西欧刺猬（Erinaceus europaeus）呼吸系统线虫感染的流行病学与治疗

《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》：Epidemiology and treatment of respiratory nematode infections in western European hedgehogs (Erinaceus europaeus)

　　卡塔琳娜·乔塔·巴普蒂斯塔（Catarina Jota Baptista）|伊内斯·加马（Inês Gama）|朱莉娅·塞雷娜（Julia Serena）|彼得·亨伯格（Petr Heneberg）|玛丽亚·卡塞罗（María Cásero）|路易斯·马德拉·德卡瓦略（Luís Madeira de Carvalho）
埃加斯·莫尼兹跨学科研究中心（CiiEM），埃加斯·莫尼兹健康与科学学院，2829-511卡帕里卡，葡萄牙

**摘要**
呼吸系统线虫在获救的西欧刺猬（Erinaceus europaeus）中较为常见，但其在康复环境中的流行病学特征和治疗方法仍不明确。我们研究了葡萄牙南部一家野生动物康复中心收治的30只刺猬的78份粪便样本中的呼吸系统线虫感染情况，以及可能的腹足类中间宿主。通过巴尔曼技术（Baermann technique）监测了皮下注射左旋咪唑（10–20 mg/kg）和伊维菌素（3 mg/kg）治疗后的效果。结果显示，63.3%的刺猬感染了Crenosoma striatum，6.7%感染了Capillaria spp.，还有1只刺猬同时感染了这两种线虫。巴尔曼技术是检测C. striatum最敏感的方法。户外围栏中的样本比室内围栏中的样本更常检测出C. striatum（54.5% vs 29.4%）。所有被检测的腹足类动物（10/10）都携带C. striatum幼虫，这表明线虫在康复中心内存在活跃传播。左旋咪唑的治疗效果优于伊维菌素，但复发率较高。呼吸系统线虫感染在获救的刺猬中非常普遍，可能通过受感染的腹足类中间宿主在康复设施内持续传播。巴尔曼技术是最有用的诊断方法，在所测试的条件下，左旋咪唑的治疗效果优于伊维菌素。然而，两种治疗方法均未能实现彻底清除感染。这些发现强调了在野生动物康复中心实施综合寄生虫管理和标准化治疗方案的必要性。

**引言**
西欧刺猬（Erinaceus europaeus）是一种广泛分布于西欧和中欧的小型哺乳动物。2023年，其保护状况被重新评估为近危物种，这反映了包括英国和丹麦在内的多个欧洲国家报告的种群数量下降问题（Rasmussen等人，2020, 2024）。已有多种人畜共患病病原体在刺猬中被发现，它们与人类的接触也使刺猬面临多种人为威胁，如中毒、车辆碰撞、割草机或花园网造成的伤害，以及伴侣动物（尤其是狗）的捕食（Rautio等人，2016）。影响获救刺猬的疾病中，由Crenosoma striatum引起的寄生性肺炎是最常见的呼吸系统寄生虫病之一，也是康复环境中最常见的肺部病变之一（Lehmann等人，2024）。成虫寄生于支气管和气管（Taylor等人，2016；Lehmann等人，2024）。雌虫产生的卵在呼吸道内孵化成幼虫，这些幼虫随后被吞咽并通过消化道排出，因此可以在粪便中检测到（Taylor等人，2016）。包括有壳和无壳蜗牛及蛞蝓（如Succinea spp.和Agriolimax spp.）在内的腹足类动物作为中间宿主，携带可感染的第三期幼虫（Lange等人，2018；van de Sanden等人，2025）。幼虫通过血管或淋巴途径从肠道迁移到肺部（Carreno和Nadler，2003；Taylor等人，2016）。

**C. striatum感染的相关临床症状**
C. striatum感染的症状包括干咳、异常呼吸音、窒息发作、肺炎、贫血，严重时可能导致死亡。寄生性支气管肺炎在幼年刺猬中尤为常见。其他呼吸系统线虫也在刺猬中被发现，尤其是Capillaria spp.（尤其是Eucoleus aerophilus，同义词Capillaria aerophila），在尸检中常单独或与C. striatum混合感染（Majeed等人，1989；Beck，2007；Hoseini等人，2014；Alfaia等人，2024）。尽管文献中对这些感染的临床意义解读不一，但严重的或持续的寄生虫感染可能对刺猬的发病率、康复过程和最终重新引入自然环境产生不利影响。关于刺猬是否需要抗寄生虫治疗或预防，目前仍存在争议。左旋咪唑通常被认为是首选治疗方法，尤其是在严重病例和虚弱动物中；但也有使用伊维菌素或莫昔克丁的方案，但效果参差不齐（Cousquer，2004；Mariacher等人，2021；Van De Weyer等人，2023；Lehmann等人，2024）。表1总结了关于使用伊维菌素和左旋咪唑治疗刺猬呼吸系统线虫感染的已发表研究。

**表1. 使用伊维菌素和左旋咪唑治疗刺猬呼吸系统线虫感染的已发表研究总结**

| 药物 | 刺猬种类 | 寄生虫 | 剂量方案 | 给药途径 | 主要报告的结果 |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| 伊维菌素 | Van De Weyer等人（2023） | Capillaria spp. | 每周0.4 mg/kg，分2次口服 | 约60%的有效率 |
| Cousquer（2004） | E. europaeus | C. striatum | 每周0.2–0.4 mg/kg，分2–3次口服/皮下注射 | 部分有效；效果低于左旋咪唑 |
| Mariacher等人（2021） | E. europaeus | 混合感染（C. striatum, Capillaria spp.） | 未指定 | 未指定 | 左旋咪唑被认为更有效 |
| Pf?ffle（2010） | E. europaeus | 多种寄生虫 | 单次剂量0.3–0.5 mg/kg，皮下注射 | 对肺线虫效果不稳定 |
| Naem等人（2015） | E. concolor | C. striatum, Capillaria spp. | 单次剂量0.2 mg/kg，口服 | 效果有限；有复发报告 |
| Soll（1989） | 外来哺乳动物 | Metastrongyles | 每周0.2–0.4 mg/kg，分1–3次口服/皮下注射 | 不同物种效果不一 |

**材料与方法**
2021年9月至2022年2月期间，从葡萄牙里亚福尔莫萨（RIAS）野生动物康复研究中心收治的30只E. europaeus中收集了78份粪便样本。样本使用铲子从运输箱或纸板容器底部采集，注意避免土壤污染并减少处理过程中的压力。对于单独饲养在室内的动物，可在连续三天内直接采集粪便。对于共同饲养在户外的动物，暂时将它们分开放入运输箱或纸板容器中，并观察最多2小时直至排便。样本在4°C下保存直至分析。为保持巴尔曼检查所需的幼虫活性，粪便样本也需在4°C下保存。避免冷冻，因为冷冻可能损坏幼虫并影响活动性第一期幼虫的检出。死亡或康复期间濒死的刺猬会按照RIAS协议进行常规尸检。本研究详细检查了具有寄生性肺炎特征的肺部病变。从一只肺中手动提取线虫，用70%乙醇保存在Eppendorf管中，用于确认C. striatum感染。部分个体的性别信息缺失，因此未纳入分析。

**研究地点与气候变量**
RIAS位于葡萄牙法罗（Faro）的里亚福尔莫萨自然公园（Ria Formosa Natural Park），接收来自阿尔加维（Algarve）和巴伊绍阿伦特茹（Baixo Alentejo）地区的野生动物。该中心拥有超过15年的野生动物康复经验，隶属于葡萄牙野生动物救援网络（ALDEIA协会）。近年来，刺猬的收治数量显著增加，从21世纪初的每年约10只增加到现在的每年约150只。饲养条件（图1a-d）反映了康复中心的常规管理方式。刺猬可以在室内、室外或两者结合的环境中饲养，治疗和随访期间均可如此。幼年和虚弱动物通常先在室内饲养，待临床稳定或体重达到约300克后再转移到室外康复围栏中。

**图1. 获救西欧刺猬中Crenosoma striatum感染的环境背景和中间宿主。（a-d）RIAS的CM10设施，包括外部（a,c,d）和内部（b）部分。（e）研究期间阳性及阴性粪便检测结果的月度趋势。蓝线代表阴性结果，橙线代表阳性结果。**
阿尔加维地区具有温带地中海气候，冬季多雨，夏季炎热干燥。夏季平均气温约为25°C，冬季约为15°C，降雨主要集中在10月至5月，年降水量平均为509毫米。相对湿度通常在55%至81%之间，9月至4月期间保持在70%以上（Portal do Clima，2016）。虽然全年相对湿度相对稳定，但研究期间的降雨量在干燥的初秋和湿润的晚秋/冬季有显著差异。法罗/奥良（Faro/Olh?o）地区的每日降水量数据来自NASA POWER数据库，使用RIAS地区的坐标。使用校正后的每日降水量变量PRECTOTCORR进行计算。每月的粪便阳性率通过将该月所有每日降水量相加得出。

**数据分析**
为了评估降雨量与后续粪便阳性结果之间的延迟关联，计算了30天滚动窗口内的累积降水量。每个窗口以采样月的最后一天为基准，向后推移10天（0至70天）。0天延迟表示采样月最后一天内的降水量，40天延迟表示采样月前40天内的降水量。由于9月仅有一次粪便检测记录，因此未纳入分析。计算每月阳性率与滞后30天降水量之间的皮尔逊相关系数（Pearson correlation coefficients）。此外，使用每月阳性及阴性粪便检测次数拟合了分组二项式广义线性模型（grouped binomial generalized linear models）。由于先验假设认为降水量增加会通过促进腹足类活动及幼虫发育而增加感染风险，因此采用单侧p值。

**粪便检测方法**
常规粪便检测采用了四种方法：直接粪便涂片、Willis浮选法、自然沉淀法和巴尔曼技术。直接涂片法将少量粪便与几滴生理盐水混合后置于显微镜载玻片和盖玻片之间进行观察（Taylor, Coop, and Wall, 2016）。Willis浮选法中，将粪便样本与15–20毫升饱和蔗糖溶液混合均匀后过滤，直至形成凸形液面，然后放置盖玻片。15–20分钟后将盖玻片转移到显微镜载玻片上观察。由于研究期间康复中心的常规诊断条件无法使用离心浮选法，因此选择了被动浮选法。自然沉淀法与浮选法同时进行。移除浮选用盖玻片后，弃去上清液，保留管底的沉淀物。用巴斯德吸管收集少量沉淀物置于载玻片上观察（Bowman, 2020）。巴尔曼技术中，将粪便样本混合并称重，用纱布包裹10–15克粪便制成袋状，放入装有水的圆锥形杯子中浸泡8–24小时。取出纱布后，收集2毫升沉淀物转移到Falcon管中，涡旋后取100微升样本用于显微镜检查。C. striatum幼虫的数量被统计出来，每克粪便中的幼虫数量（LPG）的计算方法如下：LPG = (n × 2 mL / 0.1 mL) / 样品重量（Alho等人，2013年）。所有载玻片都在4倍、10倍和40倍放大倍数下进行了检查。当通过至少一种粪便学方法检测到呼吸系统线虫幼虫或卵时，该粪便样本被视为阳性。在个体水平上，如果在研究期间通过任何粪便学方法在至少一份粪便样本中检测到寄生虫，则认为刺猬为阳性；如果从未检测到寄生虫，则认为该动物为阴性。根据这一标准，30只刺猬中有19只（63.3%）对C. striatum和/或Capillaria spp.呈阳性。由于一些刺猬在康复期间接受了多次粪便学检查，因此早期和晚期研究阶段之间的时间比较是基于粪便学观察结果，而不是完全独立的宿主水平患病率估计。

**腹足类中间宿主的检查**
由于在雨季RIAS设施中腹足类动物数量较多，因此从其中一个围栏（CM10；图1a）中收集了这些动物以评估线虫幼虫的存在情况。在整个研究期间都观察到了腹足类动物，但在旱季它们的数量较少，在雨季则明显增多。2023年1月，收集了10只腹足类动物，并使用改进的Baermann技术进行了检查（Mozzer等人，2011年；Coaglio等人，2016年）。

**DNA提取、扩增和测序**
从形态上与C. striatum相符的成年线虫中提取DNA，这些线虫是在尸检时从肺部回收的，并在分子分析前用70%乙醇保存。DNA提取和扩增按照先前的方法进行，使用针对核ITS2和28S rDNA位点以及线粒体CO1位点的引物（Heneberg等人，2014年）（表2）。PCR扩增产物使用GenElute PCR Clean-Up Kit（Merck，德国达姆施塔特）进行纯化，并使用相同的引物在ABI 3130 DNA分析仪（Applied Biosystems，美国福斯特城）上进行双向Sanger测序。所得序列被存入NCBI Nucleotide数据库， accession号为OQ568208-OQ568209（部分CO1）、OQ568210-OQ568213（部分5.8S rDNA和ITS2）和OQ572232-OQ572235（部分28S rDNA），并使用NCBI BLAST进行分析。

**C. striatum的线粒体和核DNA位点扩增及测序所用引物**
| 位点 | 引物名称 | 序列（5′–3′） | 参考文献 |
|------|---------|-----------|---------|
| ITS2 | NC13 | (ITS2)/FATCGATGAAGAACGCAGC | Jacobs等人（1997年） |
| Dd28S | R1 | ACAAACAACCCGACTCCAAGO | tranto等人（2007年） |
| 28S rDNA | C1 | ACCCGCTGAATTTAAGCAT | Chisholm等人（2001年） |
| 28S-1270R/22 | CAGCTATCCTGAGGGAAACTT | Sato等人（2010年） |
| CO1 | JB3 | TTTTTTTGGGCATCCTGAGGTTTAT | Bowles, Blair和McManus（1992年） |
| JB4.5 | TAAAGAAAGAACATAATGAAAATG | Bowles, Blair和McManus（1992年） |

**治疗方案评估**
在2023年1月之前，RIAS使用了一种市售的口服左旋咪唑制剂（Tabernil Vermicida），但临床或寄生虫学效果并不令人满意，因为接受治疗的刺猬通过粪便检查仍经常呈阳性，并且继续表现出感染引起的呼吸系统症状。Tabernil Vermicida是一种用于鸟类的市售口服左旋咪唑制剂，含有75 mg/mL的左旋咪唑盐酸盐。根据产品说明，我们将其以2 mL/L的浓度添加到饮用水中，连续服用一天，相当于每公斤体重约20–25 mg的左旋咪唑，对于感染严重的动物或在存在再感染风险的动物，每2–3周重复给药一次。然而，这种制剂并非为刺猬设计，且没有记录每只刺猬实际摄入的确切剂量。因此，评估了文献中描述的替代方案，包括皮下注射左旋咪唑和伊维菌素（Soll，1989年）。

**左旋咪唑治疗方案**
左旋咪唑（Anthelmin，75 mg/mL）以10 mg/kg或20 mg/kg的剂量进行皮下注射。所有动物在第0天、第2天和第4天接受了三次注射。出现与寄生虫性肺炎相符的呼吸系统症状的动物在第6天接受了额外治疗。体重小于300克的幼崽接受10 mg/kg的剂量，而体重大于300克的动物接受20 mg/kg的剂量。共有41只符合纳入标准的刺猬接受了皮下左旋咪唑治疗，并通过重复的Baermann检查进行监测。入组时的体重范围为74至552克，中位数为120克（IQR：98–196克）。大多数动物是幼崽（78.0%），青少年和成年刺猬分别占17.1%和4.9%。治疗效果每7天使用Baermann技术进行监测，结果记录为阳性（1）或阴性（0）。第一次治疗结束后仍呈阳性的动物可以接受第二次相同的治疗。同时患有其他疾病的刺猬被排除在试验之外。由于左旋咪唑的治疗周期较短，需要早期评估治疗后的情况，以确定是否仍有幼虫排出或复发，并指导康复期间的后续治疗。

**伊维菌素治疗方案**
15只感染C. striatum的刺猬参与了伊维菌素试验。入组时的体重范围为58至460克，中位数为126克（IQR：99–146克）。大多数动物是幼崽（86.7%），青少年占13.3%。这些动物在第0天、第21天和第42天以3 mg/kg的剂量接受了三次伊维菌素（Vectimax，10 mg/mL）皮下注射。每次治疗前后立即使用Baermann技术进行粪便学评估，并在最后一次治疗后的21天（即第21天、第42天和第63天）再次进行评估。选择21天的间隔是因为这与康复中心的常规伊维菌素治疗计划一致。结果记录为阳性（1）或阴性（0）。同时患有其他疾病的刺猬被排除在试验之外。由于伊维菌素治疗周期较短，因此使用每周一次的Baermann监测。

**统计分析**
数据使用R版本4.2.2和R Commander扩展程序进行分析。正态性通过Shapiro–Wilk检验进行评估。分类变量之间的关联通过卡方检验或Fisher精确检验进行评估（当预期细胞计数较小时）。对于非正态分布的连续变量，使用Mann–Whitney U检验；对于正态分布的变量，则使用Student's t检验。结果以95%的置信区间表示，p值保留三位小数。统计显著性标准为p < 0.05。

**结果**
**粪便学发现**
在分析的78份粪便样本中，33份（42.3%）对C. striatum呈阳性，2份（2.6%）对Capillaria spp.呈阳性。按感染类别划分，32份（41.0%）仅对C. striatum呈阳性，1份（1.3%）仅对Capillaria spp.呈阳性，1份（1.3%）同时感染这两种寄生虫。由于样本量有限，只有43份样本可以使用所有四种粪便学方法进行检测。其中，直接涂片法在7份样本（16.3%）中检测到C. striatum，Willis浮选法在3份样本（7.0%）中检测到C. striatum（包括1例混合感染），自然沉淀法在6份样本（14.0%）中检测到C. striatum，Baermann技术在12份样本（27.9%）中检测到C. striatum。因此，Baermann技术在检测C. striatum方面效果最好，其次是直接涂片法和自然沉淀法。Willis浮选法和自然沉淀法在检测Capillaria spp.方面没有显著差异（p = 0.302）。相比之下，直接涂片法、自然沉淀法和Baermann法在检测C. striatum方面存在显著差异（p ≤ 0.001）。在对C. striatum呈阳性的刺猬中，青少年是最大的年龄组，其次是幼崽。所有纳入研究的成年刺猬也都呈阳性。然而，未发现年龄类别与感染状态之间存在统计学上的显著关联。

**分子确认**
从尸检时从肺部回收的成年线虫中获得的序列确认了C. striatum的存在。分子鉴定基于ITS2位点与德国刺猬的C. striatum幼虫序列KT257661的99%以上相似性（Lange等人，2018年）。部分28S rDNA位点的分析支持其为Crenosoma sp.的鉴定。然而，由于NCBI数据库中没有相应的C. striatum 28S rDNA序列，最接近的匹配序列（96–97%相似性）是Crenosoma mephitidis AY292793（Carreno和Nadler，2003年）。还获得了CO1序列，但NCBI Nucleotide数据库中没有可比较的Crenosoma spp. CO1序列。

**环境和气象发现**
粪便学阳性结果在不同类型的饲养环境中存在显著差异。室内围栏收集的样本中有10份（29.4%）呈阳性，而室外围栏中的样本中有24份（54.5%）呈阳性（p = 0.026）。在研究期间，阴性粪便学结果在采样初期（2021年9月至11月）更为常见。每月的患病率从10月的11.1%和11月的18.2%增加到12月的50.0%，1月的46.2%和2月的56.3%（图1e）。研究早期（2021年9月至11月）和晚期（2021年12月至2022年2月）的阳性结果分布存在显著差异（Fisher精确检验，p = 0.010）。2021年9月至12月期间，平均最高温度为19.9 ± 2.5°C，最低温度为17.7 ± 7.8°C。在室外围栏中，粪便学阳性结果与最高温度（p = 0.08）、最低温度（p = 0.19）或相对湿度（p = 0.60）之间没有显著关联。整个期间相对湿度始终超过86%。同月的降水量与粪便学结果无显著关联（p = 0.35）。然而，延迟分析显示，感染检测前几周的降水量与阳性结果有较强关联。最强的关联出现在40天延迟的30天降水量窗口（Pearson r = 0.783，单侧p = 0.059；分组二项式GLM单侧p = 0.007）。50天和60天的延迟降水量窗口也显示出阳性关联（图2）。

**腹足类中间宿主**
所有检查的腹足类动物（10/10）都对C. striatum幼虫呈阳性，表明寄生虫的生命周期在RIAS设施内得以维持。由于未能鉴定出腹足类的具体种类，因此无法评估特定种类的中间宿主参与情况。

**治疗效果**
皮下注射左旋咪唑在第一次治疗周期后减少了Baermann阳性的刺猬比例，尽管持续感染和复发仍然常见。在完成第一次治疗周期后（共进行了三次48小时间隔的注射），41只刺猬中有10只（24.4%）仍呈Baermann阳性。在最初治疗结果为阴性的31只刺猬中，有12只（38.7%）在两到五周后再次呈阳性。这12只刺猬随后接受了第二次左旋咪唑治疗，其中1只（8.3%）在接下来的7天随访检查中仍呈Baermann阳性。皮下注射伊维菌素的所有治疗轮次中，寄生虫清除不完全。由于刺猬在试验期间被反复接收和释放，因此伊维菌素组是一个动态的监测群体。因此，分母指的是每次评估时在场并可评估的动物数量。

**总结**
所有数据使用R版本4.2.2和R Commander扩展程序进行分析。正态性通过Shapiro–Wilk检验进行评估。分类变量之间的关联通过卡方检验或Fisher精确检验进行评估（当预期细胞计数较小时）。对于非正态分布的连续变量，使用Mann–Whitney U检验；对于正态分布的变量，使用Student's t检验。结果以95%的置信区间表示，p值保留三位小数。统计显著性标准为p < 0.05。**莱维唑与伊维菌素在治疗感染Crenosoma striatum的刺猬中的效果比较**
* 在首次使用伊维菌素后，有三只刺猬进入了后续观察阶段，因此无法在第一次治疗周期后进行评估。N/A：由于研究设计的原因（例如，莱维唑组没有第三次治疗），数据不可用或不适用。*

| 指标 | 莱维唑 | 伊维菌素 |
|------------|-------|--------|
| 接受治疗的动物总数（只）| 41 | 15 |
| 第一次治疗后的阳性率（%）| 24% | 50% |
| 第一次治疗后复发的率（%）| 39% | N/A |
| 第二次治疗后的阳性率（%）| 8% | 27% |
| 第三次治疗后的阳性率（%）| N/A | 46% |

**讨论**
**主要发现和流行病学背景**
本研究揭示了在葡萄牙南部一家野生动物康复中心接收的西欧刺猬中，呼吸系统线虫感染的普遍率很高。观察到的C. striatum感染率与葡萄牙之前的报告（Barradas等人，2020年；Lobo，2021年）以及其他欧洲国家的研究（Majeed、Morris和Cooper，1989年；Gaglio等人，2010年；Liatis等人，2017年；Mariacher等人，2021年；Rasmussen等人，2021年）大致相当。相比之下，意大利、英国和芬兰报告的感染率超过70%（Giannetto等人，1993年；South和Haynes，2018年；Rautio等人，2016年）。这种差异并不令人意外，因为不同研究在地理、宿主年龄结构、诊断方法和研究群体方面存在差异。

**Capillaria spp.的检测频率较低**
本研究中Capillaria spp.的检测频率较低，与Naem等人（2015年）报告的4%相似。相比之下，其他研究中的感染率较高，包括Lobo（2021年）的24%、Rasmussen（2021年）的52%和Gaglio（2010年）的62%。刺猬中经常出现混合性呼吸系统寄生虫感染（Bexton和Robinson，2003年）。Rasmussen（2021年）和Naem（2015年）分别报告38%和43%的刺猬携带多种寄生虫。Rasmussen（2021年）指出35.1%的刺猬同时感染了C. striatum和Capillaria spp.。此外，还有文献记录了C. striatum与Cryptosporidium spp.和Physaloptera clausa的混合感染（Liatis等人，2017年；Mariacher等人，2021年；Rasmussen等人，2021年；Naem等人，2015年）。本研究中Capillaria spp.的相对较低检测率可能反映了真实的流行病学差异，但也可能反映了采样和诊断方法的差异，特别是使用了被动浮选法而非离心浮选法。

**方法学异质性**
方法学上的差异可能是导致研究间感染率差异的原因之一。一些作者主要依赖粪便检查（Gaglio等人，2010年；South和Haynes，2018年；Lobo，2021年；Mariacher等人，2021年），而另一些作者则使用尸检或肺组织病理学（Boag和Fowler，1988年；Majeed等人，1989年；Pf?ffle，2010年；Haigh等人，2014年；Naem等人，2015年；Rautio等人，2016年；Liatis等人，2017年；Barradas等人，2020年；Rasmussen等人，2021年）。研究群体在年龄分类上也有所不同，有些研究仅包括成年刺猬（Poglayen等人，2003年），有些包括成年和幼年刺猬（Mariacher等人，2021年），还有一些还包括新生刺猬（Majeed等人，1989年；Naem等人，2015年；Rautio等人，2016年）。这些差异使得直接比较变得复杂，进一步强调了在刺猬寄生虫学研究中采用标准化诊断和报告方法的必要性。

**粪便检查方法的诊断性能**
本研究结果支持使用Baermann技术作为检测活刺猬中C. striatum的最有效粪便检查方法。观察到活动的一期幼虫可以提供直接的寄生虫学诊断，Baermann检查被广泛认为是检测肺线虫的参考方法（Beck，2007年）。肺线虫的卵非常脆弱，产卵到孵化之间的时间很短，这降低了主要针对卵检测的方法（如浮选、沉淀或直接涂片）的敏感性（Alho等人，2013年）。然而，不应忽视Baermann技术的实际局限性。与其他一些方法相比，Baermann技术需要更多的粪便样本，并且通常至少需要8小时才能观察到幼虫。在野生动物康复环境中，样本量可能有限，且常常需要快速做出临床决策，因此直接涂片仍然是一种有用、快速且经济的床边检测方法。South和Haynes（2018年）认为直接粪便涂片是一种可靠且经济有效的方法，并建议即使两次涂片也能提供有用的内寄生虫负担估计。然而，在本研究中，Baermann检查检测到的阳性样本数量多于直接涂片。

**浮选和沉淀方法的性能**
本研究中浮选和沉淀方法的性能也低于Baermann技术。这些发现与一些报告一致，这些报告指出粪便分析可能会遗漏大量通过组织学或尸检确认的肺线虫感染（Majeed等人，1989年；Cousquer，2004年）。尽管如此，浮选和直接涂片仍可用于检测Capillaria spp.，因为其特征性的桶形、双极卵可以在显微镜下观察到。然而，物种级别的区分仍然困难。Capillaria erinacei的卵通常较大、颜色较深且两侧平行，而Eucoleus aerophilus的卵则较浅，侧壁更凸，盖片更平（Pf?ffle，2010年）。对于有明显呼吸系统症状的动物，气管冲洗可能提供一种替代的诊断方法，具有更高的敏感性，并且可以同时识别细菌性肺炎。然而，麻醉和插管的需要限制了其在野生动物康复中的常规使用（Cousquer，2004年）。

**治疗结果**
治疗结果表明，在本研究的条件下，皮下注射莱维唑和伊维菌素都只能部分清除寄生虫，两种方案都观察到持续或复发的阳性情况。虽然莱维唑治疗后的随访检查阳性率较低，但由于样本量小，无法得出关于疗效的明确结论。这些发现与先前的报告一致，即莱维唑仍常被推荐用于治疗刺猬的呼吸系统线虫感染，而伊维菌素的效果可能更不稳定（Cousquer，2004年；Bexton，2016年；Mariacher等人，2021年；Van De Weyer等人，2023年）。

**伊维菌素效果不稳定的原因**
伊维菌素效果不稳定的原因可能有多种。这里使用的21天间隔反映了当时康复中心的常规治疗方案，而非经过实验优化的治疗计划。与其他地方描述的较短或每周一次的间隔相比，这个间隔可能不是最佳的（Cousquer，2004年；Van De Weyer等人，2023年）。此外，间歇性的幼虫排出、成虫未完全清除、康复期间的再感染以及可能的药物敏感性降低都可能导致持续或复发感染。由于C. striatum的潜伏期可能长达数周，治疗后不久出现的复发阳性不能仅归因于再感染。然而，在本研究的条件下，再感染是可能的，因为一些之前检测阴性的刺猬后来再次呈阳性，且设施内也发现了受感染的腹足类动物。类似的情况也出现在伊维菌素对C. striatum和其他肺线虫的效果研究中（Pf?ffle，2010年；Xu等人，1998年）。伊维菌素效果降低或不一致的机制尚不完全清楚，可能包括呼吸道内寄生虫的药物暴露有限、对某些发育阶段的活性不足、宿主特异性药代动力学差异影响药物吸收或组织分布，以及其他线虫中描述的P-糖蛋白介导的药物耐受机制（Xu等人，1998年）。然而，在康复中心条件下，再感染与真正的治疗失败难以区分。

**实际应用**
从实际角度来看，皮下注射伊维菌素比重复口服给药更简单。在野生动物康复环境中，给处于压力状态、食欲不振或群居的刺猬口服莱维唑可能较为困难。然而，在本研究中，皮下注射莱维唑是可行的，且似乎是最有效的治疗方案。因此，这些结果支持莱维唑是这种情况下的首选治疗方法，并强调仅靠治疗可能不足以解决问题，还需要解决环境中的感染源。

**环境传播和再感染风险**
本研究最重要的发现之一是，一个围栏内的所有腹足类动物都携带C. striatum幼虫。这强烈表明康复中心内存在活跃的传播循环，并为治疗后持续或复发感染提供了可能的解释。这些发现具有重要的流行病学意义，因为它们表明刺猬不仅在入院时被感染，而且在适宜感染的环境中可能会再次暴露。C. striatum的生物学特性使得这种情况成为可能。传播依赖于必需的腹足类中间宿主，环境条件直接影响这些宿主的数量和活动。温度、湿度和降雨量可能影响幼虫阶段的存活率和蜗牛及蛞蝓的活动，从而影响传播强度（Morand，2015年；Beck，2007年；Cameron，1970年）。本研究中发现的降雨与粪便阳性之间的延迟关联在生物学上是合理的。降雨可能增加腹足类动物的活动和存活率，从而增加接触感染性幼虫的概率。只有在传播、寄生虫成熟和幼虫排出之后，才能检测到Baermann阳性。最强的关联出现在降雨发生在检测前约40-60天，这与延迟的传播过程一致，而非立即的降雨效应。

**临床意义和生态保护影响**
C. striatum感染可能是亚临床的，也可能导致重要的呼吸系统疾病。文献中描述的临床症状包括咳嗽、虚弱、体重下降和运动不耐受，并发症可能包括细菌性肺炎、肺气肿和心力衰竭（Pf?ffle，2010年；Bexton，2016年；Beck，2007年）。Hoseini等人（2014年）和Nematollahi等人（2014年）描述了寄生虫周围的微脓肿形成，这可能减少药物到达感染部位的机会，从而降低治疗效果。然而，在本研究中，尽管感染率较高，但明显的临床疾病并不普遍，这表明仅凭寄生虫检测结果不应自动推断出严重的临床影响。这对康复医学和保护工作都有影响。一些作者建议对所有进入康复中心的刺猬进行预防性驱虫（Bexton，2016年），但全面治疗并不总是合理的。寄生虫是自然生态系统的一部分，宿主-寄生虫关系反映了长期的共同进化。野生动物中的抗寄生虫治疗可能带来生态成本，并可能导致抗药性的选择（Irvine，2006年；Pedersen和Fenton，2015年）。另一方面，抗寄生虫治疗也可以改善某些野生动物系统的宿主适应性或种群表现。例如，实验性减少红松鸡体内的Trichostrongylus tenuis增加了繁殖产量和冬季存活率，清除寄生虫有助于防止种群数量下降（Hudson等人，1992年，1998年）。最近的研究表明，景观规模的芬苯达唑治疗减少了北方鹌鹑体内的寄生虫负担，并改善了种群表现（Henry等人，2024年；Leach等人，2024年）。因此，在野生动物康复中的治疗决策应平衡个体福利、寄生虫负担、保护背景、再感染风险和潜在的生态后果。在实际操作中，定期监测、良好的营养、减少压力、适当的饲养密度、围栏卫生和及时的诊断测试可能与药物选择同样重要，以减少康复期间的呼吸系统寄生虫影响。

**局限性**
本研究反映了野生动物康复医学的实际挑战，如难以维持受控的饲养条件、标准化的暴露历史和固定的治疗组。样本量相对较小，特别是对于某些亚组分析，限制了统计功效，并可能掩盖了与气候变量的关联。由于样本量不足，不是所有粪便样本都能用所有诊断方法进行检测，从而限制了在完全标准化条件下比较各种技术的能力。巴尔曼技术（Baermann technique）虽然是目前使用中最具有信息量的方法，但其本身也存在缺陷。该技术的检测结果受采样时粪便和幼虫排泄量的影响，如果幼虫排泄不规律，可能会导致假阴性结果（Alho等人，2013年）。当巴尔曼技术阳性结果作为治疗试验的主要终点时，这一问题尤为突出。与离心浮选法相比，被动浮选法可能降低了检测毛细线虫（Capillaria spp.）卵的灵敏度，这可能是之前一些研究中观察到的感染率较低的部分原因。未来的研究应理想地结合使用离心浮选技术以提高卵的检出率。本研究中的治疗组别比较更多是基于实际情况而非严格实验设计：左旋咪唑组和伊维菌素组并未进行随机分配，监测方案也不完全相同，并且动物处于实际康复环境中，存在再次感染的风险。因此，左旋咪唑组的明显优势应谨慎解读为现场条件下的观察结果，而非来自对照疗效试验的确定性证据。

环境中的再次感染可能是重要的混杂因素。在所有被检测的腹足类动物中都发现了C. striatum幼虫，这表明康复中心内存在活跃的传播循环。因此，在解释治疗结果时必须考虑再次感染的影响，因为持续的或反复出现的巴尔曼技术阳性结果可能反映了治疗失败、间歇性的幼虫排泄、再次感染，或是这些因素的综合作用。本研究中的刺猬无法在完全无寄生虫的受控环境中饲养，且确实在该设施内发现了受感染的腹足类动物。样本仅来自一个围栏的一个时间点，这限制了对该康复中心内中间宿主感染范围和季节性动态的普遍性判断。由于康复期间饲养条件发生变化，动物可能在室内和室外环境之间移动，因此其环境暴露风险并非恒定。

本研究在葡萄牙南部的一个康复中心进行。尽管这种设置提供了宝贵的生态学和临床见解，但研究结果可能无法直接推广到其他中心、气候条件或管理系统。下一步的研究应采用多中心设计，使用标准化诊断方法、延长随访时间、控制饲养条件，并进行正式的治疗组间比较。

**结论**
在葡萄牙南部这家康复中心接收的西欧刺猬中，呼吸道线虫感染较为普遍，其中C. striatum的检出频率远高于其他毛细线虫种类。巴尔曼技术是检测活体动物中C. striatum的最有效粪便学方法。在所评估的条件下，皮下注射左旋咪唑的效果优于伊维菌素，但两种方案均未能实现持续的寄生虫清除，且复发情况频繁发生。在一个围栏内的所有腹足类动物中都检测到C. striatum幼虫，表明康复设施内可能存在传播途径，这可能导致再次感染并使治疗效果评估变得复杂。虽然气候变量与感染状态无显著关联，但观察到的时间模式与降雨量和湿度对传播动态的影响一致。总体而言，这些发现表明，刺猬康复中心中呼吸道线虫的管理需要采取综合措施，包括适当的诊断方法、针对性治疗和环境控制，并强调需要进行更大规模、标准化的研究以优化治疗方案并明确再次感染和环境因素的作用。

**作者贡献声明**
Petr Heneberg：撰写、审稿与编辑、研究；
Luís Madeira de Carvalho：撰写、审稿与编辑、研究；
María Cásero：撰写、审稿与编辑、研究；
Catarina Jota Baptista：撰写初稿、数据可视化、验证、监督、资源管理、项目协调、方法学设计、研究、资金申请、数据分析、概念化；
Julia Serena：撰写、审稿与编辑、研究；
Inês Gama：撰写、审稿与编辑、研究。

**未引用的参考文献**
Dusch等人，2025年；IPMA气候门户网站等，2016年；Robinson和Routh，1999年；Silva等人，2022年；Wright，2014年。

**利益冲突**
作者声明不存在利益冲突。

**伦理标准**
由于本研究未干扰康复中心的正常动物管理（由兽医团队设计），因此免除了伦理审查和批准程序。本研究及其流程遵循了康复中心的日常活动和预防措施，符合2010年9月22日欧洲议会和理事会发布的关于科学用途动物保护的指令2010/63/EU。所有动物均未仅为了实验目的而接受监测或治疗。

**资金支持**
本研究得到了葡萄牙科学技术基金会（FCT）的资助。CJB感谢FCT对CiiEM（UIDB/04585/2025）和CITAB（UIDB/04033/2025）项目的支持（https://doi.org/10.54499/UID/04033/2025）。CIISA/FMV和AL4Animals（IG和LMMC）的作者也获得了FCT的资助，项目编号分别为CIISA – UIDB/00276/2020和UID/276/2025以及LA/P/0059/2020。