肿瘤干细胞中的外泌NEAT1通过上调HSP90B1/STAT3轴，促使SIRPA+巨噬细胞发挥作用，从而增强免疫逃逸并促进胶质母细胞瘤的进展

《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》：Exosomal NEAT1 from tumor stem cells induces SIRPA+ macrophages to enhance immune evasion and glioblastoma progression via upregulating the HSP90B1/STAT3 axis

　　

摘要

背景

信号调节蛋白Alpha（SIRPA）作为一种抑制性受体，能够抑制巨噬细胞的吞噬作用并促进肿瘤的免疫逃逸。最近的研究表明，SIRPA的缺失会将肿瘤相关巨噬细胞重新编程为抗肿瘤表型，并且SIRPA的功能独立于CD47。然而，SIRPA⁺巨噬细胞是如何被诱导以及在胶质母细胞瘤中发挥其作用的具体机制尚未完全阐明。

方法

通过分析公共的单细胞RNA测序数据集来识别SIRPA⁺巨噬细胞并表征其转录状态。利用免疫荧光染色技术比较肿瘤组织和肿瘤周围组织中SIRPA表达的差异，并研究SIRPA⁺巨噬细胞与胶质母细胞瘤干细胞（GSCs）的空间关联。在巨噬细胞与胶质母细胞瘤细胞或GSCs共培养后，评估了巨噬细胞的表型变化。通过Transwell和CCK-8实验评估SIRPA⁺巨噬细胞对肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。利用ELISA检测巨噬细胞分泌的CXCL8蛋白。通过生物信息学分析预测SIRPA的上游调节因子，并通过qPCR、Western blot、RIP、Co-IP、PLA和双荧光素酶实验进行验证。通过异位移植技术在体内验证相关分子通路。

结果

单细胞数据集的生物信息学分析发现了一组具有上皮-间质转化（EMT）特征的SIRPA⁺巨噬细胞，这类细胞在肿瘤区域富集，与较差的临床预后相关。免疫荧光显示肿瘤实质内SIRPA⁺巨噬细胞的数量较多，并且它们与GSC标记物存在空间共定位。GSC衍生的外泌体在巨噬细胞中诱导SIRPA的表达，并抑制其吞噬能力，从而增强胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT特性。长链非编码RNA NEAT1在GSCs及其外泌体中高表达。NEAT1能够高效转移到巨噬细胞中，稳定HSP90B1蛋白并增强其与STAT3的相互作用，进而促进HSP90B1依赖的STAT3磷酸化并激活SIRPA的转录。在体内实验中，敲低巨噬细胞中的NEAT1或SIRPA能够部分逆转由GSC衍生外泌体引起的颅内肿瘤进展，并延长携带肿瘤的小鼠的生存期，这支持了NEAT1/HSP90B1/STAT3/SIRPA轴在胶质母细胞瘤中的促肿瘤作用。

结论

GSC衍生的外泌体中的NEAT1通过HSP90B1/STAT3轴将巨噬细胞重新编程为免疫抑制性的SIRPA⁺表型，从而促进肿瘤的免疫逃逸和进展，表明NEAT1是GSCs与巨噬细胞之间相互作用的关键介质，可作为治疗胶质母细胞瘤的潜在靶点。