Eucommiae Folium（欧洲酸模叶）与 Gardeniae Fructus（栀子果）这对草药组合通过非经典的下游 PI3K/AKT 信号通路增强了海马区的 PACAP（精氨酸加压素受体相关肽）介导的神经可塑性，从而发挥抗抑郁作用

《Journal of Ethnopharmacology》：Herb pair of Eucommiae Folium and Gardeniae Fructus enhanced hippocampal PACAP-mediated neuroplasticity via the non-classic downstream PI3K/AKT signaling to exert antidepressant effects

　　英英 | 吴张杰 | 刘瑞宇 | 宋成豪 | 邓明雪 | 吴长宇 | 赖世雄 | 谭京文 | 傅振臻 | 彭珊星 | 黄娜莉 | 彭宇涵 | 郑巧薇 | 刘易瑶 | 黄泽平 | 韩明志 | 郑文龙 | 谭俊 | 黄子豪 | 谢慧军 | 陈刚

**摘要**

**民族药理学意义**
传统的抗抑郁疗法需要长期服药，这可能导致多种不良反应，包括骨质疏松症。研究表明， Eucommiae Folium（EF）可以缓解抑郁症状并改善骨质疏松。Gardeniae Fructus（GF）也具有抗抑郁潜力，临床上常与EF一起使用。这种草药组合能够协同且安全地发挥抗抑郁作用。

**研究目的**
PACAP是一种新型的抗抑郁靶点，通过增强神经可塑性发挥作用。本研究旨在探讨EF和GF（EG）对抑郁症的协同作用，并验证PACAP及其下游信号传导的机制。

**材料与方法**
在CUMS（慢性应激模型）和LPS（脂多糖）抑郁模型中证实了EG的抗抑郁效果，以氟西汀作为阳性对照。利用网络药理学分析揭示相关机制。通过免疫印迹和免疫荧光等技术检测关键信号通路，并通过病毒介导的RNAi敲低PACAP进一步验证这些结果。

**结果**
EG在抗抑郁反应中表现出协同效应，其效果与氟西汀相当。EG可缓解CUMS和LPS模型中的抑郁和焦虑症状。网络药理学分析显示PI3K/AKT/mTOR信号通路起着重要作用，这一作用在EG处理后的海马区得到验证。此外，潜在的上游激活因子PACAP的表达也上调，同时突触蛋白PSD95和Synapsin-1的表达也增强。EG减少了海马区Iba-1+微胶质细胞的数量及其细胞面积，并增加了BDNF+细胞的数量。重要的是，海马区PACAP的敲低减弱了EG的抗抑郁效果以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的作用。

**结论**
Eucommiae Folium和Gardeniae Fructus的草药组合通过激活海马区的PACAP及其下游PI3K/AKT/mTOR信号通路，协同发挥抗抑郁作用。

**引言**
重度抑郁症（MDD）是一种全球广泛流行的精神疾病（Marwaha等，2023；McGrath等，2023）。研究表明，传统抗抑郁药（如SSRIs）的不良反应显著影响患者的用药依从性，常见副作用包括睡眠障碍和性功能障碍（Oliva等，2024；Pillinger等，2023）。此外，抑郁症的复发率很高，约85%的康复患者会出现复发（Braillon等，2023；Korchia等，2025）。因此，抗抑郁药通常需要长期使用，导致不良反应的发病率和复发率显著增加，包括骨质疏松和骨折风险（Rajha等，2025；Zhao等，2024）。开发安全有效的抗抑郁药靶点至关重要。
中医在治疗抑郁症中应用广泛，为发现新的抗抑郁生物靶点提供了重要依据（Wang等，2022；Zhang等，2022，2024）。Eucommia ulmoides树皮是一种传统药材，需要剥去树皮，这可能导致树木死亡（Zhu和Sun，2018）。Eucommiae Folium（EF）作为Eucommia ulmoides的叶子，已成为一种有前景的药材资源（Peng等，2024；Wang等，2019）。EF在多种脑疾病的治疗中具有临床应用价值，包括抑郁症、癫痫和帕金森病（Li等，2025；Wu等，2016；Zhang等，2023；Zhang和Park，2025）。最新研究表明，EF含有高水平的黄酮类化合物（其中槲皮素的含量是树皮的三倍）和苯丙素类化合物（Guan等，2021；Wang等，2023），这些物质也被证明对治疗骨质疏松等传统抗抑郁药的常见副作用有效（Yin等，2025；Yun等，2024；Zhang等，2012）。Gardeniae Fructus（GF）具有明显的抗抑郁潜力（Li等，2020；Tian等，2024；Zhang等，2022）。GF属于“寒性”草药，在中医临床实践中通常不单独使用高剂量和长期给药（Ren等，2023；Tian等，2022；Wang等，2022），因此常与其他草药结合使用以降低剂量并提高安全性。多项研究表明，GF和具有“温性”的EF可能是治疗中风和帕金森病等疾病的关键成分（Lei等，2025；Liu等，2015）。然而，EF和GF是否具有协同抗抑郁作用及其机制尚不明确。

**神经可塑性损伤**
神经可塑性损伤是抑郁症发生和发展的核心机制（Price和Duman，2020；Tartt等，2022）。越来越多的证据表明，垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）在神经可塑性和应激反应调节中起着关键作用（Cherait等，2023；Jansen等，2025）。经典中药配方Yueju Pill的快速抗抑郁效果依赖于GF成分（Ren等，2023；Zhang等，2022）。GF的主要活性成分是刺激PACAP（Zhang等，2022）。不同抑郁动物模型中的海马区PACAP浓度显著低于正常对照组（Gilmartin和Ferrara，2021；Zhang等，2024）。PACAP通过激活下游信号通路来调节突触可塑性。在其典型信号通路中，PACAP与其受体PAC1结合，触发cAMP/PKA信号级联反应，从而通过转录机制诱导脑源性神经营养因子（BDNF）的上调（Jansen等，2025；Zhang等，2022）。PAC1受体拮抗剂可抑制氟西汀对MAPK通路的激活作用（Ren等，2023；Zhang等，2024）。此外，新证据表明PACAP也可能激活非典型的PI3K/AKT/mTOR信号通路，这可能有助于快速增强神经可塑性。本研究旨在探讨EG在低剂量（临床等效剂量）下是否具有协同抗抑郁效果，以及其减少剂量和提高安全性的优势，并进一步阐明PACAP及其下游信号通路的机制。

**动物实验**
8周大的雄性C57BL/6N小鼠（体重22–25克）在卫生动物设施中适应一周，每笼5–6只，处于受控环境下（温度：22±2°C，湿度：40%–60%，12小时光照-黑暗周期），自由进食、饮水和使用玉米芯垫料。所有动物护理和实验方案均符合济南大学批准的《实验室动物护理和使用指南》（批准号：20240710-10）。

**药物和草药制备**
通过正负电喷雾离子化（ESI）模式的液相色谱-质谱（LC-MS）分析，展示了所研究草药提取物的复杂化学组成（图1）。基于保留时间（RT）和分子离子检测，鉴定出关键成分，包括柠檬酸（RT 2.70分钟）、Geniposidic酸（RT 7.70分钟）、Perillic酸（RT 8.42分钟）。

**讨论**
本研究探讨了Eucommiae Folium和Gardeniae Fructus组合在CUMS或LPS诱导的抑郁模型中的协同抗抑郁作用，并探讨了海马区PACAP表达及其下游信号通路的机制。为了模拟临床情况，我们采用了符合《中国药典》（2020年版）的剂量梯度，还包括了EG临床等效剂量的一半和三分之二。

**作者贡献声明**
英英：撰写——原始草案、方法学、数据分析、概念化。
张杰吴：撰写——原始草案、验证、方法学、数据分析、概念化。
刘瑞宇：撰写——原始草案、方法学、数据分析、概念化。
宋成豪：验证、方法学、数据分析、概念化。
邓明雪：验证、数据分析。
吴长宇：验证。
赖世雄：方法学。
谭京文：验证。
傅振臻：方法学。
彭珊星：方法学。

**伦理声明**
所有动物护理和实验程序均严格遵循《实验室动物护理和使用指南》，并得到济南大学动物护理和使用委员会（IACUC）的正式批准（批准号：20240710-10）。

**资助**
本研究得到国家自然科学基金（82174002、82074305）、贵州医科大学地方性疾病与民族医学重点实验室项目（编号FZSW-2021-001）以及广州市中医药和中西医结合科学技术项目（20262A011007）的支持。

**利益冲突声明**
作者声明与本研究无任何可能构成利益冲突的商业或财务关系。