《Biochemistry and Biophysics Reports》：Dysregulated serum levels of human tissue kallikreins, hK7 and hK10, as potential biomarkers of asthma
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背景：哮喘是一种全球高发的炎症性疾病，其诊断与治疗方法有限。目的：本研究旨在探讨hK7与hK10在哮喘进展中的可能作用，并评估其作为哮喘潜在生物标志物的价值。方法：共74名哮喘患者与99名正常对照者参与研究。采用时间分辨免疫荧光（TRIF）间接反滴定（bt）E
背景：哮喘是一种全球高发的炎症性疾病，其诊断与治疗方法有限。目的：本研究旨在探讨hK7与hK10在哮喘进展中的可能作用，并评估其作为哮喘潜在生物标志物的价值。方法：共74名哮喘患者与99名正常对照者参与研究。采用时间分辨免疫荧光（TRIF）间接反滴定（bt）ELISA测定两组中hK7与hK10的表达水平，并使用SPSS进行统计分析。结果：结果表明，与正常对照相比，哮喘患者中hK7表达上调、hK10表达下调。进一步分析显示hK7与hK10的表达与患者年龄无显著相关性。结论：本研究记录了hK7与hK10作为哮喘生物标志物的真实或客观表现。这些hK的异常表达有助于设计诊断与治疗方案以控制哮喘。相关因素需予以考虑，因其会影响两种KLK蛋白的表达。未来需进一步探索并利用KLK蛋白作为治疗靶点。
一、研究背景、问题与目的
哮喘是支气管气道最常见的炎症性疾病，全球约3亿人受累，其发病与死亡风险高，严重影响生活质量。当前哮喘缺乏单一公认的诊断与预后技术及理想生物标志物，现有标志物如血清IgE、呼出气一氧化氮分数（FeNO）等在预后、诊断与治疗中的应用仍存争议。激肽释放酶（Kallikreins, KLKs）是一类丝氨酸蛋白酶家族，在气道反应管理中具有重要作用，其中多种成员（如KLK1、KLK3、KLK13、KLK14）已被证实在哮喘发病机制中扮演角色。然而，迄今尚无研究探索激肽释放酶相关肽酶7（KLK7，具有类胰凝乳蛋白酶活性）与激肽释放酶相关肽酶10（KLK10，具有类胰蛋白酶活性）在哮喘中的作用，亦未见关于哮喘患者血清hK7与hK10水平的报道。鉴于KLK家族成员在哮喘及其他炎症疾病中的重要性，本研究旨在筛查哮喘患者血清中hK7与hK10的差异表达，评估其作为哮喘生物标志物的潜力，并假设巴基斯坦哮喘患者血清hK7与hK10水平失调。
二、研究设计、方法与样本来源
本研究采用病例对照设计，共纳入74名临床诊断的非过敏性哮喘患者（女性33名，男性41名）与99名健康正常对照者。血清样本通过时间分辨免疫荧光（TRIF）间接反滴定（bt）ELISA进行hK7与hK10表达水平的定量检测。该方法通过优化捕获抗体浓度、建立校准曲线（），确保了检测的灵敏度、精度与线性。数据统计分析采用SPSS 18.0与MedCalc 12.2.0.0，运用D'Agostino-Pearson检验评估数据正态分布，采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验比较组间差异，并通过ROC曲线与逻辑回归分析评估生物标志物的诊断效能。
三、研究结果
1. 血清hK7与hK10定量结果：TRIF bt-ELISA分析显示，与正常对照相比，哮喘患者血清hK7水平显著上调（p<0.0001），hK10水平显著下调（p<0.0001）（）。
2. 基于性别、年龄、家族史、病程与病毒感染的表达分析：
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性别：在女性与男性哮喘患者中，hK7均显著上调，hK10均显著下调（；）。ROC曲线分析表明，hK7升高与hK10降低可作为区分男女哮喘患者与健康对照的有效诊断工具（p<0.0001）（；）。单变量与双变量逻辑回归分析进一步验证hK7上调与hK10下调是预测哮喘的独立生物标志物。
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年龄：患者年龄范围为11-70岁。hK7表达在≤40岁女性与≤30岁男性患者中显著上调（p<0.05），hK10在21-30岁女性与11-20岁男性患者中显著下调。相关性分析显示年龄与hK7呈弱负相关，与hK10无显著相关。
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家族史：无论有无哮喘家族史，患者hK7均显著上调，hK10均显著下调。
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病程：女性患者中hK7上调与hK10下调与病程无关；男性患者中，自幼患病或病程1-10年者hK7显著上调，病程1-5年者hK10显著下调。
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HBV/HCV感染：在HBV/HCV阳性男女患者中，hK7显著上调；hK10在HBV/HCV阳性男性患者中显著下调，在女性中变化不显著。
四、讨论与结论
讨论：
本研究首次报道了哮喘患者血清hK7上调与hK10下调。此前虽无直接证据表明hK7与哮喘相关，但多项研究提示hK7通过炎症机制参与疾病进程。例如，在炎症性皮肤病中，hK7被Th2细胞因子（如IL-4）诱导表达，而Th2细胞因子在哮喘炎症中起核心作用，可能解释本研究中hK7上调。激肽释放酶生成的缓激肽与卡里丁是已知的炎症介质，参与气道感觉神经激活与慢性气道重塑，与哮喘病理密切相关。hK10在多种癌症中表现不一，既有上调也有下调，但在动脉粥样硬化等炎症疾病中其下调被视为抗炎蛋白的表现，与本研究结果一致。此外，研究还分析了性别、年龄、家族史、病程与病毒感染对hK表达的影响。hK7上调与hK10下调在男女患者中均显著，且与年龄相关性较弱，表明二者可作为年龄无关的哮喘生物标志物。家族史、HBV/HCV感染与hK表达异常相关，提示这些因素可能通过调控hK表达影响哮喘进程。
结论：
本研究报道了巴基斯坦哮喘患者中hK7与hK10蛋白的表达失调，表明hK7与hK10的表达水平变化可作为哮喘的诊断生物标志物。未来需进一步探索hK7与hK10的治疗潜力。
