外泌体长链非编码RNA NORAD通过miR-433-3p/自噬轴促进AEG细胞对奥沙利铂的耐药性：一种新的机制及潜在的生物标志物

《Cancer Cell International》：Exosomal lncRNA NORAD drives oxaliplatin resistance in AEG via the miR-433-3p/autophagy axis: a novel mechanism and potential biomarker

摘要

背景

奥沙利铂耐药性在食管胃交界腺癌（AEG）的治疗中构成了重大挑战。尽管长链非编码RNA（lncRNA）NORAD已被证实与化疗耐药性有关，但其具体作用机制及其在AEG中的临床意义仍不清楚。我们假设外泌体来源的NORAD通过调节自噬的竞争性内源性RNA网络促进奥沙利铂耐药性，并可能作为一种潜在的循环生物标志物。

方法

使用定量实时聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction）分析了56对AEG肿瘤及其邻近正常组织中的NORAD和miR-433-3p的表达水平，以及AEG细胞系（OE19、PDC）及其相应的奥沙利铂耐药衍生物（OE19-R、PDC-R）中的表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验（dual-luciferase reporter assay）验证了NORAD与miR-433-3p之间的直接相互作用。评估了NORAD敲低的功能后果：通过CCK-8实验测定细胞活力以计算半数抑制浓度（IC??）；通过Western blotting检测LC3B-Ⅱ/LC3B-I比值和p62降解来评估自噬通量；并通过流式细胞术（flow cytometry）量化凋亡。同时测量了AEG患者和健康对照组的血清中外泌体NORAD水平。

结果

在AEG组织中，NORAD表达显著上调，而miR-433-3p表达下调，两者之间存在强烈的负相关（r = ?0.864，p < 0.001）。NORAD直接与miR-433-3p结合，起到分子海绵的作用。奥沙利铂耐药细胞表现出NORAD水平升高、自噬通量增强（表现为LC3B-Ⅱ/I比值增加和p62水平降低）以及更高的IC??值。沉默NORAD使耐药细胞对奥沙利铂重新敏感（例如，PDC-R中的IC??从22.27 μg/mL降至2.51 μg/mL），抑制了自噬并促进了凋亡。临床研究表明，AEG患者的血清中外泌体NORAD水平显著升高，并且血清中外泌体NORAD水平与肿瘤中NORAD表达之间存在强烈的正相关（r = 0.886，p < 0.001）。

结论

我们的研究发现了驱动AEG中奥沙利铂耐药性的一个新的NORAD/miR-433-3p/自噬轴。靶向NORAD可以恢复化疗敏感性，凸显了其治疗潜力。此外，循环中的外泌体NORAD作为一种有前景的非侵入性生物标志物，支持其在AEG液体活检中的应用。