通过共表达HAC1和PDI1来评估Komagataella phaffii中重组胰蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶原的产生情况

《Microbial Cell Factories》：Evaluation of recombinant trypsinogen and chymotrypsinogen production in Komagataella phaffii through co-expression of HAC1 and PDI1

　　

摘要

背景

胰蛋白酶原和胰凝乳酶原是具有潜在癌症治疗应用价值的丝氨酸蛋白酶。然而，由于伦理、安全性和变异性方面的问题，它们的临床使用受到牛或猪胰腺提取物依赖性的限制。在 Komagataella phaffii（同义词 Pichia pastoris）中表达这些蛋白酶提供了一种可扩展且可控的替代方案。不过，仍需进一步优化以提高蛋白质的产量和分泌水平。

结果

研究人员构建了能够表达人胰蛋白酶原和胰凝乳酶原的重组菌株，并评估了培养基成分以及 HAC1 和 PDI1 共表达对蛋白质产量的影响。与亲本菌株相比，HAC1 的共表达使胰蛋白酶原的产量增加了3.2倍，而 PDI1 使胰凝乳酶原的产量增加了8.5倍。培养基的优化对蛋白质表达的影响较小。SDS-PAGE 和 Western blot 分析证实了这两种酶的成功表达和分泌。

结论

遗传修饰与培养基优化的结合显著提高了 K. phaffii 中胰蛋白酶原和胰凝乳酶原的重组生产水平。HAC1 在提高胰蛋白酶原产量方面更为有效，而 PDI1 的共表达显著提升了胰凝乳酶原的浓度。这些发现为提高这些蛋白酶的产量提供了有前景的策略，支持了它们在生物技术和生物医学研究中的潜在应用。