Alinity HSV1&2/VZV检测方法在多种非标签样本类型中的定量分析评估

《Journal of Virological Methods》：Assessment of the Alinity HSV1&2/VZV assay for quantitative analysis across multiple off-label sample types

　　

Maria A. Argudín|Ana?s Scohy|Giulia Zorzi|Florence Kabera|Hector Rodriguez-Villalobos|Beno?t Kabamba Mukadi

比利时布鲁塞尔圣卢克大学临床医学院实验室医学系

摘要

Alinity m HSV1&2/VZV检测方法（Abbott Molecular公司开发）能够检测通过病毒运输介质运送的病变拭子样本中的人类疱疹病毒HSV-1、HSV-2和VZV。该方法在替代样本中的性能尚未经过验证。本研究评估了该检测方法在检测和定量这些病毒方面的可靠性。

我们将该检测方法与ELITe BeGenius系统进行了比较，使用的是稀释在羊水（AF）、支气管肺泡灌洗液（BAL）、脑脊液（CSF）以及两种不同运输介质（Liofilchem公司的VTM和InActiv Blue?）中的商业参考样本。我们还对比了这两种技术对运输介质中的临床病变拭子的检测结果。

Alinity m检测方法在参考样本中检测到了所有预期的目标病毒，但其检测限（LoD）高于ELITe系统。根据样本类型的不同，HSV-1的LoD范围为1.7至2 Log₁₀C/mL，HSV-2为1.7至2.7 Log₁₀C/mL，VZV为2.7至3.7 Log₁₀C/mL。然而，当扩增信号超过Abbott设定的阈值时，HSV-1和HSV-2在脑脊液和运输介质中的LoD可降至1.7 Log₁₀C/mL，而VZV在脑脊液和羊水中的LoD可降至1.7 Log₁₀C/mL，在InActiv Blue?中的LoD可降至1 Log₁₀C/mL。在43份临床样本中观察到了5例检测结果不一致的情况，主要发生在病毒载量较低的情况下。

虽然Alinity m检测方法对病变拭子有效，但在其他样本类型中存在局限性。它可能适用于血浆检测，但ELITe系统在检测低病毒载量时更为敏感。

引言

疱疹病毒是一类包含九种已知类型的病毒，能够感染人类。其中，单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）和水痘-带状疱疹病毒（VZV）因其神经嗜性而尤为重要（Mehrmal等人，2024年）。这些病毒主要感染黏膜皮肤表面，并在神经节中潜伏终生。重新激活可能导致无症状的病毒排出或出现症状性病变，对个体的影响取决于其免疫状态（Mehrmal等人，2024年）。

HSV-1主要通过口对口接触传播，导致口腔疱疹（俗称唇疱疹）。全球约有38亿50岁以下的人（64%）感染了HSV-1（世界卫生组织，2024年）。HSV-2主要通过性接触传播，导致生殖器疱疹；然而，HSV-1也可能引起生殖器疱疹（Plunkett等人，2024年）。据估计，全球有5.2亿15-49岁的人（13%）感染了HSV-2（世界卫生组织，2024年）。VZV会引起两种不同的临床疾病：初次感染会导致水痘（通常发生在儿童时期，Mehrmal等人，2024年）。初次感染后，VZV会在周围神经节的神经元中潜伏，可能在日后重新激活为带状疱疹（Mehrmal等人，2024年；Patil等人，2022年1月19日）。免疫系统受损的人患严重感染的风险更高，如脑炎、肺炎、眼部疾病和血液感染（Valerio和Lin，2019年；Patil等人，2022年1月19日；Mehrmal等人，2024年；Zhen等人，2024年；Cano等人，2025年）。

准确诊断疱疹病毒感染依赖于选择合适的检测方法并正确处理样本。PCR检测对检测病毒DNA具有高敏感性，尤其是在早期水疱性病变中，因为这些病变的病毒载量高于结痂性病变（Mehrmal等人，2024年）。目前有许多商业化的分子检测方法可用于检测甚至定量不同样本中的HSV-1、HSV-2和VZV DNA。Alinity m HSV1&2/VZV检测方法（09N61-090，Abbott Molecular Inc.，美国伊利诺伊州德斯普莱恩斯）是一种定性多重检测方法，适用于2023年推出的自动化Alinity m系统（Abbott，2023年）。这种体外实时聚合酶链反应（PCR）检测方法旨在检测和区分由临床医生采集并通过商业病毒运输介质（VTM）运送的病变拭子样本（皮肤或黏膜皮肤）中的HSV-1、HSV-2和VZV DNA。据我们所知，该方法尚未在其他样本类型中进行过评估，这限制了其应用范围。本研究的目的是评估Alinity m HSV1&2/VZV检测方法在检测和定量不同样本类型中的病毒性能，包括羊水（AF）、支气管肺泡灌洗液（BAL）、脑脊液（CSF）、血浆、VTM以及InActiv Blue?运输介质。测试不同的运输介质有助于评估该方法在检测病变中病毒的有效性，但血浆、脑脊液或BAL等其他样本类型对于检测这些病毒引起的严重感染（如脑炎、播散性感染）具有临床意义。本研究独立进行，未得到Abbott Molecular公司的任何支持。

章节摘录

分子HSV1&2/VZV检测方法

Alinity m HSV1&2/VZV检测方法是一种双目标检测方法，可检测HSV-1（US6和UL1）和HSV-2（UL1和UL18），以及单目标检测方法，可检测VZV（ORF10）。Alinity m系统将阈值循环数（Ct）定义为循环次数（CN）。对于每种分析物（HSV-1、HSV-2或VZV），当Alinity m系统检测到荧光信号时，即可确定扩增的CN值。虽然其概念与其他qPCR平台使用的Ct值类似，但CN值是通过Abbott的专有算法确定的。

使用参考样本进行评估

我们使用Qnostics样本评估了Alinity m HSV1&2/VZV检测方法（表1）。此外，为了评估提取的DNA在Alinity m系统中的使用效果，我们还使用了ELITe BeGenius系统获得的DNA进行了测试（表1）。我们还对Qnostics样本进行了十倍系列稀释（表2；表S1）。Alinity m HSV1&2/VZV检测方法成功检测到了Qnostics样本中的所有预期目标病毒。同样，该方法也能使用提取的DNA检测到这些病毒。

讨论

实验室通常希望在一个系统中验证多种样本类型，以降低成本，因为使用多种设备和试剂盒（每种试剂盒都针对不同的样本类型进行过官方验证）会显著增加运营费用。一些Alinity检测方法已在Abbott Molecular最初验证的样本类型之外展示了其实用性。例如，Alinity m CMV检测方法最初是为检测和定量血浆中的巨细胞病毒（CMV）而开发的（Abbott，2021年）。

结论

Alinity m HSV1&2/VZV检测方法适用于检测各种样本类型中的这些病毒；然而，检测限和PCR效率因样本类型而异。该方法在病变拭子样本中的有效性已经得到验证；但在其他样本类型中，可能需要更敏感的方法来检测病毒。需要进一步的临床和实验室研究来确认该方法在其他样本类型中的临床实用性。我们的研究表明，Alinity m有时会产生可检测的信号。

数据声明

所有相关数据均包含在手稿中。

知情同意和患者信息

本研究仅使用了匿名化的实验室数据，未调查或包含任何特定患者的信息。

资金来源

本研究未获得公共部门、商业部门或非营利部门的任何特定资助。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文报告工作的财务利益或个人关系。

关于写作过程中使用的生成式AI和AI辅助技术的声明

在准备本研究报告时，作者使用了ChatGPT来提高手稿的可读性和语言表达。使用该工具/服务后，作者根据需要审查和编辑了内容，并承担全部责任。