TGFβ–ITGB6反馈回路对SMAD4野生型胰腺癌肝转移的影响

《Chinese Medical Journal》：Effect of TGFβ–ITGB6 feedback loop on liver metastasis in SMAD4 wild-type pancreatic cancer

　　**摘要：**
**背景：** 胰腺癌（PC）是最致命的消化道恶性肿瘤之一，超过一半的患者在确诊时已出现肝转移。了解胰腺癌肝转移的分子机制对于改善患者预后和延长生存期至关重要。本研究旨在阐明整合素亚基β6（ITGB6）在胰腺癌进展和转移中的作用，特别是其在肝转移中的作用。

**方法：**
首先，确定ITGB6是与胰腺癌肝转移相关的关键TGFβ信号通路基因，并通过基于SMAD4家族成员4（SMAD4）的亚组分析进一步验证了这一点。我们从北京协和医院接受手术切除的患者中获取了37对胰腺癌组织和相邻正常组织样本，并通过免疫组化（IHC）评估ITGB6的表达及其与临床病理特征的相关性。开展了包括细胞增殖、细胞凋亡检测以及细胞迁移和侵袭实验在内的体外实验，以评估ITGB6在胰腺癌细胞行为中的作用。建立了一种过表达ITGB6的SMAD4野生型（WT）胰腺癌细胞系，并使用皮下和肝转移异种移植模型评估其在体内的作用。为了探讨TGFβ对ITGB6的转录调控，进行了染色质免疫沉淀后定量聚合酶链反应（ChIP-qPCR）和双荧光报告基因实验。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、Western blotting和IHC分析了ITGB6表达胰腺癌细胞对肝星形细胞（HSC）激活的影响。最后，初步评估了针对ITGB6的单克隆抗体干预策略的治疗潜力。

**结果：**
TGFβ通过SMAD4依赖性途径上调ITGB6的表达。升高的ITGB6表达不仅促进了胰腺癌细胞的迁移和侵袭，还激活了肝星形细胞，从而建立了有利于转移殖民的纤维化微环境。在小鼠模型中，给予ITGB6单克隆抗体显著减弱了肝星形细胞的激活并抑制了肝转移的形成。因此，ITGB6是TGFβ介导转移的关键下游效应因子，成为胰腺癌肝转移的一个有前景的治疗靶点。

**结论：**
TGFβ-ITGB6正反馈轴在SMAD4野生型胰腺癌的肝转移中起着关键作用，突显了ITGB6作为潜在治疗靶点的价值，尤其是对于SMAD4功能正常的患者。

**平易语言总结：**
本研究探讨了转化生长因子β（TGFβ）如何通过调节整合素亚基β6（ITGB6）促进胰腺癌（PC）的肝转移。通过对37对胰腺癌组织和相邻正常组织的研究，作者通过免疫组化发现ITGB6在肿瘤中表达升高，尤其是在SMAD4野生型（WT）病例中更为明显。在细胞和小鼠模型中，TGFβ通过SMAD4依赖性途径增加ITGB6的表达，增强了胰腺癌细胞的迁移和侵袭，并激活了肝星形细胞（HSC），形成了支持转移的纤维化肝微环境。ITGB6单克隆抗体治疗减少了肝星形细胞的激活和肝转移，表明ITGB6是SMAD4野生型胰腺癌的潜在治疗靶点。

---

**补充说明：**
- 本文内容基于医学文献和研究数据整理而成，可能包含专业术语和部分简化表达。
- 非常规术语或专业概念请查阅相关医学文献或咨询专业人士。
- 文中提及的实验方法和数据分析工具为常用生物技术方法，具体细节请参考相关研究论文或技术手册。在脾脏注射异种移植模型中，将1 × 10^6个癌细胞悬浮在40 μL磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，然后注射到每只小鼠的脾脏中。使用IVIS Lumina Series III成像系统（PerkinElmer，Waltham，美国）在体内评估肿瘤迁移情况。一段时间后，对小鼠进行麻醉，并腹腔注射D-荧光素钾盐溶液（15 mg/mL，10 μL/g）进行活体成像，以评估远处转移情况。关于ITGB6单克隆抗体的体内疗效实验，在12只NPG小鼠中建立了脾脏注射异种移植模型，这些小鼠被随机分为两组。一组接受静脉注射PBS，另一组通过相同途径接受ITGB6单克隆抗体BG00011（A2704，Selleck Chemicals，Houston，美国）（3 mg/kg，每周一次）。一段时间后，如上所述进行活体成像。所有动物实验均遵循北京协和医学院医院（北京，中国）的机构伦理指南。动物实验获得了北京协和医学院医院动物福利与伦理委员会的批准（编号XHDW-2023-122）。

关于皮下异种移植肿瘤模型的构建，所有动物实验均遵循北京动物关怀和使用委员会的指南。使用上述慢病毒方法建立了对照组和ITGB6过表达的PANC-1细胞，并将其皮下注射到6周大的雌性BALB/c裸鼠的右侧腹部（每只小鼠300 μL，含有5 × 10^6个细胞）。接种后，每天监测小鼠的一般状况和肿瘤生长情况。每2天测量一次小鼠的体重以及肿瘤的长度和宽度。肿瘤体积（mm^3）使用以下公式计算：1/2 × 长度 × 宽度^2。最后测量移植肿瘤的重量，并根据每个时间点测量的皮下移植体积绘制肿瘤生长曲线。

TGFβ处理：将TGFβ（MedChemExpress，Monmouth Junction，美国）溶解在PBS（100 ng/mL）中，并在DMEM中稀释至最终浓度0.2 ng/mL。细胞最初在含有10% FBS的DMEM中培养至80%汇合度，然后用TGFβ（0.2 ng/mL）处理24小时。

TGFβ的酶联免疫吸附测定（ELISA）：使用Human TGFβ1 ELISA Kit（KE00002，Proteintech）检测皮下组织和细胞上清液样本中的TGFβ水平。皮下组织在提取缓冲液中匀浆，该缓冲液含有50 mmol/L 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸（HEPES）、50 mmol/L 焦磷酸四钠、100 mmol/L 氟化钠、10 mL 乙烯二胺四乙酸（pH 7.4）和蛋白酶抑制剂（每毫克组织10 μL）。测试前将组织和细胞上清液稀释5倍。所有操作均按照制造商的说明进行。活性TGFβ蛋白浓度来自非酸化样本。

RNA分离和qRT-PCR：按照标准条件进行信使RNA（mRNA）提取、互补DNA合成和qRT-PCR。使用Trizol试剂（Invitrogen，Waltham，美国）提取总RNA。逆转录使用PrimeScript RT Reagent Kit（Takara，大连，中国）进行。qRT-PCR按照既定协议进行，使用SYBR Green Master Mix（Applied Biosystems，Waltham，美国）。mRNA水平使用2?ΔΔCt方法计算。引物详细信息列在补充表3中，链接：https://links.lww.com/CM9/C528。

双荧光素报告基因检测：按照制造商的说明进行荧光素报告基因检测（YEASEN，上海，中国）。使用Lipofectamine 3000（Invitrogen，Waltham，美国）将含有WT或MUT ITGB6启动子的pGL3构建物以及Renilla荧光素质粒转染到PC细胞中。转染48小时后使用双荧光素报告基因检测系统测量荧光素活性，将萤火虫荧光素活性标准化为Renilla荧光素活性。

染色质免疫沉淀（ChIP）- qPCR检测：按照制造商的说明使用Pierce Magnetic ChIP Kit（#26157，Thermo Fisher，Waltham，美国）进行ChIP检测。在沉淀的DNA上进行PCR扩增。简要来说，PC细胞在室温下用1%甲醛交联10分钟，然后加入甘氨酸停止反应。使用SMAD2/SMAD3抗体（#5678，Cell Signaling，Danvers，美国）和兔IgG（#10500C，Thermo Fisher，Waltham，美国）进行免疫沉淀。使用Transwell BD Chambers（8 μm，Corning，纽约，美国）进行细胞迁移和侵袭检测。六孔板的上下腔分别填充100 μL无血清培养基（含有4 × 10^4个细胞）和含有10% FBS的培养基（600 μL）。在37°C和5% CO2下孵育24小时后，用甲醇固定过滤膜下表面的迁移细胞20分钟，然后用0.5%结晶紫溶液染色30分钟。随后清洗、干燥，并使用显微镜（物镜和目镜均为10倍放大）从五个视野（顶部、底部、左侧、右侧和中心）进行成像。对于侵袭检测，上腔的底部预先涂覆40 μL BD Matrigel（356234，Corning，纽约，美国）。

细胞凋亡检测：使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒（#KGA1101-100，KeyGEN BioTECH，南京，中国）评估ITGB6过表达和敲低后的PC细胞中的凋亡情况。SW1990和PANC-1细胞接种在六孔板中，转染48小时后收集细胞（siRNA和质粒）。按照制造商的说明，在室温下的黑暗环境中将细胞与FITC Annexin V和PI荧光探针在结合缓冲液中孵育15分钟。随后使用Attune NxT Flow Cytometer（Invitrogen，Waltham，美国）检测凋亡情况，并使用FlowJo软件（版本10.9；BD Biosciences，Ashland，美国）分析数据。

细胞增殖检测：在转染24小时后，将3 × 10^3个PC细胞接种在96孔板中。在适当的时间间隔使用sulforhodamine B（SRB）检测细胞活力，并使用微孔板读数器测量564 nm处的光密度（OD564）。

统计分析：使用R软件（版本4.2.1；R Foundation for Statistical Computing，维也纳，奥地利）和GraphPad Prism软件（版本9.1.2；GraphPad Software，圣地亚哥，美国）进行统计分析。使用配对或非配对学生t检验来评估组间差异。分类数据以数量表示，适当时使用卡方检验或Fisher的确切检验进行组间比较。P < 0.05（双侧）被视为统计学上显著。

结果：

**PC中TGFβ相关基因的筛选—ITGB6**：我们首先使用limma包分析了TCGA和GTEx数据集中的PC和相邻正常样本中的差异表达基因（DEGs）（Log2倍数变化[FC] >0且P < 0.05）。limma包还用于筛选GSE10393、GSE23952和GSE17708数据集中的DEGs，设定Log2FC >0和P < 0.05作为DEGs的阈值。随后，我们将DEGs与CPTAC蛋白质组学数据（Log2FC >0且P < 0.05）进行交叉比较，鉴定出六个与PC相关的TGFβ相关基因[图1A]。接下来，对TCGA训练数据集中的六个基因进行单变量Cox回归分析，鉴定出四个与预后相关的基因（风险比[HR] >1，P < 0.05）[图1B]。为了避免过拟合，对预后相关基因进行了进一步的lasso回归分析，基于最优λ值（lambda.min = 0.006771459）选择了三个基因（ITGB6、UBE2I和CTSB）[图1C]。然后进行了多变量Cox回归分析，最终选择了ITGB6[图1D]。TCGA和GTEx数据库的结果表明，ITGB6在PC组织中高表达，生存曲线分析显示ITGB6表达的增加与PC患者的较差预后相关[30]。随后，我们对单细胞数据集CRA001160进行了聚类分析，发现ITGB6主要在PC组织中的癌细胞中表达[图1E]。此外，对包含37对匹配的PC和相邻正常组织的组织微阵列进行IHC分析，发现PC组织中的ITGB6蛋白水平显著升高[图1F]。而且，ITGB6表达水平升高与肿瘤的T和N分期进展相关（P < 0.05）[表1]。

**图1：PC中TGFβ相关基因的筛选—ITGB6。** (A) Venn图显示PC组织中六个关键的TGFβ相关和上调基因。 (B) 六个基因的单变量Cox回归分析的Forrest图。 (C) 三个预后基因的LASSO系数分布图及LASSO模型中参数选择的交叉验证。 (D) 三个基因的多变量Cox回归分析的Forrest图。 (E) 单细胞数据集CRA001160的聚类和ITGB6表达分布结果显示ITGB6主要在肿瘤组织的癌细胞中表达。 (F) TMA中的PC组织和正常胰腺的代表性IHC图像，以及PC组织和相邻正常胰腺组织中的ITGB6蛋白表达情况由IHC评分显示。 * P < 0.001。 CI：置信区间；CPTAC：临床蛋白质组学肿瘤分析联盟；CTSB：组织蛋白酶B；EHBP1L1：类似EH结构域的蛋白1；GSE：基因表达组库；GTEx：基因型-组织表达项目；IHC：免疫组化；ITGB6：整合素亚基β6；KRT23：角质蛋白23；PAAD：胰腺腺癌；PAAD_CRA001160：胰腺腺癌单细胞RNA测序数据集；PC：胰腺癌；SLC16A3：溶质载体家族16成员3；TCGA：癌症基因组图谱；TMA：组织微阵列；UBE2I：泛素连接酶E2 I；UMAP：均匀流形近似和投影。

**表1 - PC患者中ITGB6表达与临床病理特征的相关性。** 临床病理变量 ITGB6低 ITGB6高 χ^2 P值 总计 37 14 23 性别 0.949 0.33 女性 17 5 12 男性 20 9 11 年龄 – 0.26 <65岁 10 2 8 ≥65岁 27 12 15 PC的位置 0.016 0.898 头部 19 7 12 体部/尾部 18 7 11 分期 – 0.71 I–II 27 11 16 III–IV 10 3 7 T分期 – 0.027 T1–T2 26 13 13 T3–T4 11 1 10 N分期 – 0.039 N0 13 8 5 N1–N2 24 6 18 ITGB6：整合素亚基β6；PC：胰腺癌；–：不可用。

**SMAD2与ITGB6启动子的结合促进其表达**：GSEA分析显示，在TCGA数据集的PC患者中，ITGB6表达高的样本在TGFβ通路中显著富集[图2A]。鉴于SMAD家族成员是TGFβ通路的典型下游转录介质，且SMAD4突变在PC患者中频繁观察到[1]，我们将样本根据SMAD4状态分为两组。在SMAD4 WT患者中，ITGB6表达高的样本在TGFβ信号通路中仍显著富集[图2B]，而在SMAD4 MUT患者中未观察到显著富集[图2C]。在人PC细胞系AsPC-1、BxPC-3、CFpac-1、T3M4、SW1990、MIAPaCa-2和PANC-1中，我们使用qRT-PCR和Western blotting分析了ITGB6的mRNA和蛋白水平以及SMAD4的蛋白水平[图2D, E]。根据这些PC细胞系中SMAD4突变状态的先前研究，并考虑SMAD4和ITGB6的表达情况，我们选择了SMAD4 WT细胞系SW1990和PANC-1进行后续实验[31]。随后，使用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blotting评估了这两种细胞系中ITGB6 siRNA和过表达质粒的转染效率[图2F, G，以及补充图1A–D，链接：https://links.lww.com/CM9/C528]。为了验证TGFβ促进ITGB6表达的特定机制，我们分析了SMAD4–SMAD2/3信号轴的贡献。在活性TGFβ刺激下，ITGB6的mRNA和蛋白水平显著增加[图2H, I]。同时，在TGFβ刺激下，下游的p-SMAD2和p-SMAD3的表达也得到激活，表明SMAD2/3信号激活增加了ITGB6的表达[图2I]。SMAD2和SMAD3的敲低逆转了TGFβ介导的ITGB6变化[图2J]。接下来，我们使用JASPAR预测与ITGB6基因启动子结合的转录因子，SMAD2的得分最高（11.032363），SMAD3的得分为5.3453355，SMAD4的得分为8.129075[补充表4，链接：https://links.lww.com/CM9/C528]。基于这些预测，我们设计了基于ITGB6启动子上SMAD2结合位点的引物，并使用ChIP-qPCR验证了结合情况。结果显示IgG组和SMAD2组之间存在显著差异[图2K, L]。此外，构建了双荧光素报告基因检测来检测SMAD2启动子的活性。结果表明，在SW1990细胞中，SMAD2敲低导致WT启动子组的荧光素活性降低，而MUT启动子组没有变化。在PANC-1细胞中，激活的TGFβ上调了WT启动子组中的相对荧光素酶活性，但在MUT启动子组中则没有这种效应。这些结果表明SMAD2直接结合到ITGB6启动子上的特定DNA序列上，从而激活ITGB6的转录[图2M，N]。图2：SMAD2结合到ITGB6启动子上以促进其表达。(A) TCGA数据库中PC患者TGFβ通路中ITGB6表达的GSEA结果。(B) SMAD4 WT PC患者TGFβ通路中ITGB6表达的GSEA结果。(C) SMAD4 MUT PC患者TGFβ通路中ITGB6表达的GSEA结果。(D和E) 不同PC细胞系中ITGB6和SMAD4的mRNA和蛋白质表达水平。(F和G) 通过Western blotting检测验证了ITGB6的敲低和过表达效果。(H) 用活性TGFβ处理的PANC-1和SW1990细胞中ITGB6的表达，通过qRT-PCR检测。(I) 用活性TGFβ处理的PANC-1和SW1990细胞中TGFβ通路蛋白和ITGB6的表达，通过Western blotting检测。(J) 在敲低SMAD2和SMAD3后，用活性TGFβ处理的PANC-1和SW1990细胞中ITGB6的表达。(K) 来自JASPAR数据库的预测结合序列。(L) ChIP-qPCR显示SMAD2结合到预测的ITGB6结合位点的能力。(M) 荧光素酶报告基因质粒的示意图。(N) SW1990和PANC-1细胞中荧光素酶报告基因质粒转染的结果。* P <0.05；? P <0.01；? P <0.001。ChIP：染色质免疫沉淀；GAPDH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶；GSEA：基因集富集分析；IgG：免疫球蛋白G；ITGB6：整合素β6亚单位；NC：阴性对照；NES：标准化富集评分；OE：过表达；pSMAD2：针对decapentaplegic同源物的磷酸化母体2；pSMAD3：针对decapentaplegic同源物的磷酸化母体3；RT-qPCR：逆转录定量聚合酶链反应；siRNA：小干扰RNA；SMAD4：针对decapentaplegic同源物4的母体；TCGA：癌症基因组图谱；TGFβ：转化生长因子β；TSS：转录起始位点；WT：野生型。

ITGB6促进胰腺癌（PC）细胞的侵袭、迁移、增殖和抗凋亡能力。为了研究ITGB6是否影响PC的生物学功能，我们使用转孔实验来确定ITGB6对PC细胞迁移和侵袭的影响。在PANC-1细胞中上调ITGB6显著增加了迁移和侵袭的细胞数量[图3A]。相反，在SW1990细胞中敲低ITGB6显著减少了迁移和侵袭的细胞数量[图3B]。使用SRB实验评估了PC细胞的增殖，结果显示ITGB6促进了PC细胞的增殖[图3C，D]。此外，细胞凋亡实验的结果表明ITGB6增加了PC细胞对凋亡的抵抗能力[图3E，F]。

ITGB6通过激活TGFβ改变肝微环境。随后，我们构建了具有稳定ITGB6过表达的PANC-1细胞系用于体内实验[补充图1E，https://links.lww.com/CM9/C528]。使用具有稳定ITGB6过表达的PANC-1细胞在裸鼠体内构建了皮下异种移植肿瘤[图4A]。植入后第18天，处死小鼠，并直接比较了两组的肿瘤体积和重量[图4B，C]。结果表明ITGB6在体内促进了肿瘤生长。先前的研究表明ITGB6可以在肺纤维化和肺气肿中激活TGFβ[32,33]。因此，我们研究了这种效应是否也存在于PC中。将皮下肿瘤组织匀浆，统一量化总蛋白含量，并测量组织样本中的活化TGFβ和总TGFβ水平。结果显示ITGB6-OE组织样本中的活化TGFβ显著增加，证实了其TGFβ激活作用[图4D]。利用WGCNA分析，我们为TCGA数据库中的PC患者构建了一个TGFβ共表达网络。选择β = 6的软阈值来构建所有基因对的相似性，并使用动态树切割算法生成六个不同颜色的基因模块[图4E，F]，将相关模式绘制为热图[图4G]。在这六个模块中，绿色模块与TGFβ的相关性最高[图4H]。GO富集分析显示在胶原纤维组织和细胞外基质等过程中有显著富集，表明TGFβ对微环境中的成纤维细胞有影响[图4I]。最近的研究表明TGFβ促进了肝脏转移灶的形成[34]；因此，我们假设由PC细胞表达的ITGB6可以通过激活TGFβ来改变肝微环境。GSEA阐明了ITGB6与转移途径之间的关系[图4J]。接下来，我们通过脾脏注射构建了PC肝转移小鼠模型[图4K]。模型构建四周后，体内成像显示稳定上调ITGB6表达促进了PANC-1细胞的肝转移能力[图4L，M]。与对照组相比，ITGB6-OE组表现出显著更多的肝转移灶[补充图2A，https://links.lww.com/CM9/C528]。

ITGB6通过激活TGFβ促进PC细胞在肝脏中的定植和生长。首先，我们收集了ITGB6-OE PC细胞和对照细胞的上清液，并观察到ITGB6-OE PC细胞上清液中TGFβ的激活增加[图5A，B]。随后，将ITGB6-OE PANC-1和SW1990细胞与LX-2细胞共培养，并量化了LX-2上清液中活化TGFβ和总TGFβ的水平。结果表明ITGB6-OE PC细胞可以在LX-2细胞中激活TGFβ[图5C，D]。从共培养的LX-2细胞中提取总蛋白，结果显示ITGB6-OE PC细胞促进了LX-2细胞中纤维连接蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，表明了其激活LX-2的作用[图5E]。此外，磷酸化SMAD2和SMAD3的表达也上调[图5E]。此外，IHC证实了ITGB6-OE PC细胞对小鼠肝转移灶中HSC的激活作用[图5F]。总之，这些结果表明ITGB6-OE PC细胞通过激活LX-2细胞中的TGFβ–SMAD2/3途径，促进了纤维连接蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，从而促进了PC细胞的定植和生长。

ITGB6单克隆抗体延缓了PC的肝转移。使用WT PANC-1细胞构建了PC肝转移模型。模型建立后，实验组的小鼠每周接受ITGB6单克隆抗体注射（3 mg/kg），而对照组则接受相同频率和剂量的PBS注射[图6A]。在模型建立后3周和5周进行的体内成像显示，ITGB6单克隆抗体延缓了PC的肝转移[图6B和补充图2B，https://links.lww.com/CM9/C528]。肝组织切片的IHC分析显示，ITGB6抗体治疗也减弱了HSC的激活[图6C]。总之，TGFβ通过SMAD2/SMAD3途径促进SMAD4 WT PC细胞中ITGB6表达的增加。ITGB6表达增加的PC细胞通过血液流动进入肝脏，在HSC表面激活TGFβ，进一步刺激HSC的激活。这种激活促进了纤维连接蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，改变了肝微环境，促进了PC细胞的进一步定植和生长。因此，抑制ITGB6的表达或功能可能代表了一种治疗PC肝转移的新策略[图6D]。这一过程涉及复杂的信号通路，这些通路促进了恶性肿瘤在肝脏内的转移灶形成和生长[38,39]。研究表明，由活化的肝干细胞（HSCs）产生的富含纤维连接蛋白（fibronectin）的微环境通过提供结构支持和生化信号来促进肿瘤细胞的定植和增殖，从而支持肝脏转移灶的形成[39–41]。针对肝干细胞、纤维连接蛋白与肿瘤细胞之间的相互作用可能为预防或治疗肝脏转移提供治疗潜力。越来越多的研究表明，TGFβ信号通路在调节细胞增殖、迁移和凋亡方面起着关键作用，并且在人类纤维化疾病和癌症的发展中具有重要意义[42,43]。在正常组织和癌症早期阶段，TGFβ具有抑制肿瘤的作用；然而，随着癌症的发展，TGFβ会促进肿瘤细胞的侵袭、转移以及免疫逃逸。鉴于TGFβ的双重作用，靶向治疗需要精确调控，以避免其促进肿瘤侵袭和转移的不良反应。ITGB6在大多数正常健康组织中的表达水平较低，但在癌症和纤维化等疾病中通常会上调。其表达与疾病进展和不良预后密切相关。多项研究显示，ITGB6的高表达与多种癌症的严重程度相关，包括肺癌[44]、乳腺癌[14]、结直肠癌[45]、口腔癌[46]、胆管癌[47]、食管癌[48]、宫颈癌[49]和卵巢癌[50]。例如，在肺癌中，ITGB6可以介导上皮间质转化（EMT）并激活下游粘附通路，从而促进肿瘤细胞的侵袭和迁移[44,51]。此外，ITGB6通过TGFβ–SOX4通路驱动三阴性乳腺癌的免疫逃逸[14]。这些发现强调了ITGB6作为癌症治疗靶点的重要性。我们的研究深入探讨了TGFβ和ITGB6在胰腺癌（PC）肝脏转移中的作用及其相互作用机制。我们发现，在具有SMAD4野生型（WT）基因的胰腺癌患者中，TGFβ–SMAD2/3信号通路对于调节ITGB6的表达至关重要。TGFβ通过促进ITGB6的表达来增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。另外，过表达ITGB6的胰腺癌细胞通过激活肝干细胞改变了肝脏微环境，为胰腺癌细胞在肝脏中的定植和生长创造了有利条件。本研究还展示了ITGB6单克隆抗体在抑制胰腺癌肝脏转移方面的潜力。体内实验模型证实，该抗体显著延缓了肝脏转移的进展，并通过减少肝干细胞的激活来抑制肿瘤微环境的促肿瘤效应。这些发现为开发新的抗转移疗法提供了重要的实验证据。总之，本研究不仅阐明了TGFβ在胰腺癌肝脏转移中的作用机制，还强调了ITGB6作为治疗靶点的潜力，为未来的临床应用和药物开发奠定了理论和实验基础。未来的研究应探讨如何根据患者的具体ITGB6和SMAD4表达状态精确调控这一信号通路，以优化治疗策略，包括研究ITGB6单克隆抗体与其他治疗方法（如化疗、放疗或其他靶向药物）的联合使用。此外，在具有SMAD4突变的胰腺癌患者中，确定ITGB6的上游调控因子仍然是一个关键问题。此外，评估胰腺癌原位组织中ITGB6的表达是否可作为预测肝脏转移的生物标志物，需要进一步深入研究。

**资助**
本研究得到了以下机构的资助：中国医学科学院创新医学科学基金（CIFMS）（编号2021-I2M-1-002）、国家级高水平医院临床研究资金（编号2022-PUMCH-D-001和2022-PUMCH-B-004）、北京市健康改善与研究基金（CFH）（编号2024-2-4017）、国家自然科学基金（编号82173074）、北京市自然科学基金（编号7232127）、国家重大疾病多学科协作诊疗能力建设项目以及中央高校基本科研业务费（编号3332022114）。

**利益冲突**
无。