温度和不同剂量的氟马西尼对鬃狮蜥（Pogona vitticeps）中佐拉姆（midazolam）引起的镇静作用的影响

《Veterinary Anaesthesia and Analgesia》：Effects of temperature and different doses of flumazenil on sedation induced by midazolam in bearded dragons (Pogona vitticeps)

　　雷娜塔·H·皮尼奥 | 迈克尔·滕 | 玛雅·里德 | 凯尔西·查普曼 | 丹尼尔·S·J·庞
卡尔加里大学兽医学院，加拿大阿尔伯塔省卡尔加里市

**摘要**
**目的**
评估最佳与次优镇静/麻醉温度以及两种氟马西尼剂量对鬃狮蜥（Pogona vitticeps）皮下注射咪达唑仑所引起的镇静效果的影响。

**方法**
共八只健康的鬃狮蜥（13–14个月大）接受了四种不同的处理。所有处理均涉及在前肢颅部皮下注射咪达唑仑（1 mg/kg），并在不同温度条件下进行：（1）最佳温度（28–32°C）（MO：咪达唑仑+生理盐水；MFL：咪达唑仑+氟马西尼0.05 mg/kg；MFH：咪达唑仑+氟马西尼0.1 mg/kg）；（2）次优温度（18–20°C）（MS：咪达唑仑+生理盐水）。实验前（T0）及注射后180分钟内（T10–T180）对动物进行录像。由一位不知情的观察者根据0–12分的镇静量表进行评分。比较同一处理组内的评分（Friedman检验）以及不同处理组间的评分（Wilcoxon检验，随后进行Friedman事后分析）。同时记录动物恢复正常姿势反射（LORR）的能力、心率（HR）和呼吸频率（fR）。

**结果**
最佳温度组与次优温度组之间的镇静评分中位数差异最大为3分，但所有p值均大于0.08；仅在次优温度组中有6只动物的LORR消失。氟马西尼能够降低镇静程度，但MFL组与MFH组之间的评分中位数差异未见显著差异（p值均大于0.63）。最佳温度组的最低心率（次/分钟）为34次，次优温度组分别为40次、44次和19次。

**结论与临床意义**
咪达唑仑（1 mg/kg，皮下注射）可在鬃狮蜥中产生中度镇静效果。与最佳温度相比，次优温度对镇静评分没有显著影响，但会加剧心动过缓。氟马西尼（0.05 mg/kg）可降低镇静评分；将氟马西尼剂量从0.05 mg/kg增加到0.1 mg/kg并未带来额外益处。

**引言**
鬃狮蜥（Pogona vitticeps）是兽医实践中最常见的异国爬行动物之一。与其他爬行动物患者类似，这些动物常需在诊断、小型手术或临床检查时接受镇静或全身麻醉（Gise等，2025年）。咪达唑仑是一种常用的镇静剂，属于苯二氮卓类药物，常单独使用或与其他药物联合使用（Arnett-Chinn等，2016年）。尽管已有研究表明咪达唑仑对多种蜥蜴有效（Bisetto等，2018年；Bressan等，2019年），但其效果因物种而异，且文献中缺乏关于咪达唑仑单独用于鬃狮蜥的临床研究。维持适宜的环境温度（25–35°C）对这类变温动物的麻醉管理至关重要（Mans等，2019年）。尽管最佳实践建议在镇静和麻醉期间提供保温措施（Ferreira和Mans，2022年），但实际临床环境中常常温度较低，尤其是在转运或等待检查期间。因此，了解低温如何影响爬行动物的镇静效果对于改善其麻醉管理至关重要。研究表明低温会显著改变爬行动物的麻醉反应：例如，红耳滑龟（Trachemys scripta elegans）在低温下麻醉更深且持续时间更长（Kischinovsky等，2013年）；球蟒（Python regius）在低温下苏醒延迟且恢复时间延长（Carregaro等，2009年）。这些发现表明温度在调节镇静和麻醉药物效果中起关键作用。长时间未能从镇静中恢复是不希望出现的情况；对于使用咪达唑仑等镇静剂的动物，可以使用氟马西尼等拮抗剂来缩短恢复时间。然而，氟马西尼在爬行动物中的最佳剂量和作用持续时间尚不明确，有时仍可能再次出现镇静效应。

**研究设计**
该研究获得了卡尔加里大学兽医学动物护理委员会的批准（AC23-0132）。研究对象为八只（五雄三雌）13–14个月大的鬃狮蜥，体重平均243 ± 29克。样本量基于先前研究的结果，该研究发现两种处理方式在各时间点的镇静评分中位数差异超过5分（Pinho等，2025年）。根据这些数据，估算出在80%的统计功效水平（α = 0.05）下需至少八只动物才能检测到5分的评分差异（标准差为4分）。采用参数统计方法确定所需样本量。研究报告符合《体内实验动物研究报告指南》（ARRIVE）的要求。

动物被单独饲养在聚氯乙烯饲养箱（91 × 61 × 61 cm）中，每个饲养箱配备加热灯（Halogen Lamp 50W，Arcadia公司）和UVB灯（24瓦，57.2厘米，Arcadia PRO T5 UVB套装）。 daytime温度保持在26–34°C（12小时），夜间温度为26°C。湿度控制在30–40%之间。每只动物都有自己的洞穴、水盘和水槽。饮食包括每日一次的面包虫（Tenebrio molitor）以及每周两次的蔬菜（黄瓜、西兰花、羽衣甘蓝、胡萝卜和红椒）。面包虫在喂食前需用含钙饲料（Maz Hi-Ca Gut Loading Diet，Mazuri Exotic Animal Nutrition，美国）处理24–48小时。只有经过异国动物兽医临床检查确定为健康的动物才被纳入研究。

**实验流程**
采用完全交叉设计，动物按随机顺序接受四种处理（wdww.random.org），每次处理之间间隔14–16天恢复期。为保持随机性，各处理组的动物数量并不均衡。所有处理均通过前肢颅部皮下注射咪达唑仑（1 mg/kg），并在注射后180分钟内监测效果。

**具体处理方式**
所有处理均包括在两个不同温度范围内皮下注射咪达唑仑（1 mg/kg），随后分别进行以下操作：
1. 最佳温度下的镇静/麻醉（28–32°C，MO）：先注射咪达唑仑，30分钟后注射生理盐水；
2. 次优温度下的镇静/麻醉（18–20°C，MS）：先注射咪达唑仑，30分钟后注射生理盐水；
3. 最佳温度下的镇静/麻醉（28–32°C，MFL）：先注射咪达唑仑，30分钟后注射氟马西尼0.05 mg/kg；
4. 最佳温度下的镇静/麻醉（28–32°C，MFH）：先注射咪达唑仑，30分钟后注射氟马西尼0.1 mg/kg。

实验室内温度始终维持在18–20°C。评估在丙烯酸饲养箱（47 × 25 × 21 cm）中进行。为确保实验开始时动物处于目标温度范围内，首先测量了它们的咽部温度。实验前使用250瓦红外加热灯（InterHeat，韩国）调节MO、MFL和MFH组的温度。这种设置允许所有处理（包括MS组）在同一房间内完成。

**测量方法**
在T0（咪达唑仑注射前）、T10–T30（注射后10、20、30分钟）和T40–T180（注射后10、20、30、60、90、120、150分钟）对动物进行评估。使用两台摄像机（Panasonic HC-W570，加拿大安大略省）进行录像。评估内容包括：通过验证的镇静量表（0–12分）评估行为状态（包括LORR持续时间超过5秒的情况）、通过超声多普勒仪（Ultrasonic Doppler Flow Detector，型号811-B，Parks Medical Electronics，美国俄勒冈州）测量心率、通过观察腹腔运动和肩胛间区域皮肤温度确定呼吸频率（fR）。在T0和T180时，通过手动打开龙嘴并固定上颌和下颌来测量咽部温度。使用校准的红外温度计（Fluke，美国华盛顿州）进行温度测量。

**数据分析**
使用Shapiro-Wilk检验评估数据正态性。通过Wilcoxon符号秩检验比较不同温度组之间的镇静评分。通过多重Friedman检验和Dunn事后分析评估氟马西尼的效果。还使用单独的Friedman检验及Dunn事后分析比较T0与其他时间点的评分差异。由于未对所有多重比较进行校正，存在p值偏高的风险和假发现率增加的问题。提供差异的中位数和四分位数范围以反映效应大小。心率（HR）和呼吸频率（fR）以中位数和范围表示。p值小于0.05被视为具有统计学意义。数据分析使用GraphPad Prism软件（版本10.2.0，macOS，美国加利福尼亚州）。

**结果**
所有动物顺利完成所有实验阶段，未出现意外事件。仅在次优温度组中观察到LORR消失。实验后，所有组的动物在两次恢复评估时的镇静评分均为0分。

**温度效应（最佳与次优）**
咪达唑仑注射后，MO组的最大镇静评分出现在T90–T120（5/12），MS组出现在T60（6/12）（图1）。两种处理组的镇静评分均随时间增加，T30后的所有时间点评分差异均≥4分（表1），T30–T180（MO组）及T20–120和T180（MS组）之间存在统计学差异（图1）。尽管在MO和MS之间观察到的中位数差异高达3（表2），但所有p值均大于0.08（图1）。在MS治疗下，LORR（恢复知觉时间）发生在75%（6/8）的动物中，具体时间点包括：T20（n = 2）、T40（n = 1）、T50（n = 3）、T60（n = 2）和T90（n = 3）。