脱氢表雄烯酮对血管系统的影响：H2S/NO通路的作用

《European Journal of Pharmaceutical Sciences》：The effect of dehydroepiandrosterone on the vascular system: role of H2S/NO pathways

　　卡尔洛塔·图纳图里 | 卡伊阿拉·因多尔菲 | 梅拉尼娅·科雷阿莱 | 埃里卡·埃斯波西托 | 安娜·谢蒂诺 | 瓦伦蒂娜·韦莱科 | 拉斐拉·索伦蒂诺 | 埃玛·米蒂迪埃里 | 德马内乌莱·迪·维拉比安卡 | 罗伯塔
INSERM U1148-LVTS，巴黎大学，法国巴黎

**摘要**
脱氢表雄酮（DHEA）是一种肾上腺类固醇激素，作为雄激素和雌激素的前体，并参与多种生理过程。其水平会随年龄自然下降，而DHEA浓度降低与心血管疾病风险增加有关。然而，这种关系较为复杂，需要进一步研究以明确DHEA补充剂是否有助于预防与年龄相关的血管功能障碍。

本研究利用小鼠主动脉和牛主动脉内皮细胞（BAEC）探讨了DHEA的血管效应，重点关注了硫化氢（H2S）的潜在作用。DHEA在完整的内皮主动脉中表现出更明显的血管舒张作用，这种作用不仅通过一氧化氮（NO）介导，也通过H2S介导。与使用安慰剂的对照组相比，DHEA处理后的主动脉中H2S的产生显著增加。此外，还发现L型钙通道参与了DHEA引起的血管舒张。L型钙通道抑制剂尼芬地平显著减弱了DHEA引起的血管舒张效应，反之亦然，这表明两者可能作用于相同的靶点。与主动脉研究结果一致，暴露于DHEA的BAEC中NO生成量也有所增加。通过两种互补的方法进一步证实，DHEA增强了BAEC中的H2S生成，且这种效应可持续2小时。总体而言，这些发现表明DHEA通过依赖NO和H2S的途径以及调节L型钙通道来促进血管舒张。我们的数据为DHEA的作用机制提供了新的见解，支持其在血管系统中的保护作用。

**1. 引言**
类固醇是一类具有重要药理作用的化学化合物，在多种病理生理过程中发挥关键作用。类固醇激素主要以无活性的硫酸酯形式存在于血液循环中，可在局部组织中通过去除硫酸基团转化为活性形式。类固醇通常毒性较低且生物利用度较高；然而，其毒性可能受剂量、年龄、性别和发育阶段的影响，尤其是在长期治疗情况下。在类固醇中，脱氢表雄酮（DHEA）是人体内循环中最丰富的肾上腺类固醇激素，主要以硫酸酯形式（DHEA-S）存在。DHEA和DHEA-S是密切相关的肾上腺类固醇，但在生化和生理功能上有所不同：DHEA是生物活性形式，其浓度具有明显的昼夜变化；而DHEA-S是稳定的储存形式，半衰期显著更长。DHEA主要在肾上腺网状带中由胆固醇通过细胞色素P450依赖性的单加氧酶和羟基甾体脱氢酶催化的一系列反应生成。DHEA是性激素（如睾酮和雌激素）合成的前体，并可作为G蛋白偶联受体（GPCRs）和核受体的配体，通过多种机制影响多种生物过程[Webb, S. J. 等，2006]。DHEA的分泌具有与年龄相关的特征：在青春期其循环水平升高，随后随年龄增长而下降。具体而言，男性DHEA-S水平在20–24岁达到峰值，女性在15–19岁达到峰值，此后男女两性水平均持续下降[Orentreich N 等，1984]。DHEA/DHEA-S水平的下降与许多与年龄相关的慢性疾病和症状有关，如骨量减少、肌肉减少、动脉粥样硬化、免疫衰老以及认知和情绪障碍[Rutkowski K 等，2014；Sahu P 等，2020]。在这种情况下，DHEA/DHEA-S具有抗衰老作用，且有研究表明DHEA水平与心血管疾病（CVD）之间存在关联。研究显示，DHEA和DHEA-S水平较低与CVD风险和总体死亡率增加相关[Alexander P 等，1996；Trivedi DP 等，2001]。一项荟萃分析进一步支持了这一观点[Wu 等，2017]，该研究表明CVD患者的DHEA-S水平较低者预后较差。此外，在具有冠状动脉风险因素的绝经后女性进行冠状动脉造影时，DHEA-S水平较低与较高的CVD死亡率和全因死亡率相关[Shufelt C 等，2010]。男性中也观察到了类似的趋势[Phillips AC 等，2010；Ohlsson C 等，2011；Tivesten A 等，2014]。在一项针对中老年人群的更大规模研究中，DHEA-S水平与全因死亡率、CVD发病率及癌症发病率之间的关联呈现非线性J形曲线：DHEA-S水平最低的个体患CVD、癌症及全因死亡的风险显著较高，直到达到中等水平后风险趋于平缓。因此，可认为生理上的“可控”DHEA-S水平有助于延长男女寿命。然而，DHEA-S与死亡率之间的具体关系仍不明确，这一课题仍是科学和公共卫生的重要研究课题。有研究发现绝经后女性血浆中DHEA-S水平较低与内皮功能障碍有关，进一步证实了DHEA-S在CVD发病中的关键作用[Akishita 等，2008]。此外，DHEA可增加血流介导的血管舒张并降低绝经后女性的总血浆胆固醇水平，支持其改善心血管健康的潜力[Williams MR 等，2004]。如前所述，DHEA是性激素（如睾酮和雌激素）合成的前体。遗憾的是，许多研究未同时检测DHEA与睾酮和雌激素的循环水平，限制了对激素背景的全面理解。不过，DHEA水平的下降常伴随睾酮和雌激素水平的下降。临床前和临床数据表明，DHEA的血管保护和抗动脉粥样硬化效应是通过其转化为雌激素来实现的。事实上，有研究指出一氧化氮（NO）在DHEA和17β-雌二醇的抗动脉粥样硬化作用中起作用[Hayashi T 等，2000]。DHEA-S可能通过直接增加NO生成或促进雌激素合成来发挥其抗动脉粥样硬化作用[Martina V 等，2001]。因此，DHEA的作用可能既依赖于雌激素，也可能独立于雌激素。

**2. 方法**
2.1. 动物
使用CD1雄性小鼠（23-25克；Charles River公司）。这些小鼠饲养在意大利那不勒斯大学分子医学和医学生物技术系的动物护理设施中，环境温度为21±2°C，湿度为60±10%，光照周期为12小时明暗循环。小鼠可自由摄取食物和水。所有小鼠在实验前至少适应5天。实验在光照阶段进行。所有实验都尽量减少动物使用数量及其痛苦程度。动物护理和实验程序遵循意大利和欧盟关于动物实验的法规要求。所有程序均获得当地动物护理机构（那不勒斯大学Federico II医院兽医服务中心）的批准，并符合ARRIVE指南[Kilkenny 等，2010；Lilley 等，2020]及欧盟关于实验设计和分析的法规（指令2010/63/EU）。实验流程获得意大利卫生部的批准（代码编号：734/2023）。

2.2. 小鼠主动脉环的功能研究
小鼠通过过量使用氟胺酮进行安乐死，取出主动脉并去除附着的结缔组织和脂肪组织。将组织放入含氧克雷布斯液中（温度37°C），切成1–1.5毫米长的环状结构，并安装在装有含氧克雷布斯液（95% O2–5% CO2）的器官浴器中，连接到一个等长力传感器（FORT10，Biological Instruments公司，意大利瓦雷泽）。张力变化由计算机化的Power Lab系统（MacLab System，ADInstruments软件）连续记录。将环状结构拉伸至1.5克的基础张力并让其平衡30分钟[Mitidieri E 等，2018]。在每组实验中，首先使用苯肾上腺素（PE，1 μM，Sigma-Aldrich，意大利米兰）刺激主动脉环，直至反应稳定。为了评估内皮的完整性，我们测量了乙酰胆碱（ACh，0.3–300 μM，Sigma-Aldrich，意大利米兰）对苯肾上腺素（PE，1 μM）引起的血管舒张反应的累积浓度-反应曲线（CCRC）。当ACh引起的血管舒张超过70%时，认为主动脉环具有内皮[Mitidieri 等，2020]。在另一组实验中，通过轻轻摩擦血管内腔去除内皮。当ACh引起的血管舒张不超过10%时，认为主动脉环没有内皮。在存在和不存在内皮的情况下，分别测量了DHEA（0.3–100 μM；Avanti-Merck）或安慰剂（乙醇，浓度匹配）对苯肾上腺素（1 μM）引起的血管舒张反应的CCRC。为了研究NO的作用，我们在DHEA与N5-(1-氨基乙基)-L-鸟氨酸二盐酸盐（L-NIO，eNOS抑制剂，10 μM，20分钟；Tocris，Bio-Techne，意大利米兰）共培养后评估DHEA的血管舒张效应。为阐明DHEA引起血管舒张的机制，我们还进行了其他药理调节。为了评估H2S的贡献，将丙烯基甘氨酸（PAG，CSE抑制剂，10 mM，20分钟；Sigma-Aldrich）预先加入主动脉环中。通过使用格列本氯胺（Gly，K-ATP通道阻滞剂，10 μM，30分钟；Sigma-Aldrich，意大利米兰）和氯化钡（BaCl2，非选择性内向整流K+通道阻滞剂，2 μM，30分钟；Sigma-Aldrich，意大利米兰）以及KCl诱导的去极化作用（KCl，20 mM）来检查钾通道的作用。为了评估G蛋白偶联受体（GPCRs）的作用，将SCH 202676（1 μM，40分钟；Tocris，Bio-Techne，意大利米兰）这种非选择性GPCR调节剂加入主动脉环中，然后测试DHEA的血管舒张效应。最后，为了确定血管舒张是直接由DHEA引起还是由其代谢产物引起，将尼鲁酰胺（Nil，10 μM，雄激素受体抑制剂；Sigma-Aldrich，意大利米兰）或ICI 182.780（100 nM，高亲和力雌激素受体拮抗剂；Tocris，Bio-Techne，意大利米兰）分别加入主动脉环中，培养15分钟和30分钟。同时，通过将尼芬地平（300 nM，30分钟；Sigma-Aldrich，意大利米兰）加入主动脉环中来评估电压依赖性钙（Ca2+）通道对DHEA血管舒张效应的影响。最终，通过将主动脉环与吲哚美辛（一种环氧化酶抑制剂，10μM，20分钟，Sigma-Aldrich，意大利米兰）孵育来研究前列腺素在DHEA诱导的血管舒张中的作用。数据以平均值±标准误（n = 5）表示，并作为相对于PE或KCl张力的血管舒张百分比报告。结果使用双因素方差分析（ANOVA）进行统计，随后进行Bonferroni事后检验。p < 0.05被认为具有统计学意义。

2.3. 细胞培养
从iXCells Biotechnologies购买牛主动脉内皮细胞（BAECs）（货号10BO-001，加利福尼亚州圣地亚哥）。BAECs在改良的Dulbecco培养基（DMEM）中生长，该培养基添加了2 mmol/L谷氨酰胺、10%热灭活的胎牛血清和50 U/mL青霉素/链霉素，并在37°C、5% CO2/95%空气环境中孵育。每天更换培养基直至细胞融合。所有实验均使用第6-8代细胞。经过一夜饥饿（无血清培养基）处理后，细胞用DHEA（1-100nM）或不含酚红的DMEM处理 [Esposito E等人，2024]。

2.4. 西部印迹（Western blot）
用不含酚红的DMEM或DHEA（10 nM）预处理的BAECs在改良的RIPA缓冲液（50-mM Tris-HCl pH 8.0、150-mM NaCl、0.5%脱氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠、1 mM EDTA、1% Igepal）中匀浆，并加入蛋白酶抑制剂。蛋白质浓度通过Bradford测定法进行评估，以牛血清白蛋白（BSA；Biorad，意大利米兰）作为标准品。变性后的蛋白质（70 μg）通过10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离，并转移到聚偏二氟乙烯膜上 [d’Emmanuele di Villa Bianca等人，2016]。膜在含有0.1% v/v Tween 20%和5%脱脂奶粉（Applichem，德国达姆施塔特）的磷酸盐缓冲液（PBS）中室温孵育1小时后，在4°C下过夜与针对p-eNOS的一抗（1:500；Cell Signaling）孵育，然后在与小鼠抗eNOS的一抗（1:1000；Cell Signaling）孵育之前进行剥离。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH；1:3000；E-AB 20059，Elabscience Biotechnology，美国德克萨斯州休斯顿）作为内参蛋白。使用Enhanced Chemiluminescence底物（Clarity TM Western ECL Substrate，Bio-Rad Laboratories，美国加利福尼亚州）显影膜，并使用Chemidoc系统（Bio-Rad，意大利米兰）获取西部印迹图像。数据以平均值±标准误（n = 3）表示，并以光密度（O.D.）报告。结果使用t学生t检验进行分析。p < 0.05被认为具有统计学意义。

2.5. NOx的测定
在主动脉匀浆物和BAEC细胞培养基中测定了总硝酸盐含量（NOx），其中包含NO2-和NO3-。小鼠主动脉组织与DHEA（100 μM）或溶剂孵育5分钟后，将组织迅速放入液氮中并储存于-80°C。接下来，在含有蛋白酶抑制剂混合物的改良RIPA缓冲液（50-mM Tris-HCl pH 8.0、150-mM NaCl、0.5%脱氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠、1 mM EDTA、1% Igepal）中匀浆BAEC。然后将主动脉匀浆物或培养基与3份NH4Cl 0.49M和1份Na2B4O7 0.06M在含有镉的微孔板中孵育1小时，将无机阴离子NO3-转化为NO2-，随后在4°C下以12000 rpm离心15分钟。加入2,3-二氨基萘（DAN）与NO2-反应生成荧光产物1-(H)-萘三唑。反应通过加入NaOH 2.8 N终止。NOx通过Promega Glomax explorer（威斯康星州麦迪逊）在微量滴定板中进行荧光测定，并根据亚硝酸钠（NaNO2，50–2000 nM；Sigma-Aldrich）的标准曲线进行计算 [Casey T E等人，2000；Casertano M等人，2023]。数据以平均值±标准误（n = 5和4）表示，并以nM报告。结果使用t学生t检验或方差分析（ANOVA）进行统计，随后根据需要使用Dunnett事后检验。p < 0.05被认为具有统计学意义。

2.6. H2S的测定
小鼠主动脉与DHEA 100 μM或溶剂孵育5分钟后，测定了主动脉匀浆物中的H2S生成量[Montanaro R等人，2023；Olivencia等人，2023]。所有样本在添加荧光探针sulfidefluor-7-乙酸氧甲基酯（SF7-AM，Sigma-Aldrich；意大利米兰）后，在37°C下的黑暗中于黑色96孔板中重复实验。孵育30分钟后使用Promega Glomax explorer（威斯康星州）测量荧光（激发波长475 nm - 发射波长500–550 nm），并根据Na2S（50 nM-200 μM，Sigma-Aldrich；意大利米兰）的标准曲线确定H2S含量。结果以平均值±标准误（n = 5）表示，并以nmol/mg蛋白质/分钟报告。结果使用学生t检验进行分析。p < 0.05被认为具有统计学意义。

2.6. BAEC培养基中的H2S测定
通过荧光测定法测定了BAEC培养基中的H2S水平。细胞用DHEA（1-100nM）处理5分钟或用溶剂处理，然后收集培养基。样本被转移到黑色底部的96孔板中，并使用荧光探针sulfidefluor 7-AM（SF7AM，Sigma-Aldrich，意大利米兰）测定H2S含量，并根据硫化钠（Na2S，50nM-200μM；Sigma Aldrich，意大利米兰）的标准曲线进行计算 [Montanaro R等人，2023]。荧光强度使用Promega Glomax Explorer（威斯康星州麦迪逊）测量。数据以平均值±标准误（n=3）表示，并以nM报告。结果使用方差分析（ANOVA）进行统计，随后根据需要使用Dunnett事后检验。p < 0.05被认为具有统计学意义。

2.7. BAEC中的H2S测定
BAEC在不含酚红的DMEM中于37°C孵育30分钟后，培养基替换为含有SF7AM（10 μM）的培养基并在37°C下孵育30分钟。之后，用不同浓度的DHEA（1-100nM）处理细胞以测量活体H2S生成量。从基础状态（0分钟）起每分钟以及每隔15分钟测量荧光强度，直到2小时 [Lin VS等人，2013；Casertano M等人，2023；Montanaro R等人，2023]。在另一组实验中，评估了用溶剂、DHEA（10 nM）或SCH 202676（1 μM，40分钟；Tocris，Bio-Techne，意大利米兰）加DHEA处理的BAEC中的H2S生成量，以及CSE沉默细胞中的H2S生成量。在蛋白质定量后测定匀浆物中的H2S生成量。结果以平均值±标准误（n = 3）表示，并以荧光强度报告。结果使用方差分析（ANOVA）进行统计，随后根据需要使用Bonferroni事后检验。p < 0.05被认为具有统计学意义。

3. 结果
3.1. eNOS/NO信号通路在DHEA诱导的血管舒张中的作用
DHEA以依赖内皮的方式使预先收缩的主动脉环舒张。去除内皮会负面地影响DHEA的血管舒张作用（图1A；***p<0.001）。当eNOS被L-NIO抑制时观察到相同的趋势（图1B；***p<0.001）。同样，主动脉短时间暴露于DHEA（100 μM）（5分钟）显著增加了NOx的产生量（图1C，**p<0.01）。为了进一步阐明DHEA对内皮的影响，我们转向了BAEC。DHEA（1-10-100 nM）处理5分钟显著增加了NOx水平，并伴随着eNOS磷酸化的增加（图2A和B；*p<0.05）。总体而言，这些数据表明eNOS/NO信号通路参与了DHEA的舒张效应。**评估类固醇激素受体和GPCR在小鼠主动脉中DHEA诱导的舒张作用中的作用**
**（A）使用Nil（10 μM，15分钟）阻断雄激素受体，以及（B）使用ICI 182.780（100 nM，30分钟）阻断雌激素受体对DHEA诱导的血管舒张的影响。**
**（C）吲哚美辛（10 μM，20分钟）对DHEA诱导的血管舒张的影响。**
**（D）GPCR变构调节剂SCH-202676（10 μM，40分钟）对DHEA血管舒张的影响。**
数据以平均值±标准误（n=5只小鼠）表示。*p < 0.05 vs 定制溶剂。**
同样，吲哚美辛（10 μM）并未改变DHEA引起的血管舒张效应，排除了前列腺素的影响（图5C）。
**SCH-202676是一种GPCR的变构调节剂，显著减少了DHEA的舒张作用（图5D，*p<0.05）。**

**3.4 钙通道在DHEA诱导的血管舒张中的作用**
为了评估钙离子通道在DHEA舒张效应中的作用，我们采用了药理方法。L型钙离子通道抑制剂硝苯地平（300 nM）显著降低了DHEA的舒张效应（图6A，***p<0.001）。反之，DHEA（10 μM）显著降低了硝苯地平引起的血管舒张效应（图6B，**p<0.01）。

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**图6. L型钙离子通道在小鼠主动脉中DHEA诱导的舒张作用中的作用。**
**（A）使用硝苯地平（300 nM，30分钟）阻断L型钙离子通道对DHEA诱导的血管舒张的影响。**
**（B）DHEA（10 μM，30分钟）对硝苯地平在小鼠主动脉中诱导的血管舒张的影响。**
数据以平均值±标准误（n=5只小鼠）表示。**
****p < 0.01, ***p < 0.001 vs 定制溶剂。**

**4. 讨论**
多种类固醇激素的水平会随年龄增长而下降，其中许多与心血管风险相关。值得注意的是，雌激素与性别特异性的心血管风险更为密切相关，因为男性具有较高的基线心血管疾病（CVD）风险，而女性在绝经后发病率显著增加，这与雌激素水平的下降同时发生。因此，性类固醇（尤其是雌激素）的年龄相关性下降直接影响了CVD风险，形成了不同的性别特异性特征。虽然男性的基线风险较高，但女性在绝经后由于雌激素水平下降，其心血管保护作用迅速减弱[Novella S等人，2025]。此外，DHEA的循环水平已被提出作为CVD的生物标志物，其中较低的水平与风险增加呈负相关，尤其是在男性中[Shufelt C等人，2010；Jia X等人，2020]。DHEA是性激素合成的前体，其水平的下降通常与睾酮和雌激素的减少相关。血清中DHEA和DHEA-S的年龄相关性下降[Labrie F等人1997；Baulieu EE 2002]表明，这些物质的缺乏与CVD的发展有关[Alexanders P等人，1996；Trivedi DP等人，2001；Gutierrez G等人，2007；Camporez JP等人，2011；Curatola AM等人，2012；Wu TT等人，2017；Klinge等人，2018；Jia X等人，2020]。

**关于DHEA作用的研究局限性在于缺乏雌激素和/或睾酮水平的同步报告，这使得难以明确区分DHEA/DHEA-S或其衍生物对心血管保护的特定贡献。**
尽管如此，临床和临床前研究已经证明DHEA具有独立于睾酮和雌激素受体激活的保护性血管作用。在心血管系统中，DHEA可能通过调节多种过程发挥其益处，包括膜电位、离子通道、内皮细胞的一氧化氮（NO）生成、氧化应激、细胞增殖和细胞凋亡[Savineau JP等人，2013；Zhu等人，2025]。然而，与DHEA的心脏保护作用相关的分子机制仍在进行研究中。

**在这里，我们发现小鼠主动脉中的内皮细胞存在增强了DHEA的舒张作用，这涉及NO和H2S的贡献。**
DHEA暴露增加了主动脉中的NO生成。这一效应在培养的内皮细胞（BAECs）中也得到了验证，其中DHEA通过激活eNOS来增强NO的生成[Williams MR等人，2004]。此外，动物模型中也发现了NO在DHEA血管效应中的作用。DHEA处理改善了老年大鼠的年龄相关变化，通过增加NO信号传导和抗氧化功能，从而延缓了动脉老化[Wu S等人，2007]。同样，DHEA干预在去卵巢（OVX）大鼠中恢复了主动脉中的NO信号传导[Simoncini T等人，2003]以及血管反应，并减少了活性氧（ROS）的生成[Camporez JP等人，2011]。因此，DHEA替代疗法改善了正常高胆固醇血症男性和绝经后女性的内皮依赖性血管扩张[Kawano H等人，2003；Williams MR等人，2004]。总体而言，这些结果表明DHEA在改善内皮功能方面起着作用。**

**值得注意的是，H2S作为一种舒张信号分子的作用逐渐显现。**
其舒张效应是多方面的，涉及内皮依赖性和内皮非依赖性途径。虽然它作为一种内皮来源的舒张因子[Mustafa AK等人，2011]，但它也可以直接放松平滑肌，而不依赖于内皮。这种内皮非依赖性的血管舒张涉及钾通道的开放和钙离子流入的减少，导致平滑肌细胞超极化和舒张[Dunn WR等人，2015]。有趣的是，我们在具有完整内皮的小鼠主动脉中发现了H2S信号传导在DHEA舒张效应中的作用。实际上，DHEA暴露增加了主动脉中的H2S生成。与此一致的是，抑制碳硫醚酶（CSE）并阻断钾通道会减少DHEA的舒张效应。然而，由于PAG不是一种高度选择性的CSE抑制剂，不能排除CBS或其他非靶标机制的参与。同样，DHEA暴露会快速并持续地释放H2S，表明它在内皮中的H2S生物合成中起作用。CSE在DHEA诱导的H2S释放中的作用进一步得到了CSE沉默实验的支持。众所周知，H2S和钙信号传导是相互关联的，即H2S会影响通过各种通道的钙离子流动，而钙信号传导也可以调节H2S的生成。已有研究表明H2S通过抑制L型钙通道来调节这一过程，从而减少钙离子进入平滑肌细胞的流动[Dai L等人，2019]。在这方面，我们发现L型钙通道拮抗剂硝苯地平可以减少DHEA的血管舒张作用，反之亦然。这些发现表明DHEA可以直接通过干扰L型钙通道起作用，或者间接通过H2S生物合成发挥作用。这与最近的研究结果一致，该研究表明L型钙通道参与了DHEA的舒张效应[Mishra D等人，2025]。**

**最后，我们的数据表明DHEA的血管效应并非由睾酮或雌激素受体激活所介导，而是部分涉及GPCR。**
这一效应也在内皮细胞中得到了证实，其中DHEA产生的H2S被GPCR的变构调节剂所抑制。不幸的是，使用非选择性的GPCR调节剂无法识别特定的受体亚型。**

**这些数据为DHEA的作用提供了进一步的见解，并支持其在血管水平上的保护作用，不仅通过NO释放，还通过H2S生成。**
我们为理解DHEA在血管中的作用机制做出了贡献，这对于制定进一步的临床管理策略以预防血管疾病具有重要意义。总体而言，这些结果强化了使用DHEA补充剂作为保护性心血管药物的观念，不仅通过增加NO释放，还通过H2S起作用，这两种气体介质在调节血管稳态中起着重要作用。**
此外，DHEA的双重效应，无论是否存在内皮，都表明在发生内皮功能障碍的心血管疾病中，外源性补充DHEA水平可能有助于对抗和预防心血管相关事件。**

**一项Cochrane荟萃分析提供了强有力的证据，表明激素疗法（雌激素，无或伴有孕激素）在绝经后女性中用于一级或二级预防心血管疾病事件，几乎没有或根本没有益处，并且与中风和静脉血栓栓塞事件的风险增加有关[Boardman HM等人，2015]。**
另一方面，由于研究设计的显著异质性（包括DHEA剂量、治疗持续时间和研究人群的广泛差异），临床试验并未明确证明DHEA补充剂的有益效果[Rice SP等人，2009；Qin Y等人，2020]。**
我们的临床前发现强调了DHEA补充剂在以内皮功能障碍为特征的疾病中的潜在作用。在这种情况下，重要的是要考虑临床前研究的局限性，因为物种间已建立的生理和代谢差异可能会限制其转化意义。**
因此，需要进一步的长期随机临床试验来独立于雌激素和睾酮，研究DHEA的效果。**

**作者贡献声明**
Roberta d'Emmanuele di Villa Bianca：写作——审阅和编辑，概念化。
Emma Mitidieri：写作——审阅和编辑，监督，概念化。
Anna Schettino：形式分析，数据管理。
Erika Esposito：方法学，形式分析，数据管理。
Raffaella Sorrentino：写作——初稿，概念化。
Valentina Vellecco：形式分析，数据管理。
Carlotta Turnaturi：方法学，形式分析，数据管理。
Melania Correale：方法学，形式分析。
Chiara Indolfi：方法学，形式分析，数据管理。

**未引用的参考文献**
Alexandersen等人，1996；Baulieu，1996；Casey和Hilderman，2000；Cirino等人，2022；d’Emmanuele di Villa Bianca等人，2016；Dunn等人，2016；Esposito等人；Gutiérrez等人，2007；Liu和Dillon，2004；Mitidieri等人，2020；Phillips等人，2020；Trivedi和Khaw，2001。