摘要
CRISPR RNA（crRNA）是CRISPR–Cas12a系统中的关键导向分子，它引导Cas蛋白识别目标序列。crRNA由一个重复序列衍生的茎环结构组成，该结构能够与Cas12a结合并帮助稳定核糖核蛋白复合物；同时还有一个间隔区，该区间与目标序列发生碱基配对，从而决定了识别的特异性。最近的多项研究表明，crRNA可以在体外以多种方式被切割和重新组装。这些切割与重组策略使得检测方法比使用全长crRNA更加灵活，能够覆盖更广泛的目标序列，并实现更高的信噪比。本文重点介绍了CRISPR–Cas12a系统中基于切割crRNA的检测方法，并系统总结了现有的相关检测平台。我们概述了这些方法的设计原理、反应机制和性能特点，分析了它们在提高目标识别范围、灵敏度、特异性和可控性等方面的优势。最后，我们讨论了基于切割crRNA的策略的主要优势及当前存在的局限性，并指出了进一步优化设计及实际应用的方向。这些进展主要体现在四个方面：扩大目标范围，使Cas12a能够用于检测短RNA、结构化RNA以及某些非核酸目标；通过重组依赖性激活、级联放大或辅助激活策略增强检测信号，从而提高灵敏度；通过逐步识别和条件性组装加强单核苷酸差异的区分能力，提高特异性；以及利用光、酶、小分子或邻近效应实现Cas12a活性的按需调控，从而增强可控性。
图形摘要
本文聚焦于CRISPR–Cas12a系统中基于切割crRNA的检测策略。我们总结了现有的检测平台，概述了它们的设计原理、反应机制和性能特点，并讨论了这些方法在提高目标识别范围、灵敏度、特异性和可控性方面的作用。最后，我们指出了这些策略的优势、当前存在的局限性以及未来优化和实际应用的方向。
利益冲突
作者声明没有利益冲突。
数据可用性声明
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