妥立通农汤对肉芽肿性小叶性乳腺炎中乳腺组织坏死的治疗效果：体外和体内模型的证据

《Journal of Molecular Histology》：Therapeutic effects of Tuolitounong decoction on pyroptosis in granulomatous lobular mastitis: evidence from in vitro and in vivo models

摘要

肉芽肿性小叶性乳腺炎（GLM）是一种慢性、难治性的乳腺炎症疾病，其病因尚不明确。最新研究表明，焦亡（pyroptosis）可能在GLM的发病机制中起作用。本研究探讨了头里头农汤（Tuolitounong Decoction，简称TLTND）在GLM体外和体内模型中对焦亡的治疗效果。通过使用暴露于GLM患者乳腺组织匀浆液的MCF10A乳腺上皮细胞建立了GLM体外模型。细胞在不同浓度下接受TLTND处理，同时使用或不使用焦亡抑制剂坏死磺胺（necrosulfonamide）。通过免疫荧光和Western blotting技术检测与焦亡相关的蛋白质，包括caspase-1、gasdermin D（GSDMD）、脂多糖结合蛋白（LBP）和NLR家族pyrin结构域3（NLRP3）。细胞活力通过Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒进行评估。在体内实验中，通过将GLM组织匀浆液上清液与弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant）混合后注射到Sprague Dawley雌性大鼠的第三对和第四对乳腺中，诱导GLM模型。TLTND通过每日口服给药持续21天。治疗后的评估内容包括乳腺组织的组织病理学检查、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的表达情况以及与焦亡相关的生物标志物。GLM匀浆液处理成功诱导了MCF10A细胞中的焦亡相关病理变化，而5-羟色胺（5-HT）的抑制作用无明显效果。TLTND的治疗效果具有剂量和时间依赖性，在10 mg/mL浓度下48小时后治疗效果显著增强（P<0.009）。值得注意的是，与模型组相比，TLTND显著降低了大鼠乳腺组织中关键焦亡标志物（切割型caspase-1、n-GSDMD、切割型IL-18和切割型IL-1β）的蛋白表达水平，分别降低了52.6%、91.0%、78.1%和87.1%。TLTND与坏死磺胺联合使用显著下调了caspase-1、GSDMD、LBP和NLRP3的表达，并提高了细胞活力。在体内实验中，醋酸泼尼松（prednisone acetate）和TLTND均改善了GLM的组织病理学表现。TLTND还促进了局部脓肿的成熟，增加了ER和PR的表达，同时降低了乳腺组织中的白细胞介素-1β（IL-1β）和GSDMD-N的水平。研究表明，TLTND通过下调caspase-1/GSDMD介导的焦亡信号通路，在减少乳腺上皮细胞的焦亡和调节肉芽肿性小叶性乳腺炎的炎症方面具有治疗潜力。

肉芽肿性小叶性乳腺炎（GLM）是一种慢性、难治性的乳腺炎症疾病，其病因尚不明确。最新研究表明，焦亡可能在GLM的发病机制中起作用。本研究探讨了头里头农汤（Tuolitounong Decoction，简称TLTND）在GLM体外和体内模型中对焦亡的治疗效果。通过使用暴露于GLM患者乳腺组织匀浆液的MCF10A乳腺上皮细胞建立了GLM体外模型。细胞在不同浓度下接受TLTND处理，同时使用或不使用焦亡抑制剂坏死磺胺（necrosulfonamide）。通过免疫荧光和Western blotting技术检测与焦亡相关的蛋白质，包括caspase-1、gasdermin D（GSDMD）、脂多糖结合蛋白（LBP）和NLR家族pyrin结构域3（NLRP3）。细胞活力通过Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒进行评估。在体内实验中，通过将GLM组织匀浆液上清液与弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant）混合后注射到Sprague Dawley雌性大鼠的第三对和第四对乳腺中，诱导GLM模型。TLTND通过每日口服给药持续21天。治疗后的评估内容包括乳腺组织的组织病理学检查、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的表达情况以及与焦亡相关的生物标志物。GLM匀浆液处理成功诱导了MCF10A细胞中的焦亡相关病理变化，而5-羟色胺（5-HT）的抑制作用无明显效果。TLTND的治疗效果具有剂量和时间依赖性，在10 mg/mL浓度下48小时后治疗效果显著增强（P<0.009）。值得注意的是，与模型组相比，TLTND显著降低了大鼠乳腺组织中关键焦亡标志物（切割型caspase-1、n-GSDMD、切割型IL-18和切割型IL-1β）的蛋白表达水平，分别降低了52.6%、91.0%、78.1%和87.1%。TLTND与坏死磺胺联合使用显著下调了caspase-1、GSDMD、LBP和NLRP3的表达，并提高了细胞活力。在体内实验中，醋酸泼尼松（prednisone acetate）和TLTND均改善了GLM的组织病理学表现。TLTND还促进了局部脓肿的成熟，增加了ER和PR的表达，同时降低了乳腺组织中的白细胞介素-1β（IL-1β）和GSDMD-N的水平。研究表明，TLTND通过下调caspase-1/GSDMD介导的焦亡信号通路，在减少乳腺上皮细胞的焦亡和调节肉芽肿性小叶性乳腺炎的炎症方面具有治疗潜力。