高效液相色谱法测定加州茴根草根、花、叶及茎中芝麻素与细辛素的含量

《Journal of Chromatography Open》：Measurement of sesamin and asarinin in the roots, flowers, leaves and stems of Anemopsis californica by high-performance liquid chromatography

　　

加州茴根草（Anemopsis californica）是墨西哥西北部与美国西南部原住民传统药用植物，其活性成分芝麻素（sesamin）与细辛素（asarinin）具有重要生物学功能。本研究建立了一种同时定量该植物根、花、叶及茎中两种木脂素的高效液相色谱（HPLC）分析方法。方法学验证显示，芝麻素日内精密度（相对标准偏差，RSD%）为2.37%–4.57%，日间精密度为2.37%–4.57%；细辛素日内精密度为2.53%–5.37%，日间精密度为2.55%–5.37%。两种化合物在根、花、叶、茎中的加标回收率分别为92.40%–98.80%与91.20%–99.87%。季节比较表明，夏季采收植株的两种木脂素含量较春季几乎翻倍，其中根是主要富集部位——夏季根中芝麻素平均含量为845.55 μg/g干样，细辛素达1701.51 μg/g干样。本研究提出的HPLC方法可靠，可支持该物种药用资源开发与后续研究。

论文解读：《高效液相色谱法测定加州茴根草根、花、叶及茎中芝麻素与细辛素的含量》

研究背景与意义

加州茴根草（Anemopsis californica，又称yerba mansa）是三白草科（Saururaceae）单型属植物，原产于美国西南部与墨西哥北部，长期被美洲原住民用于治疗炎症、感染及皮肤损伤。已有研究表明其叶、茎提取物具有抗突变、抗氧化及抗微生物活性，挥发油成分elemicin与methyleugenol已被鉴定，但非挥发性活性成分芝麻素（sesamin，C₂₀H₁₈O₆）与细辛素（asarinin，C₂₀H₁₈O₆）的分布规律与定量分析方法尚未系统建立。二者均为呋喃型木脂素（furofuran lignans），具有抗炎、降压、抗过敏及调节脂质代谢等药理作用，但现有研究仅通过核磁共振（NMR）与液相色谱-质谱（LC-MS）初步确认其存在，缺乏针对全株各部位的专属HPLC定量方法，亦无季节性含量变化数据。因此，开发可靠、经济的检测方法对阐明其药用物质基础具有重要意义。

关键技术方法

研究人员于墨西哥西北部（北纬27°43′25″，西经109°52′47″，海拔63.14 m）野生生境采集春季与夏季开花期的加州茴根草，随机分离根、花、叶、茎并干燥制样。采用单因素优化结合方法学验证建立HPLC-DAD定量体系：以80%乙醇为提取溶剂，优化样品量与色谱条件；按国际人用药品注册技术协调会（ICH）Q2(R1)指南验证特异性、线性、精密度、检测限（LOD）、定量限（LOQ）与回收率；通过双因素方差分析（ANOVA）评价采收季节与组织部位对含量的影响。

研究结果

3.1 芝麻素与细辛素的提取

对比甲醇与80%乙醇的提取效率，80%乙醇在所有组织中均获得更高色谱响应且基质干扰更少，最终确定根取样100 mg、花/叶/茎取样150 mg，以10 mL 80%乙醇浸泡5 min后涡旋1 min，过滤定容后进样。

3.2 色谱条件优化

经流动相组成、流速、柱温等参数筛选，确定最优条件为：Zorbax Eclipse AAA反相柱（4.6×150 mm，5 μm），流动相甲醇:0.1%冰乙酸（60:40，v/v），流速1.2 mL/min，柱温30°C，进样量20 μL，运行时间28 min，二极管阵列检测器（DAD）检测波长287 nm。在此条件下，芝麻素与细辛素保留时间分别为12.39±0.01 min与14.67±0.01 min，光谱相似度指数分别达985804与998939，无基质共洗脱干扰。

3.3 方法学验证

特异性通过保留时间与紫外光谱匹配确认；线性范围1.8–21.6 μg/mL，相关系数r²=1.0000；日内RSD为2.37%–4.57%（芝麻素）与2.53%–5.37%（细辛素），日间RSD为2.37%–4.57%与2.55%–5.37%；LOD分别为3.87 ng/mL与5.38 ng/mL，LOQ分别为12.91 ng/mL与17.96 ng/mL；加标回收率为92.40%–98.80%与91.20%–99.87%，符合定量分析要求。

3.4 不同采收期植株的含量分布

夏季采收植株的两种木脂素含量显著高于春季（p<0.05），且存在显著的组织部位×季节交互效应。根中含量最高：夏季根芝麻素平均845.55 μg/g干样，细辛素1701.51 μg/g干样；春季根分别为601.29 μg/g与1044.40 μg/g。花、叶、茎含量依次递减，茎中最低（夏季茎芝麻素148.90 μg/g，细辛素210.38 μg/g）。含量差异可能与夏季高温促进次生代谢产物合成有关。

讨论与结论

本研究首次建立了加州茴根草全株芝麻素与细辛素的专属HPLC-DAD定量方法，验证了方法的准确性与适用性，填补了该物种非挥发性活性成分分析的空白。研究明确根是目标木脂素的主要药用部位，且夏季采收可最大化活性成分产量。结论指出，该方法操作简便、成本低廉，可为加州茴根草的质量控制、资源开发及药理研究提供标准化分析工具，支持其作为潜在天然药物原料的应用。