肾脏重量。切除的肾脏用福尔马林保存用于组织学检查。采血前，大鼠在代谢笼中禁食24小时并持续收集尿液。血清肌酐水平使用分光光度计（PZ Cormay S.A.，波兰洛米安基）测定；血浆和尿液电解质浓度使用火焰光度计（Eppendorf，德国汉堡）测定；尿液肌酐浓度使用比色法（Carl Zeiss，德国耶拿）测定；尿液蛋白质浓度使用三氯乙酸沉淀法测定。使用苏木精-伊红（HE）、过碘酸-希夫（PAS）和琼斯（Jones）染色法比较地西泮组和盐水组的肾脏组织中的缺血-再灌注损伤后遗症。组织学图像分析借助人工智能（ChatGPT-5.2）辅助完成。所有测量和组织学制备工作均在不了解样本分组的情况下进行。

**2.4. 统计分析**
两组数据之间的统计比较采用t检验或Mann–Whitney U检验（针对非正态分布的数据集）。使用Shapiro–Wilk W检验评估变量分布的正态性。计算使用Statistica 14.0.1.25（TIBCO Software Inc.）。结果解读阶段才确定样本分组。ChatGPT用于组织学分析的指令未包含实验细节或组别信息，仅要求比较大鼠肾脏组织的组织学图像。

**3. 结果**
28只大鼠在缺血前接受了0.75毫克地西泮处理，31只大鼠接受盐水处理，作为对照组。

**3.1. IRI后48小时的肾脏功能**
缺血后48小时，接受地西泮的大鼠肾小球和肾小管功能得到更好保护。与接受盐水注射的对照组相比，血清肌酐浓度降低45%，肌酐清除率提高86%，尿液中的钠和钾丢失量分别减少57%和44%。令人惊讶的是，接受地西泮治疗的动物蛋白质尿的程度升高更为显著，达到了对照组最高水平的大约150%（具体均值见表1，原始数据见图2）。表1. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后48小时的肾功能参数，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮或0.9% NaCl的处理。图2. 肾功能参数的原始数据：(a) 24小时尿量，(b) 血清肌酐浓度，(c) 肌酐清除率，(d) 24小时蛋白质尿，(e) 尿蛋白/肌酐比值，(f) 钠的分数排泄率，(g) 钾的分数排泄率，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理。3.2. IRI后7天的肾功能在经历了一段时间的肾脏血管收缩和再灌注后，两个研究组的肾功能均有明显改善。然而，地西泮处理组在血清肌酐（降低31%）、肌酐清除率（提高31%）和钾保留（排泄减少31%）方面优于对照组。此外，与对照组相比，实验组动物的肾质量减少了16%。同时，蛋白质尿也减少了20%，接近统计学显著性（具体均值见表2，原始数据见图3）。表2. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后7小时的肾功能参数，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理。3.3. IRI后7天的肾脏组织学在缺血-再灌注发生7天后，对地西泮处理组的肾脏皮质标本进行显微镜分析，发现损伤明显减轻。与对照组动物相比，未观察到显著的肾小管细胞扁平化或刷状缘丧失。此外，近端肾小管扩张程度较小，间质炎症浸润也很轻微。总体而言，地西泮组的肾小管-间质炎症过程较轻且不活跃。此外，对照组中可见的轻微肾小球炎症在地西泮处理组中不存在。相反，地西泮处理组的肾小球内可见更多的碎片。地西泮组的相应损伤评分显著低于对照组（见表3）。图4. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后7天的肾脏皮质，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理，放大250倍和500倍；HE染色：肾小管细胞高度和刷状缘（黄色箭头），肾小管腔宽度和碎片（蓝色箭头），间质炎症浸润（红色箭头）。图5. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后7天的肾脏皮质，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理，放大250倍和500倍；PAS染色：肾小管细胞高度和刷状缘（黄色箭头），肾小管腔宽度和碎片（蓝色箭头），间质炎症浸润（红色箭头），Bowman’s空间（绿色箭头）。图6. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后7天的肾脏皮质，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理，放大250倍和500倍；Jones染色：肾小管细胞高度和刷状缘（黄色箭头），肾小管腔宽度和碎片（蓝色箭头），间质炎症浸润（红色箭头），Bowman’s空间（绿色箭头）。表3. 在大鼠单侧肾脏发生缺血-再灌注损伤（IRI）后7天的肾脏组织学比较分析，这些大鼠在IRI前60分钟接受了0.75毫克地西泮（Diazepam）或0.9% NaCl（Control）的处理（ChatGPT支持）。4. 讨论4.1. 地西泮的效果研究结果表明，在引发肾脏缺血-再灌注损伤之前给予地西泮可以减轻急性肾损伤的后续发展。这表现为肾小球滤过率的提高和肾小管电解质保护的维持，以及IRI后一周内多尿和肾脏水肿的减少。相反，IRI早期地西泮似乎增强了肾脏蛋白丢失，而在后期则有所减少。与这些结果一致，IRI后7天的肾脏组织学在两组之间存在显著差异。地西泮预处理组的肾小管损伤较轻，间质炎症显著减少，并且免于轻度肾小球炎。IRI后48小时的肾脏参数表明存在严重的急性肾损伤，特别是尿液钾丢失增加，超过了其肾小球滤过率，表明有严重的肾小管坏死。我们还观察到肾功能随时间显著改善，这验证了Basile等人的研究结果，他们证明了大鼠短暂肾缺血后第七天肾功能可以恢复。然而，从肾缺血第16周开始，这些作者观察到尿液浓缩能力永久性受损，肾间质纤维化以及显著的蛋白质尿。此外，观察到肾微血管减少，尤其是在肾髓质的外层[26]。这些变化可能导致慢性肾功能衰竭，在临床环境中，这一过程可能特别影响移植肾脏的存活率。我们的实验模型中，IRI后一周地西泮处理组肾功能持续改善且蛋白质尿减少，表明地西泮预处理具有长期的肾保护作用。地西泮处理组初始显著增加的蛋白质尿的精确原因尚待阐明。这种异常可能归因于过度肾小管蛋白质分泌，El-Achkar等人[27]发现肾IRI时uromodulin的高表达和有益作用支持了这一点。相反，在IRI的后续阶段，地西泮处理组的Bowman囊中充满了无细胞蛋白物质，这种物质可观察到直到近端肾小管腔，但主要从远端肾小管重新吸收。然而，此阶段蛋白质尿的减少表明观察到的肾小球渗出物可能是坏死物质，而不是蛋白质泄漏。显然，需要进一步研究来探讨这一问题。4.2. 地西泮的作用机制地西泮在IRI背景下的显著肾保护作用表明，其机制不仅限于其对中枢神经系统的抗焦虑/减压作用。地西泮的肾保护作用主要可能通过其与线粒体18 kDa转运蛋白（TSPO）的相互作用实现，该蛋白也被称为外周苯二氮卓受体。这种蛋白在外层线粒体膜中形成200–240 kDa的蛋白质复合物，即线粒体通透性转位孔或线粒体巨通道。在类固醇生成增加的组织中，这种蛋白的表达水平较高。在健康的肾脏中，这种蛋白的表达水平较低，主要存在于Henle环升支厚壁的上皮和集合管中[28]。TSPO在多种疾病中表达增加，包括癌症、脑损伤、神经退行性变和缺血-再灌注过程[29,30]。在肾IRI背景下，TSPO在近端肾小管、Bowman囊、受损血管的内皮和浸润的巨噬细胞中表达[29,31,32]。4.3. TSPO及其配体在IRI中的作用IRI期间的细胞损伤除了其他病理机制外，还可能由于再灌注期间胆固醇通过TSPO不受控制地流入线粒体。在缺血期间，线粒体基质和膜内的胆固醇水平下降。再灌注期间线粒体内膜的胆固醇水平升高，促进其自氧化成有毒的氧化甾醇，从而导致线粒体巨通道开放[33]。TSPO配体已被证明可以调节免疫细胞功能，要么增强要么减弱[28,34,35,36]，同时抑制自由基的生成[37]。在急性心肌缺血的大鼠模型中，IRI前给予TSPO配体4′氯地西泮可以阻断心肌内的胆固醇转运，从而在再灌注期间防止线粒体损伤[33,38]。这表明4′氯地西泮具有心肌保护作用，减少了心肌细胞损伤并改善了缺血后的心肌收缩功能[39]。关于TSPO配体在肾IRI模型中的研究结果并不一致。IRI后兔肾中观察到TSPO mRNA表达水平升高，这与局部类固醇生成增加相关[40]。还有研究表明，TSPO表达的增加在猪肾自体移植模型中对肾具有保护作用，通过改善线粒体完整性来发挥作用。此外，TSPO在人和猪肾中的相同定位表明这些发现可适用于临床情况[41]。相反，Kunduzova等人在大鼠肾IRI模型中使用不可逆的TSPO拮抗剂（SSR180575）实现了肾保护作用。这种化合物在肾缺血前给予后，减少了再灌注后的氧化应激和细胞凋亡，并加速了肾功能的恢复[42]。4.4. 地西泮与IRI地西泮已被证明是一种TSPO激动剂，可诱导线粒体巨通道的开放[43]。根据我们在肾IRI模型中的观察，其他研究的结果表明地西泮及其类似物在心脏和脑的IRI中具有保护作用[44,45,46]。Jiang等人观察到，在大鼠心肌缺血前14天给予地西泮（2.5 mg/kg和5 mg/kg BM）有积极效果。地西泮表现出心脏保护和抗炎作用，表现为心肌肌钙蛋白I、C-C趋化因子受体类型2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素IL-1β和IL-6以及Bax和caspase-3的表达减少。这导致心肌细胞凋亡减少[44]。此外，在大鼠脑IRI的研究中，地西泮（10 mg/kg BM）通过多种复杂机制调节兴奋性/抑制性氨基酸（如谷氨酸、天冬氨酸、MDA、GABA）和自由基的合成和释放，从而对神经元具有保护作用[45]。一种新型地西泮衍生物PJM-20在脑IRI后1小时以4或8 mg/kg BM的剂量口服给大鼠，显著减少了神经缺陷、水肿形成和总梗死面积。其保护作用可能是通过防止线粒体内Ca2+积累和降低脑脊液中的谷氨酸和天冬氨酸浓度来实现的。即使在血流恢复后8小时给药，也观察到了这种神经保护作用[46]。我们的文献搜索未发现关于地西泮在IRI中的任何临床干预研究。4.5. 地西泮与炎症文献报道关于地西泮对免疫细胞迁移和吞噬作用的影响存在冲突[47,48,49,50,51,52]。Covelli等人证明地西泮抑制了人类多核细胞和单核细胞吞噬和杀死病原体的能力，且这种效应与剂量相关[47]。其他研究表明，地西泮和外周苯二氮卓受体的配体都抑制了人类中性粒细胞的趋化性及其超氧化物的产生[50]。在鸡中口服地西泮4天后，还观察到腹腔巨噬细胞的吞噬作用减少[48]。在埃利希肿瘤的小鼠模型中，连续一周给予地西泮（剂量不低于3 mg/kg）导致肿瘤体积增大。同时，这种治疗还减少了巨噬细胞向肿瘤的浸润，并降低了它们合成一氧化氮的能力[52]。Marino等人在对健康献血者募集的中性粒细胞的研究中得到了相互矛盾的结果。他们表明，地西泮通过激活外周苯二氮卓受体来刺激这些细胞的迁移和吞噬作用。吞噬作用的诱导归因于细胞质钙浓度的增加[49]。有趣的是，其他研究人员已经发现，急性使用地西泮可以增加大鼠中性粒细胞的吞噬能力，但长期使用则会降低这种能力[53]。最近的一项研究表明，地西泮可以通过上调let-7a-5p微RNA来抑制肺纤维化小鼠模型中的LPS诱导的焦亡和随后的炎症[54]。

关于地西泮对肾脏的可能影响，目前尚未有全面的研究。值得注意的是，Zhang等人最近报告了一项回顾性横断面分析，发现使用地西泮与住院儿童急性肾损伤的风险之间存在关联。然而，这一发现没有考虑地西泮的剂量，并且仅将临床背景的调整限制在合并症上。此外，所发现的关联主要与良性（I期）AKI相关，这降低了其临床意义[55]。Setiawan等人在大鼠中进行的研究也表明地西泮对肾脏有负面影响。不过，地西泮的剂量非常大（口服62.25–124.5 mg/kg）且持续时间很长（每天28天），因此这项研究更多关注的是毒理学和慢性肾病（CKD），而非急性肾损伤（AKI）。此外，除了有限的肾脏组织学评分外，结论主要是基于地西泮给药后尿液中肌酐和尿素浓度的升高，而没有进行血液中的这些指标测量[56]。

我们的模型采用单侧肾脏短暂缺血（IRI）并在两周前进行对侧肾切除术，通过两个简短且微创的程序来创建急性肾损伤（AKI）的环境，从而保证了动物的良好存活率。两次手术之间的时间间隔使动物能够适应剩余肾脏的减少量组织，并减少了术后剩余肾脏血流增加的已知偏差[57]。相对较大的样本量（总共59只动物）基于我们之前使用其他化合物进行AKI模型的研究，以及预期地西泮的轻微效果。由于地西泮的作用机制尚不清楚且有多种结局指标，因此未采用统计估计方法。大鼠肾脏45分钟的缺血时间构成了一种中度AKI的模型。与≥60分钟的缺血相比，动物的存活率得以保持，并且在再灌注后肾组织功能逐渐显著恢复[58,59]。其他研究小组也使用了同样的45分钟单侧肾脏缺血时间[60,61,62]。研究中使用的地西泮中等剂量具有抗焦虑效果，这更符合研究的概念（缓解压力），也符合当前临床中地西泮在移植期间的使用情况（通常作为术前镇静剂）。此外，较高的剂量由于与麻醉的协同作用，会增加呼吸抑制的风险。

在本次实验和之前的实验中，我们使用开放式滴注法生成的乙醚蒸气进行围手术期麻醉。我们的经验表明，这种经典麻醉方法的动物存活率优于腹腔内注射氯胺酮+赛拉嗪的组合，其他研究也支持这一点[63]。值得注意的是，本研究的实验阶段是在乙醚使用较为普遍的时期设计并实施的。当时美国兽医协会2007年发布的建议允许在必要时谨慎使用乙醚[64]。此外，与反对使用乙醚的主要观点相反，我们没有观察到动物出现明显的呼吸道刺激症状。无论采用何种麻醉方法，都不能完全排除麻醉对研究过程的不利影响。然而，与甲氧氟烷或七氟烷不同，乙醚并未被报道会直接影响肾功能[65,66]。此外，它与苯二氮卓类的相互作用主要影响中枢神经系统，增加呼吸抑制的风险，这与其他吸入性麻醉剂相似[67]。值得注意的是，乙醚不会影响大鼠肝脏细胞色素p450的活性，而该酶参与了地西泮的代谢[68]。

我们研究的优点包括：地西泮具有新的肾保护作用，基于较大数量的研究对象，以及如果这一作用在人类中得到证实，可能具有重要的临床意义。本研究发现表明，地西泮在可预测的肾脏损伤临床情况下具有一定的作用。这表明肾脏移植或大型手术是最适合未来临床研究和应用的场景。测试地西泮在肾脏移植供体或受体中的预用药是否有益将是有趣的。需要进一步的研究来确定地西泮的肾保护效果是否取决于剂量或其给予时间与损伤诱导的时间关系。我们的方法将地西泮的临床益处假设限制在抗焦虑剂量范围内，即1–5 mg，具体取决于患者的年龄、体重和临床状况。然而，可以推断出更高剂量可能并不更有益，反而可能有害。地西泮具有轻微的全身血管扩张作用，导致血压轻微下降[69]，在高剂量下可能会对肾脏移植的灌注产生临床影响。

该研究仅涉及雄性大鼠，这与大多数使用大鼠模型的肾脏损伤研究一致。只有少数早期研究同时包括雌雄大鼠，并发现雌性大鼠的肾脏对缺血-再灌注损伤的敏感性低于雄性大鼠，这可能是由于雌性性激素的作用[70]，可能减缓了交感神经系统的激活[71]。因此，要检测雌性大鼠中的干预效果需要更多的研究动物数量，而在这样的初步研究中，这从生物伦理和预算角度都是有问题的。遗憾的是，本研究缺乏对所观察到的临床和组织学效应的病理生理机制的深入了解。然而，结果表明，地西泮的肾保护作用既发生在肾小球水平（例如，维持滤过功能、无炎症浸润和长期减少蛋白尿），也发生在肾小管间质水平（例如，减少炎症浸润、肾小管再生、节省水分和电解质、减轻肾脏水肿）。鉴于在地西泮损伤的肾脏组织中TSPO广泛表达[29,31,32]，药物与TSPO的相互作用似乎是一个合理的机制。由于地西泮增强了线粒体功能和细胞能量平衡，肾脏组织能够在缺血期间保持更大的结构和功能完整性，并在再灌注期间更好地应对氧化应激。此外，研究炎症反应的多个方面（如补体激活或氧化应激）可能会显示出地西泮的缓解作用。然而，要确定哪些途径受到更多或更少的影响，需要范围广泛而全面的调查，这超出了初步研究的范围。

尽管存在一些局限性，例如我们无法分析系统或肾脏的血流动力学，但我们认为大量测试动物减少了因假定的肾脏缺血和再灌注变异而导致显著偏差的可能性。鉴于地西泮的益处，地西泮处理过的动物不太可能出现明显的血压下降。

总之，本研究表明，在肾脏缺血前给予抗焦虑剂剂量的地西泮可以减轻随后的缺血-再灌注损伤。肾小管间质的炎症和退行性形态变化得到缓解，肾小球炎症也被预防。这表现为早期阶段肾小球滤过率几乎翻倍，管状电解质流失减少一半，而在损伤后阶段改善约1/3。这些改善与蛋白尿和肾脏水肿减少15–20%的结果一致。在预期发生肾脏缺血的情况下，如肾脏移植时，使用苯二氮卓类进行预用药可能是有益的。这一领域需要进一步的实验和临床研究。