大原阴汤通过保护肠道黏膜屏障和免疫功能以及预防肠道菌群失调，减轻重症胰腺炎的炎症损伤

《Annals of Medicine and Surgery》：Da-yuan-yin decoction ameliorates inflammatory injury in severe pancreatitis by protecting intestinal mucosal barrier and immune function and preventing intestinal dysbiosis

　　**摘要**
**引言：** 急性胰腺炎（AP）是一种常见的胃肠道疾病，其特征是胰腺发炎。由于长期住院、较高的医疗费用以及多种并发症，AP的治疗极具挑战性。中医在中国已有数千年的应用历史，并且临床证明是一种安全有效的治疗胰腺炎的方法。

**方法：** 本研究旨在探讨大源阴（DYY）汤是否能够减轻重症胰腺炎的炎症损伤。通过将5%牛磺胆酸钠逆行注入雄性Sprague-Dawley大鼠的胆管中，建立了重症急性胰腺炎（SAP）模型。我们检测了肠黏膜屏障功能和肠道免疫功能，并利用16S rRNA基因检测分析了肠道菌群的变化。

**结果：** 与DYY + SAP组相比，SAP组的细胞损伤更为严重。SAP组中髓过氧化物酶（myeloperoxidase）和EGF样模块含有黏蛋白样激素受体1（EGF-like module-containing mucin-like hormone receptor-like 1）的表达显著高于DYY + SAP组。SAP组和DYY + SAP组的血清内毒素、d-乳酸、肠道脂肪酸结合蛋白、白细胞介素（IL）-1β和IL-10的水平均显著升高。SAP组和DYY + SAP组的血浆血管活性肠肽（VIP）显著降低，其中DYY + SAP组的VIP水平低于SAP组。SAP组和DYY + SAP组的回肠Peyer氏斑中的CD3+、CD4+和CD8+细胞数量均减少；而DYY + SAP组的这些细胞数量显著高于SAP组。物种差异分析显示，在假手术（SO）、SAP和DYY + SAP组中，前10种相对丰富的菌种在每个分类等级（门、纲、目、科和属）上存在显著差异。聚类热图分析显示，SO、SAP和DYY + SAP组在属水平上的菌种存在差异。在门等级别上，SO组和SAP组之间的变形菌门（Proteobacteria）和杆菌门（Bactroidota）的表达水平存在差异。

**结论：** DYY汤可能减少组织损伤，保护肠黏膜屏障，增强肠道免疫功能，并有助于预防腹腔积液和粪便样本中的肠道菌群失调。

**通俗语言总结：** 本实验研究了中药大源阴（DYY）汤是否可以减轻重症急性胰腺炎（SAP）的肠道损伤。通过将5%牛磺胆酸钠逆行注入雄性Sprague-Dawley大鼠的胆管中诱导SAP模型，随后给予DYY汤治疗。与单独使用SAP相比，DYY + SAP组的细胞损伤较轻，髓过氧化物酶和EGF样模块含有黏蛋白样激素受体1的表达也较低。SAP组和DYY + SAP组的血清内毒素、d-乳酸、肠道脂肪酸结合蛋白、白细胞介素（IL）-1β和IL-10水平显著升高；而血浆血管活性肠肽（VIP）水平显著降低，尤其是DYY + SAP组。SAP组和DYY + SAP组的回肠Peyer氏斑中的CD3+、CD4+和CD8+细胞数量均减少，但DYY + SAP组的这些细胞数量显著高于SAP组。物种差异分析表明，在假手术（SO）、SAP和DYY + SAP组中，前10种相对丰富的菌种在各个分类等级上存在显著差异。聚类热图分析揭示了这三组之间的菌种差异。在门等级别上，SO组和SAP组之间的变形菌门和杆菌门表达水平存在差异。

**技术细节：**
- **动物模型：** 从上海SLAC动物公司购买了45只6-8周龄、体重250-300克的雄性Sprague-Dawley大鼠（证书编号：Scxk (Shanghai) 2022-0004）。大鼠被随机分为SAP组、DYY + SAP组和假手术（SO）组，每组15只。手术前12小时禁食但自由饮水。手术时通过腹腔注射1%戊巴比妥麻醉大鼠。SAP模型通过将0.1 ml/100 g的5%牛磺胆酸钠逆行注入胆管建立。
- **肠道免疫功能评估：** 使用酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素（IL）-1β和IL-10水平。
- **肠道菌群分析：** 使用自动真菌/细菌动态检测仪（IGL-200）检测血清内毒素水平；通过酶联免疫吸附测定法检测血浆d-乳酸、血管活性肠肽（VIP）和肠道脂肪酸结合蛋白（I-FABP）水平。
- **数据可视化：** 使用NanoDrop ND-1000光谱仪（Thermo Fisher Scientific）和琼脂糖凝胶电泳测量DNA的数量和质量；使用Agencourt AMPure XP Beads纯化PCR扩增子；使用PicoGreen dsDNA测定试剂盒进行定量。
- **统计分析：** 数据使用SPSS 19.0软件进行分析，采用单因素方差分析和Student’s t检验比较组间差异。P < 0.05的差异具有统计学意义。

**图表说明：**
- **图1：** 光镜下观察假手术（SO）、重症急性胰腺炎（SAP）和大源阴（DYY）+ SAP组胰腺组织的组织学变化。
- **图2：** 透射电子显微镜下观察假手术（SO）、重症急性胰腺炎（SAP）和大源阴（DYY）+ SAP组胰腺组织的组织学变化。表1 - 假手术（SO）、重度急性胰腺炎（SAP）和大源阴（DYY）+ SAP组在不同时间点的胰腺病理评分。
组别 | 胰腺病理评分 | 24小时 | 48小时 | 72小时 |
|------|------------------|--------|---------|---------|
| SO组 | 0.20 ± 0.45 | 0.40 ± 0.55 | 0.41 ± 0.56 |
| SAP组 | 6.00 ± 1.58 | 10.00 ± 1.59 | 13.40 ± 1.82 |
| DYY + SAP组 | 5.60 ± 1.14 | 9.00 ± 1.58 | 5.20 ± 1.30 |
DYY + SAP组在72小时时的胰腺病理评分显著低于SAP组（t = 8.07，P = 0.004）。

通过透射电子显微镜对大鼠胰腺的显微镜检查显示，SAP组的细胞损伤最为严重：线粒体肿胀并伴有严重的空泡变化；粗面内质网明显扩张且部分脱颗粒；酶原颗粒的数量略有减少；尽管细胞结构基本完整，但可以看到自噬结构。DYY + SAP组的细胞损伤较轻：细胞器出现不同程度的肿胀和扩张；酶原颗粒的电子密度在各个亚组中不均匀；部分亚组中也可见自噬结构。SO组则没有明显的细胞损伤（图2）。免疫组化结果显示，SAP组在72小时时的MPO和EMR1阳性细胞数量显著高于SO组和DYY + SAP组（图3）。

大源阴（DYY）煎剂对SAP大鼠回肠黏膜的保护作用
在光镜下检查SO组的回肠黏膜时，未发现水肿、出血或坏死，腺体结构完整。而在SAP组中，回肠组织结构紊乱，伴有间质水肿、出血、中性粒细胞浸润和局灶性坏死。DYY + SAP组的肠黏膜组织呈现水肿和充血现象，中性粒细胞浸润程度较轻（图4）。总之，在这项研究中，我们发现DYY煎剂能够在手术诱导胰腺炎后以时间依赖的方式保护胰腺组织。DYY煎剂通过调节胰腺组织中MPO和EMR1的表达来减轻组织损伤；通过调节血浆中的内毒素、d-乳酸、I-FABP和VIP水平来保护肠黏膜屏障；通过调节回肠派尔集合淋巴结中IL-1β和IL-10以及CD3+、CD4+和CD8+细胞的水平来增强肠道免疫功能；并改变腹水中变形菌门和拟杆菌门的表达水平。

**研究局限性**：本研究中动物样本数量相对较少，观察期仅为72小时。DYY煎剂的治疗效果需要更多动物实验来验证。目前的研究仅发现了DYY煎剂能够减轻胰腺损伤、保护肠黏膜屏障、增强肠道免疫功能以及预防肠道菌群失调的作用。DYY煎剂治疗胰腺炎的机制尚不明确。其治疗效果是否需要在更长时间内服用后才能更加明显，仍需进一步研究。本文符合TITAN指南2025[39]的要求。