CYP3A5基因多态性影响他克莫司及其代谢物在小鼠体内的分布情况，这些小鼠体内引入了CYP3A5基因

《Drug Metabolism and Disposition》：CYP3A5 polymorphism affects the disposition of tacrolimus and its metabolite in systemic circulation and peripheral tissues of mice introduced with the CYP3A5 gene

　　Genki Minegishi | Yuna Hiramatsu | Manami Sugahara | Satoshi Abe | Kanako Kazuki | Atsushi Miyajima | Yasuhiro Kazuki | Kaoru Kobayashi
生物制药学系，临床药学研究生院，明治制药大学，日本东京Kiyose Noshio 2-522-1，204-8588

**摘要**
CYP3A5*3等位基因会导致剪接缺陷，从而使得CYP3A5蛋白无法合成，这是大多数人群中普遍存在的变异类型。由于CYP3A5的多态性会影响他克莫司的药代动力学，因此需要为每位患者个性化调整剂量。尽管他克莫司的血药浓度始终处于狭窄的治疗范围内，但仍有一些患者会出现与CYP3A5多态性相关的不良反应。因此，为了理解其不良反应的机制，不仅需要考虑他克莫司在体内的整体分布，还需要考虑其在各组织中的代谢情况。本研究使用携带CYP3A5*1或CYP3A5*3的人源化小鼠模型，检测了他克莫司及其代谢物在肝脏、肾脏和肺部的分布情况。结果显示，在CYP3A5*1小鼠的肝脏、肠道、肾脏和肺部都表达了CYP3A5，并且形成了去甲基他克莫司。当这些小鼠口服3 mg/kg的他克莫司后，与CYP3A5*3小鼠相比，CYP3A5*1小鼠肝脏、肾脏和肺部的他克莫司水平较低，而去甲基他克莫司的水平较高。尤其在肾脏中，CYP3A5*1小鼠的去甲基他克莫司与他克莫司的比值更高。这些发现表明，他克莫司在表达CYP3A5的外周组织中会被代谢，从而导致这些组织中去甲基他克莫司水平的升高。综上所述，我们利用携带CYP3A5*1和CYP3A5*3的小鼠模型，揭示了CYP3A5多态性对外周组织中他克莫司及其代谢物分布的影响。

**重要声明**
通过人工染色体载体构建的CYP3A5*1小鼠在多个外周组织中表达CYP3A5。CYP3A5*1小鼠与CYP3A5*3小鼠在外周组织中对他克莫司及其代谢物的代谢存在差异。这一模型有助于揭示CYP3A5在外周组织中的药物代谢机制。

**1. 引言**
细胞色素P450 3A（CYP3A）是药物代谢中的关键酶。CYP3A4和CYP3A5是CYP3A的两个主要亚型，两者都在肝脏和肠道中表达。CYP3A5*3（g. 6986A > G, rs776746）是研究最充分的CYP3A5基因单核苷酸多态性（SNP），也是大多数人群中的常见变异类型。这种等位基因会导致剪接缺陷，从而导致缺乏成熟的CYP3A5蛋白。尽管CYP3A5和CYP3A4具有很高的同源性，且CYP3A5的表达水平低于CYP3A4，但对于某些药物而言，在CYP3A5表达者体内，这些药物在肝脏微粒体中的代谢程度反而更高。他克莫司这种免疫抑制药物主要由CYP3A4和CYP3A5代谢。值得注意的是，CYP3A5作为他克莫司的代谢酶效率更高，约占CYP3A5表达者体内他克莫司总代谢量的60%。由于CYP3A5基因中的SNP与他克莫司的药代动力学密切相关，因此基于SNP的剂量调整至关重要。尽管调整了血药浓度，仍有很多关于他克莫司-induced肾毒性的报道。Gijsen等人（2012年）指出，关于CYP3A5 SNP与他克莫司-induced肾毒性之间关系的研究结果存在不一致性。最全面的研究表明，CYP3A5表达与肾移植后他克莫司肾毒性的风险增加有关。由于剂量调整依赖于血浆药物浓度峰值，对于CYP3A5表达者来说，可能需要更高的剂量。他克莫司-induced肾毒性伴随着组织病理学变化，表现为肾小管细胞的纤维化。已知肾近端小管细胞表达多种药物代谢酶，包括CYP3A。此外，在携带CYP3A5*1等位基因的患者来源的肾近端小管细胞中，CYP3A5代谢产生的去甲基他克莫司的积累与纤维化反应有关。尽管CYP3A5在外周组织中的代谢对全身清除率影响较小，但它可能是调节他克莫司及其代谢物在外周组织暴露的关键机制。

为了克服物种差异，改善临床前研究中CYP3A代谢的预测，研究人员开发了多种人源化小鼠模型。Uehara等人（2022年）发现，接受不同基因型供体（CYP3A5*1/*7或CYP3A5*3/*3）肝细胞移植的嵌合体小鼠中，CYP3A5介导的代谢存在差异。然而，这些模型无法反映肝外组织中的CYP3A5代谢情况。另一方面，使用哺乳动物人工染色体（MAC）载体生成的人源化小鼠是研究CYP3A底物在肝脏和肝外组织中代谢的创新模型。这些小鼠通过MAC载体引入了完整的人类CYP3A基因簇，从而能够研究CYP3A在肝脏和肠道中的代谢能力。由于人类CYP3A基因簇包含调控序列和编码区域，因此使用MAC载体生成的人源化小鼠模型预计能够准确反映CYP3A5底物在体内的系统性和外周代谢情况。本研究检测了CYP3A5*1和CYP3A5小鼠肝脏、肠道、肾脏和肺部中的CYP3A5表达水平，并比较了这两种小鼠对他克莫司及其代谢物的药代动力学，以了解CYP3A5在外周组织中对他克莫司代谢的影响。

**2. 材料与方法**
2.1. 化学试剂
他克莫司和环孢素A购自东京化学工业公司（日本东京）。三唑仑购自富士菲尔姆和光纯化学公司（日本大阪）；其代谢物1’-羟基三唑仑购自默克公司（德国达姆施塔特），4-羟基三唑仑购自Abcam公司（英国剑桥）。T-5 [ methyl 2-(4-氨基苯基)-1-oxo-7-(吡啶-2-ylmethoxy)-4-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,2-二氢异喹啉-3-羧酸]及其代谢物T-5 N-氧化物由KAC公司（日本京都）提供。用于他克莫司提取的DOSIMMUNE EXTRACTION BUFFER试剂购自岛津公司（日本京都）。本研究使用的其他试剂均来自商业供应商。
2.2. 动物
CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠的制备及特性描述详见先前文献。这些小鼠已与Cyp3a-KO ICR品系回交至少10代。所有实验均使用10至11周龄的雄性小鼠，实验动物均置于温度可控的环境中，光照周期为12小时/黑暗12小时。光照时间为早上7点至晚上7点。本研究遵循鸟取大学动物研究委员会制定的《实验室动物护理和使用指南》进行。
2.3. mRNA水平的测定
mRNA的表达水平通过CFX Connect实时系统（Bio-Rad，美国加州赫拉克勒斯）进行定量PCR检测，使用TaqMan Gene Expression Assays（Thermo Fisher Scientific）试剂盒针对CYP3A5（测定范围为外显子3-外显子4，Hs00241417_m1）、CYP3A4（Hs00604506_m1）和18S核糖体RNA（#4352930E），反应条件采用THUNDERBIRD TaqMan qPCR Mix（TOYOBO，日本大阪）。以18S核糖体RNA的mRNA表达水平作为内参进行归一化。数据以CYP3A5相对于CYP3A5*1小鼠的表达水平显示。
2.4. CYP3A底物的体外代谢
肝脏和肠道微粒体的制备方法如先前文献所述。肾脏和肺部的微粒体制备方法也是如此。基本微粒体检测方法也参照先前文献进行。每种底物的详细条件见补充表1。使用含有细胞色素b5和还原酶的人类CYP Bactosomes（Cypex，英国邓迪）作为重组CYP3A5（rCYP3A5）和CYP3A4（rCYP3A4）。通过检测T-5 N-氧化物（由CYP3A5在人肝微粒体中选择性产生的代谢物）来评估CYP3A5的活性。将T-5与CYP3A抑制剂酮康唑（1或5 μM）一起孵育。反应结束后，加入3倍体积的0.1%甲酸（含有25 ng/mL普萘洛尔作为内标）的丙腈溶液，离心（15,000 g，20 min，4°C），然后通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）系统测定T-5 N-氧化物水平。当他克莫司作为底物时，加入3倍体积的0.1%甲酸和2 mM氨水的甲醇溶液终止反应，离心（15,000 g，20 min，4°C），再过滤后通过LC-MS/MS系统测定去甲基他克莫司水平。三唑仑作为典型底物，用于检测CYP3A5和CYP3A4的代谢情况。
2.5. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠中CYP3A底物的药代动力学
CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠口服给予3 mg/kg的他克莫司。在给药后0.25、0.5、1、2、4和7小时分别采集外周血样本。给药后0.25小时采集门静脉血和外周血以研究体内的肠道代谢情况。EDTA全血样本储存在-80°C直至分析。为了提取他克莫司和去甲基他克莫司，将5 μL解冻后的血液（50°C预热1分钟）与10 μL甲醇中的IS溶液及50 μL DOSIMMUNE EXTRACTION BUFFER混合1分钟，离心（15,000 g，7 min，4°C），然后加入50 μL含有0.1%甲酸和2 mM氨水的甲醇，通过LC-MS/MS系统分析。
2.6. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠组织中他克莫司及其代谢物的分布
给药后6小时采集外周血和组织（肝脏、肠道、肾脏和肺部）样本。样本储存在-80°C直至分析。使用改进的先前方法从组织中提取他克莫司及其代谢物。具体步骤包括：称量组织，用珠子破碎器（MS-100R，日本东京）在甲醇中均质化，冰上超声处理（5分钟），随后于4°C下过夜保存。将组织液稀释至20 mg组织/mL，加入0.1倍体积的环孢素A甲醇溶液，离心（12,000 g，10 min，4°C），然后加入75 μL含有0.6%甲酸的6 mM醋酸溶液，过滤后通过LC-MS/MS系统分析。
2.7. LC-MS/MS条件
利用LCMS8050装置（岛津）和Nexera XR HPLC系统（岛津）检测微粒体反应混合物中的代谢物，以及从他克莫司处理小鼠血液中提取的化合物。使用QTRAP4500装置（SCIEX，马萨诸塞州弗雷明汉）和Prominence HPLC系统（岛津）检测从他克莫司处理小鼠血液中提取的化合物。HPLC条件参照先前文献。由于去甲基他克莫司在市场上无法购买，因此根据补足图1中显示的前体离子和产物离子的保留时间和m/z值来确定其相对面积。随后利用内标值计算去甲基他克莫司的含量。
2.8. 药代动力学参数的计算
使用Excel工作表计算rCYP3A4和rCYP3A5的Vmax、Km和Ki值。将他克莫司的活性-底物浓度曲线拟合到底物抑制方程，三唑仑的活性曲线拟合到简单的Michaelis-Menten方程。利用梯形法则计算底物及其代谢物在血液或血浆中不同时间点的浓度曲线下的面积（AUC）。AUC比值（AUCR）是小鼠体内代谢活性的标志物，其计算方法如下：将代谢产物的AUC值除以底物的AUC值。代谢产物比值的计算方法为：去甲基他克莫司的峰面积比与他克莫司的峰面积比。组织与血液（T/B）比值的计算方法为：分别将他克莫司和去甲基他克莫司在组织中的浓度除以其在血液中的浓度。

2.9 统计分析
两组之间的比较使用了Student’s t检验、Welch’s t检验和Mann-Whitney U检验。多组比较则使用了一元方差分析（ANOVA）以及随后的Scheffé’s F检验。p < 0.05被认为是统计学上显著的。这些统计分析使用了JMP（SAS Institute Inc., Cary, NC）和Statcel-4（OMS, Tokyo, Japan）软件。

3. 结果
3.1 CYP3A5*1小鼠肝脏和肠道中的CYP3A5表达与活性
CYP3A5*1小鼠肝脏、肠道、肾脏和肺部的CYP3A5 mRNA表达水平高于CYP3A5*3小鼠（图1A）。另一方面，这两种小鼠品系在肝脏和肠道中的CYP3A4 mRNA表达水平没有差异（图1B）。在肾脏和肺部，CYP3A4 mRNA的表达可以忽略不计。为了评估CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠中的CYP3A5活性，我们使用了T-5作为CYP3A5的典型底物。CYP3A5*1小鼠在肝脏（图2A）和肠道（图2B）微粒体中对T-5的N-氧化活性分别高出3倍和13倍。此外，广谱CYP3A抑制剂酮康唑显著降低了CYP3A5*1小鼠肝脏和肠道微粒体中的活性，而在CYP3A5*3小鼠的微粒体中未观察到这种效应。

图1. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠肝脏、肠道、肾脏和肺部中CYP3A4和CYP3A5的mRNA表达水平。CYP3A5（A）和CYP3A4（B）在组织中的相对mRNA表达水平。这些值以CYP3A5*1小鼠为基准进行了归一化。CYP3A5的2-ΔCq值分别为肝脏3.3×10^-5、肠道2.2×10^-5、肾脏1.2×10^-7和肺部5.0×10^-6。CYP3A4的2-ΔCq值分别为肝脏9.7×10^-5和肠道2.2×10^-4。CYP3A4在肾脏和肺部的mRNA表达水平低于检测限（未确定，N.D.）。数据以5只小鼠的平均值显示，并附带标准差。*p < 0.05，**p < 0.01，与CYP3A5*1小鼠相比。统计分析使用了Student’s t检验（对于CYP3A4）、Welch’s t检验（对于肝脏、肠道和肾脏中的CYP3A5）或Mann-Whitney U检验（对于肺部中的CYP3A5）。

图2. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠肝脏和肠道中的CYP3A5活性。T-5在加入或不加入酮康唑（1 μM和5 μM）的情况下，在混合的小鼠肝脏（A）或肠道（B）微粒体中的N-氧化活性。数据以单次实验中三次独立孵育的平均值显示。**p < 0.01，与不加酮康唑的情况相比。统计分析使用了基于Scheffé’s F检验的ANOVA。

3.2 体外他克莫司代谢
rCYP3A5生成去甲基他克莫司的速率远高于rCYP3A4（图3A）。总结了rCYP3A5和rCYP3A4生成去甲基他克莫司的Michaelis-Menten参数（表1）。rCYP3A5的表观Vmax值比rCYP3A4高5倍以上。由于rCYP3A4和rCYP3A5的Km值分别为7.8 μM和11 μM，因此使用较低浓度的他克莫司（2 μM）分别与CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠的组织微粒体孵育。含有CYP3A5*1小鼠的肠道、肾脏或肺部微粒体的反应混合物产生的去甲基他克莫司量高于CYP3A5*3小鼠；然而，在肝脏微粒体中未观察到这种差异（图3B）。

3.3 体内的他克莫司代谢
接下来，对这些小鼠进行了他克莫司的口服给药。这些小鼠血液中的他克莫司水平没有显著差异（图4A）。然而，CYP3A5*1小鼠的代谢产物水平倾向于高于CYP3A5*3小鼠（图4B）。他克莫司的AUC值没有差异，但CYP3A5*1小鼠的去甲基他克莫司的AUC值倾向于高于CYP3A5*3小鼠（表2）。此外，CYP3A5*1小鼠中去甲基他克莫司对他克莫司的AUCR显著高于CYP3A5*3小鼠（图4C）。尽管在口服给药后15分钟时，两种小鼠的门脉血液中他克莫司和去甲基他克莫司的水平没有显著差异（图4D和4E），但CYP3A5*1小鼠中的代谢产物比率倾向于高于CYP3A5*3小鼠，接近统计显著性（p = 0.054）（图4F）。

表2. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠中他克莫司和去甲基他克莫司的AUC值。
分析物 CYP3A5*1 CYP3A5*3 p值
他克莫司 641 ± 25 684 1.000
去甲基他克莫司 3.28 ± 1.3 1.50 ± 1.2 0.143
AUC值以ng/mL·hr表示（他克莫司）和相对血液水平以ng/mL·hr表示（去甲基他克莫司）。数据以4只小鼠的平均值显示。统计分析使用了Student’s t检验（对于去甲基他克莫司）或Mann-Whitney U检验（对于他克莫司）。

由于除了CYP3A5*1小鼠外，CYP3A5*3小鼠的肝脏、肠道、肾脏和肺部也能检测到CYP3A5 mRNA（图1A），我们确定了给药后6小时小鼠组织中的他克莫司和去甲基他克莫司水平（表3）。CYP3A5*1小鼠的血液和组织中的他克莫司水平低于CYP3A5*3小鼠。尽管CYP3A5*1小鼠中的T/B比率倾向于高于CYP3A5*3小鼠，但仅在肺部差异达到统计显著性（图5A-C）。在肝脏、肾脏或肺部，去甲基他克莫司水平或T/B比率没有显著差异，不过CYP3A5*1小鼠的数值确实高于CYP3A5*3小鼠（表3；图5D-F）。此外，血液（图6A）、肝脏（图6B）、肾脏（图6C）和肺部（图6D）中的代谢产物比率在CYP3A5*1小鼠中也显著高于CYP3A5*3小鼠。

图5. CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠中他克莫司及其代谢产物的组织与血液（T/B）比率。在口服给药后6小时（3 mg/kg），收集了血液和组织样本。数据以5只CYP3A5*1小鼠或4只CYP3A5*3小鼠的平均值显示。*p < 0.05，与CYP3A5*1小鼠相比。统计分析使用了Student’s t检验（对于血液和肝脏中的他克莫司）、Welch’s t检验（对于肾脏和肺部中的他克莫司）或Mann-Whitney U检验（对于肾脏和肺部中的去甲基他克莫司）。

3.4 体外和体内的三唑仑代谢
为了确认CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠体内的总CYP3A活性，研究了三唑仑的CYP3A介导的代谢。rCYP3A5和rCYP3A4代谢三唑仑的Vmax值差异小于2倍，这一差异小于他克莫司代谢的差异（补充图2，补充表3）。当三唑仑口服给予CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠时，两种小鼠的血浆中三唑仑及其羟基代谢物的水平没有显著差异（补充图3A-3C，补充表4）。此外，CYP3A5*1和CYP3A5*3小鼠中1’-羟基三唑仑和4-羟基三唑仑对三唑仑的AUCR值也没有显著差异（补充图3D和3E）。

4. 讨论
本研究显示，CYP3A5*1小鼠的肝脏和肠道中的CYP3A5 mRNA水平高于CYP3A5*3小鼠（图1A），这与它们微粒体中的蛋白质表达水平一致。除了这些主要参与药物代谢的组织外，本研究还表明CYP3A5*1小鼠的肾脏和肺部中的CYP3A5 mRNA水平也高于CYP3A5*3小鼠（图1A）。这些结果与CYP3A5在人体多种组织中广泛分布的发现一致。Yamasaki等人（2018）报告称，在使用MAC载体引入人类MDR1基因的P-糖蛋白人源化小鼠中，MDR1 mRNA在多种组织中表达。这项研究表明，使用携带整个基因及其调控区域的MAC载体生成的人源化小鼠模型能够模拟人类基因的生理表达谱。因此，预计CYP3A5*1小鼠能够反映体内肠道、肝脏等组织中的CYP3A5活性。尽管CYP3A5 DNA序列中的6986A > G突变导致剪接缺陷，但在CYP3A5*3小鼠的组织中仍检测到低水平的CYP3A5 mRNA（图1A）。然而，CYP3A5*3小鼠的肝脏和肠道微粒体中CYP3A5探针药物的代谢活性低于CYP3A5*1小鼠（图2）。此外，只有在CYP3A5*1小鼠中观察到了酮康唑的抑制作用。由于酮康唑将CYP3A5*1小鼠肝脏和肠道微粒体中的酶活性降低到了CYP3A5*3小鼠的水平，因此在CYP3A5*3小鼠中观察到的T-5 N-氧化活性很可能是由其他酶而非CYP3A所介导的。这些数据表明，CYP3A5*3小鼠中的CYP3A5催化活性可以忽略不计。他克莫司是一种主要通过CYP3A5而非CYP3A4代谢的CYP3A底物。为了明确CYP3A5的贡献，研究人员比较了CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠中的他克莫司的体外和体内代谢活性。根据他克莫司的AUCR值，CYP3A5*1小鼠体内的他克莫司代谢速率高于CYP3A5*3小鼠（图4C），这一结果与人类的研究结果一致。值得注意的是，无论是体外还是体内实验都发现，与他克莫司代谢相关的活性与CYP3A5的表达有关（图1A、3B、4F）。使用肾脏和肺微粒体进行的体外研究表明，CYP3A5*1小鼠产生的去甲他克莫司的量显著多于CYP3A5*3小鼠（图3B）。这些结果表明，CYP3A5在CYP3A5*1小鼠中对他克莫司的代谢起着重要作用。然而，在肝脏微粒体内，CYP3A5*1小鼠与CYP3A5*3小鼠之间去甲他克莫司的生成量没有显著差异（图3B）。因此，CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠肝脏微粒体内去甲他克莫司生成量的差异可能被CYP3A4和其他酶的代谢所掩盖。相反，三唑仑的代谢能力在CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠之间没有差异，即使是在体内AUCR方面也是如此（补充图3）。综合这些关于CYP3A5选择性和非选择性药物药代动力学的研究结果，CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠是能够代表体内CYP3A5介导的代谢的合适模型。

与他克莫司相关的肾毒性在肾移植患者中已有广泛报道。基于半生理模型对肾内他克莫司分布的模拟，人们认为CYP3A5表达者体内的他克莫司暴露量低于非表达者。然而，一些研究表明，在CYP3A5表达者中出现的药物不良反应（包括肾功能障碍）较为频繁。在我们的研究中，给药后6小时时，两组小鼠之间的他克莫司肾血比没有显著差异（图5B）。尽管统计学上不显著，但CYP3A5*1小鼠的他克莫司肾血比略有升高，这与临床报告中他克莫司毒性的增加一致，因此需要进一步研究他克莫司在肾脏中的积累情况。考虑到他克莫司在组织中的滞留时间较长，某些组织中的他克莫司水平可能并不与全身循环水平一致，这可能与CYP3A5 SNP导致的全身代谢个体差异有关。需要进一步的研究来阐明CYP3A5 SNP与他克莫司治疗期间观察到的肺损伤之间的关系，因为CYP3A5*1小鼠在肺部的T/B比值显著高于CYP3A5*3小鼠（图5C）。TGF-β受体/HIF-1α/CTGF轴被认为与他克莫司诱导的肾纤维化有关。他克莫司通过抑制去磷酸化来激活TGF-β受体。他克莫司与FKBP12结合，后者是包含钙调神经磷酸酶A、钙调神经磷酸酶B和钙调蛋白的五聚复合体成员，能够抑制去磷酸化反应。去甲他克莫司也对钙调神经磷酸酶具有亲和力并能抑制去磷酸化，但其效果较弱。此外，计算显示去甲他克莫司对钙调神经磷酸酶B的亲和力高于他克莫司本身。因此，去甲基化可能会改变他克莫司的药理/毒理效应，并可能加速纤维化进程。在本研究中，两组小鼠的去甲他克莫司肾血比没有显著差异，但CYP3A5*1小鼠的平均值略高于CYP3A5*3小鼠（图5E）。相比之下，CYP3A5*1小鼠的肾脏和血液中代谢物的比值高于CYP3A5*3小鼠，其中肾脏的差异更大（肾脏为3.00倍，血液为2.38倍，图6A和6C）。这些结果表明，肾脏中的CYP3A5参与了他克莫司的外周代谢。肾近端管状上皮细胞表达多种药物代谢酶，其中CYP3A5的表达水平相对较高。肾脏细胞中CYP3A5介导的他克莫司代谢可能会通过其代谢物引起局部肾毒性。当近端管状细胞暴露于他克莫司时，CTGF的诱导与个体间的CYP3A5表达水平差异有关。尽管区分他克莫司及其代谢物的毒理效应较为困难，但与他克莫司表达相关的去甲他克莫司在肾脏中的产生和/或积累可能对其有害效应有所贡献。

本研究有两个重要注意事项：CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠仅接受了一次剂量的他克莫司。而在实际移植情况下，患者需要长期服用他克莫司，并且剂量是根据影响药代动力学的基因（如CYP3A5）的SNP进行个性化的。临床数据显示，接受调整后剂量的CYP3A5表达者的血液中去甲他克莫司/他克莫司比值高于非表达者。需要进一步的研究，通过反复给药和改变剂量来探究CYP3A5*1小鼠和CYP3A5*3小鼠体内和他克莫司的外周水平，以便更好地将我们的发现应用于临床实践。

总之，本研究发现了CYP3A5 SNP与他克莫司及其代谢物分布之间的关联。CYP3A5*1小鼠表明，他克莫司在表达CYP3A5的外周组织中被代谢，导致其代谢物在这些组织中的水平升高。需要进一步研究以明确外周组织中他克莫司及其代谢物水平升高是否会对CYP3A5表达者产生他克莫司诱导的毒性。

**数据可用性声明**
作者声明所有支持本研究结果的数据均包含在论文及其补充数据中。

**作者贡献**
Minegishi Genki：概念构思、方法论、验证、正式分析、数据管理、初稿撰写、可视化。Hiramatsu Yuna：研究。Sugahara Manami：研究。Abe Satoshi：方法论、资源提供、审稿与编辑。Kazuki Kanako：方法论、资源提供、审稿与编辑。Miyajima Atsushi：资源提供、审稿与编辑、资金筹集。Kazuki Yasuhiro：审稿与编辑、项目管理和资金筹集。Kobayashi Kaoru：概念构思、验证、资源提供、审稿与编辑、监督、项目管理和资金筹集。

**资助**
本研究部分在鸟取县管理的Tottori Bio Frontier进行。该项目部分得到了日本医学研究开发机构（AMED）的支持，资助编号为JP25ama121046（Y.K.和K. Kobayashi）、JP25gm0010010（Y.K.），以及ExCELLS探索性生命与生活系统研究中心（ExCELLS项目编号21-101）的共同支持（Y.K.）。

**利益声明**
无。

**未引用参考文献**
5.; 5..

**作者贡献声明**
Minegishi Genki：初稿撰写、可视化、验证、方法论、研究、数据管理、概念构思。Hiramatsu Yuna：研究。Sugahara Manami：研究。Abe Satoshi：审稿与编辑、资源提供、方法论。Kazuki Kanako：审稿与编辑、资源提供、方法论。Miyajima Atsushi：审稿与编辑、资源提供、资金筹集。Kazuki Yasuhiro：审稿与编辑、项目管理和资金筹集。Kobayashi Kaoru：审稿与编辑、验证、监督、资源提供、项目管理和资金筹集。