肖旭明方剂通过促进髓鞘再生和减轻白质损伤来减轻脑缺血-再灌注损伤

《Journal of Ethnopharmacology》：Xiao Xu Ming Decoction attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury by promoting remyelination and reducing white matter injury

　　杨颖琳|刘业树|柴贺|丛焕|刘青波|王天林|杨京宇
中国人民解放军总医院医疗物资中心药房，北京，中国

**摘要**
民族药理学意义：
肖旭明方（XXMD）是一种记载在《备急千金药方》中的经典中药方剂，传统上用于中风的治疗。尽管研究表明XXMD通过多种药理活性促进脑缺血后的神经功能恢复，但其确切的治疗机制尚未完全阐明。

**研究目的**
本研究旨在阐明XXMD对抗脑缺血-再灌流损伤的保护机制，重点关注其在促进髓鞘再生和减轻白质损伤（WMI）方面的作用。

**材料与方法**
采用液相色谱-质谱（LC-MS）技术对XXMD进行全面的化学分析和质量评估。通过缝合方法建立了短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）小鼠模型。通过神经行为测试评估XXMD对神经功能障碍、运动障碍和认知缺陷的影响。此外，还进行了免疫印迹、luxol fast blue染色和免疫荧光实验以探讨XXMD减轻WMI的机制。

**结果**
我们的研究表明，连续42天通过腹腔注射XXMD（60和120 mg/kg）可显著降低tMCAO小鼠的神经缺陷评分，逆转旋转棒实验时间缩短的现象，减少转向测试中的右转次数，降低步态异常系数，改善新物体识别测试中的辨别记忆能力，并增强Morris水迷宫测试中的空间学习能力。进一步研究表明，连续28天注射XXMD（60和120 mg/kg）可显著逆转胼胝体和纹状体中髓鞘密度的下降，改善髓鞘纤维紊乱，恢复纹状体中髓鞘碱性蛋白（MBP）和神经丝-200（NF200）的表达，并减轻小胶质细胞的活化。

**结论**
XXMD可显著改善tMCAO诱导的脑缺血-再灌流损伤小鼠模型中的神经功能障碍、运动障碍和认知衰退。其保护机制可能涉及促进髓鞘再生及随后减轻白质损伤（WMI）。

**引言**
中风是一种由局部脑缺血或出血引起的急性神经系统疾病，主要分为脑缺血性中风（CIS）和出血性中风（Hilkens等，2024年）。缺血性中风是最常见的类型，通常由急性动脉阻塞导致局部缺血、能量衰竭和随后的组织梗死。临床上，缺血性中风患者常表现出一系列神经缺陷，包括偏瘫、构音障碍、感觉丧失、失语症和视力障碍（Feigin等，2022年）。虽然恢复血流（再灌流）对组织挽救至关重要，但会引发一系列复杂的生化反应，包括兴奋毒性、线粒体功能障碍、氧化应激、神经炎症、自噬和钙超载。这种病理过程称为脑缺血-再灌流（I/R）损伤，会加剧初始脑损伤并恶化神经功能结果（Kumar Saini和Singh，2024年）。全球范围内，中风仍是主要死亡原因之一。2021年，中风导致730万人死亡，占总死亡人数的10.7%，位列全球第三大死因。尤其在年轻人群中，过去十年18-50岁人群的缺血性中风发病率增加了50%（Collaborators，2024年）。

脑白质主要由髓鞘、髓鞘化轴突和少突胶质细胞（OLs）组成，连接不同脑区并实现快速神经冲动传导。白质比灰质更容易受到缺血损伤，在中风后遭受更严重的损害（Jia等，2023年）。白质损伤（WMI）是缺血性中风的常见病理后果，是导致广泛组织损伤和不良神经功能结果的主要原因。WMI的主要形式包括OL损伤和随后的脱髓鞘（Matute等，2013年）。WMI在缺血后以动态方式发展，通常在缺血后24小时内出现，在第7天达到高峰，伴有炎症反应增强和神经元及少突胶质细胞死亡增加。tMCAO后第14天，WMI进一步恶化，表现为髓鞘结构明显损伤和髓鞘碱性蛋白（MBP）及神经丝-200（NF200）表达减少。尽管此阶段少突胶质前体细胞（OPCs）和成熟OLs数量增加，但其功能能力仍受损，导致修复不足（Jia等，2023年）。tMCAO后第28至35天，髓鞘结构继续恶化，伴有持续的WMI和认知缺陷（Jia等，2024年；Zhang等，2024年）。因此，旨在减轻神经元损失、缓解WMI和促进慢性髓鞘再生的治疗策略有望改善缺血性中风后的长期神经功能恢复。

中医在治疗中风方面有着悠久的历史，包括对中风病因、进展、分类和治疗方法的全面了解。近年来，源自传统中药的小分子天然产物作为多靶点治疗药物受到了广泛关注，如黄芩素、人参皂苷Rb1和银杏内酯B等化合物被证明可通过调节Nrf2抗氧化通路、抑制TLR4/NF-κB信号通路以及促进小胶质细胞从促炎状态M1向修复状态M2的转化发挥神经保护作用（Li等，2025年；Liu等，2025年）。尽管这些临床前研究结果令人鼓舞，但由于血脑屏障通透性差、口服生物利用度低以及生物活性成分和作用机制研究不足，许多天然药物的临床转化仍面临挑战。

肖旭明方（XXMD）是一种由12种中药组成的经典方剂，首次记载于唐代的《千金药方》，一千多年来广泛用于中风治疗（Liu等，2021年）。临床上，XXMD具有多种药理作用，包括减轻脑缺血损伤、治疗阿尔茨海默病（AD）和缓解急性肺损伤（ALI）。研究表明，它可通过减少氧化应激、调节线粒体自噬以及抑制凋亡和炎症反应促进脑缺血-再灌流后的神经功能恢复（Lan等，2025年；Li等，2020年；Liu等，2021年；Shen等，2020年）。尽管关于XXMD治疗中风患者的临床报告有限且证据不足，但系统评价显示其对改善神经功能有一定辅助效果（Fu等，2013年）。目前关于XXMD在脑缺血-再灌流后对WMI影响及其机制的研究仍有限。

**方法**
本研究采用液相色谱-质谱（LC-MS）分析XXMD的化学成分，该技术不仅用于草药制剂的质量控制，还有助于阐明其药效物质基础，为未来的机制研究提供依据。tMCAO小鼠模型用于评估XXMD对缺血后神经功能恢复及减轻白质和纹状体损伤的效果。预期这些发现将加深对XXMD在脑缺血-再灌流损伤中治疗机制的理解。

**试剂与设备**
抗MBP抗体（Cat# ab7349）、驴抗羊Alexa Fluor 555（Cat# ab150134）、驴抗鼠Alexa Fluor 555（Cat# ab150110）、驴抗鼠Alexa Fluor 647（Cat# ab150107）、驴抗兔Alexa Fluor 647（Cat# ab150075）、羊抗兔Alexa Fluor 555（Cat# ab150078）购自Abcam（英国剑桥）。抗APC抗体（Cat# OP80）、抗NeuN抗体（Cat# MAB377）、抗OLIG2抗体（Cat# AB9610）购自Merck Millipore（美国马萨诸塞州伯灵顿）。

**数据分析**
采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS对XXMD的化学成分进行全面的质谱分析，提供高分辨率和多级质谱数据，支持后续的质量控制、药理学评价和机制研究。图1显示了XXMD在正离子模式下的总离子色谱图。通过提取特征片段离子并验证保留时间一致性来鉴定色谱峰。

**讨论**
本研究系统地分析了XXMD的化学成分及其对抗脑缺血-再灌流损伤的治疗潜力。利用tMCAO小鼠模型评估了XXMD的时间和剂量依赖性效果。结果表明，XXMD治疗可显著改善受伤后42天内的神经、运动和认知缺陷。此外，XXMD能有效减轻脑缺血后的WMI。这种保护作用可能是通过维持白质完整性和调节相关机制实现的。

**作者贡献声明**
刘青波：验证、资源、方法学、研究。
王天林：写作-审稿与编辑、监督、项目管理、概念构思。
杨京宇：写作-审稿与编辑、监督、项目管理、概念构思。
柴贺：可视化、验证、研究、形式分析。
丛焕：验证、方法学、研究。
杨颖琳：写作-初稿撰写、可视化、资金获取。
刘业树：写作-审稿与编辑。

**参考文献**
Chen等，2020；Liu等，2019。

**伦理声明**
所有实验和程序均遵循沈阳药科大学动物护理和使用伦理委员会的指南，动物使用许可号为SCXK (liao) 2020-0001。

**利益冲突声明**
本手稿尚未在其他地方全部或部分发表，也未接受其他期刊的审稿。本研究符合实验动物护理使用的机构规范。所有作者均同意提交至贵刊。不存在需要声明的的利益冲突。

**数据可用性**
数据可应要求提供。

**资助**
本研究由中国国家自然科学基金（82304739）资助。

**修改后的神经严重度评分（mNSS）标准**
**测试类别** | **评分**
**运动测试** | **尾巴悬吊（0-3）** | **前肢屈曲** | **后肢屈曲** | **头部在30秒内向垂直轴移动超过10°**
**放置在地面上（0-3）** | **正常行走** | **无法直线行走** | **向瘫痪侧旋转** | **倒在瘫痪侧**
**感觉测试（0-2）** | **放置测试（视觉和触觉测试）**：伸展缓慢或无法完成