外周血双重阴性T细胞百分比作为预测和诊断流感孕妇肺炎的可靠生物标志物

《International Immunopharmacology》：Peripheral blood double-negative T cells percentage as a reliable biomarker for the prediction and diagnosis of pneumonia in pregnant women with influenza

　　

卢黄|翟宏波|岑盼盼|徐向飞|张凌剑|金杰|冷建航|童金毅|余立飞

中国浙江省杭州市西湖学院医学院附属杭州第一人民医院传染病科，邮编310006

摘要

背景

孕妇患流感相关肺炎的风险较高，但目前缺乏早期预测性生物标志物。

目的

本研究旨在区分甲型和乙型流感感染，并确定可靠的诊断生物标志物，以预测孕妇是否会发生肺炎。

研究设计

本研究共纳入120名实验室确诊为流感的孕妇，其中60例为甲型流感（H1N1），60例为乙型流感（Victoria）。收集了临床数据，并进行了实验室检测，以评估外周血TBNK细胞亚群、CD64表达和细胞因子水平。通过单变量和多变量逻辑回归分析，识别孕妇流感相关的肺炎风险因素，并使用接收者操作特征曲线下面积（AUROC）评估诊断性能。

结果

与乙型流感感染者相比，甲型流感感染者更常出现咳嗽症状，但痰液产生较少，喉咙痛的情况较少。此外，他们的多项炎症标志物水平显著升高，包括白细胞计数、中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）、IFN-γ、中性粒细胞CD64（nCD64）指数、单核细胞CD64（MoCD64）和多形核中性粒细胞CD64（PMNCD64）。单变量分析和多变量分析进一步确定DNT%和IL-2是预测孕妇流感合并肺炎的独立指标，其比值比（95% CI）分别为1.59（1.00–2.53）和0.37（0.14–0.98）。在所评估的生物标志物中，DNT%的诊断性能最高，AUROC为0.8925（P < 0.0001），最佳临界值为1.66，灵敏度为90%，特异性为91%，阴性预测值（NPV）为98%。

结论

甲型和乙型流感感染者表现出不同的临床和免疫特征。无论是否给予奥司他韦治疗，DNT%升高和IL-2水平降低均能独立预测肺炎的发生。在所有评估的生物标志物中，DNT%的诊断准确性最高，表明其可作为识别有肺炎风险的孕妇的可靠早期指标。

引言

季节性流感给全球医疗系统和经济带来了巨大负担。据估计，每年全球约有10亿人感染流感，其中300万至500万人出现重症，29万至65万人死于呼吸系统并发症[1]。

孕妇被认为是流感相关并发症的高风险群体[2]。与非孕妇相比，孕妇感染流感的不良结局风险显著增加，如肺炎、早产、自然流产和住院率升高[3][4][5]。在流行的流感病毒株中，甲型流感病毒（尤其是H1N1亚型）通常比乙型流感病毒导致更严重的临床后果[6][7][8]。然而，关于孕妇甲型和乙型流感感染临床特征和免疫反应的比较数据仍然有限。目前，缺乏可靠的生物标志物来识别有肺炎风险的孕妇，这是一个亟待解决的临床需求。

目前，诊断孕妇流感进展为肺炎的主要方法依赖于临床症状、传统生物标志物（如CRP、淋巴细胞计数和中性粒细胞计数）以及异常影像学检查结果（如肺超声显示的双侧炎症变化[9]）。然而，这些指标通常仅在疾病进展到一定程度后才会出现异常。这种诊断滞后凸显了迫切需要更敏感和特异的早期免疫标志物，以便在感染初期识别高风险孕妇。

双阴性T（DNT）细胞是一类缺乏CD4和CD8核心受体的成熟外周T淋巴细胞，约占循环T细胞的1–3%，近年来引起了越来越多的科学关注[10][11][12][13]。DNT细胞在移植耐受、自身免疫、恶性肿瘤和传染病等多种情况下表现出保护性免疫调节功能[14]。来自鼠模型和甲型流感病毒（IAV）肺炎患者的临床观察表明，DNT细胞可能在减轻疾病进展中发挥重要作用，与其肺部受累程度无关[15][16][17]。在孕妇中，DNT细胞在母体-胎儿界面上具有独特的免疫调节功能，有助于维持妊娠至足月。在母体感染期间，DNT细胞显著扩增并保持完全的效应功能。虽然这种激活有助于抗病毒防御，但DNT细胞介导的过度免疫反应也可能增加免疫病理的风险[18][19]。肺炎仍然是孕妇流感感染中最严重和危及生命的并发症之一，但目前尚不清楚这种肺炎的发展是否与DNT细胞的扩增有关。此外，DNT细胞作为肺炎发作预测性生物标志物的潜在作用尚未得到充分研究，需要严格的临床研究来验证其诊断和预测价值。

因此，本研究旨在全面描述孕妇甲型和乙型流感的临床和免疫特征，并识别可靠的早期肺炎预测生物标志物。

研究片段

研究设计

2023年11月至2024年2月，杭州第一人民医院的发热诊所共纳入120名妊娠1–40周的流感孕妇（图1）。所有纳入的孕妇最初均无并发症（根据IDSA的诊断标准[20]），且未接种流感疫苗。其中21人发展为肺炎。本研究还包括43名健康孕妇作为对照组。

临床特征和实验室结果比较

120名流感感染的孕妇的基线特征见表1。参与者分为两组：甲型流感（n = 60）和乙型流感（n = 60）。比较分析显示两组在母亲年龄、妊娠周数和体重指数方面无统计学差异。在比较两组临床表现时，发现甲型流感患者的咳嗽人数显著更多。

主要发现

本研究探讨了甲型和乙型流感感染者之间的临床和免疫差异。结果表明，外周血DNT%是预测孕妇流感相关肺炎的新颖可靠生物标志物。研究发现两种病毒亚型诱导的免疫反应存在差异，且DNT%升高和IL-2水平降低是肺炎进展的独立风险因素。

结论

DNT%是预测孕妇流感合并肺炎的有前景的早期生物标志物。其优异的诊断性能结合临床实用性，凸显了其在高风险群体中进行早期风险分层和个性化管理的潜力。

作者贡献声明

卢黄：撰写——初稿、方法学设计、数据分析、数据管理、概念构建。翟宏波：撰写——审阅与编辑、可视化处理、研究监督、软件应用、资源协调、资金争取、数据分析、概念构建。岑盼盼：撰写——审阅与编辑、研究监督、软件应用、项目管理、方法学设计、数据分析。徐向飞：撰写——审阅与编辑、研究监督、软件应用、方法学设计

伦理批准和参与同意

本研究已获得杭州第一人民医院伦理委员会的批准（批准编号：2021 Medical Review 011–01）。所有参与者的知情同意均已获得。此外，本研究已在中国医学研究注册与备案系统中登记备案。

资金支持

本研究得到了浙江省医疗卫生科学技术计划（2024KY1309）、浙江省中医药科学技术计划（2024ZL710）以及杭州市重点医学学科建设基金（妇产科，2025HZZD07）的支持。

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。

致谢

本文的完成离不开许多人的共同努力。